【摘要】：第一部分孤獨癥譜系障礙兒童腸道癥狀及腸道菌群與行為關(guān)系1背景:腸道癥狀及腸道菌群紊亂在孤獨癥譜系障礙(autism spectrum disorder,ASD)中常見,且腸道可以通過腸腦軸影響ASD的核心癥狀。目的:探索本地區(qū)ASD兒童胃腸道(gastrointestinal,GI)癥狀特點,GI癥狀與行為相關(guān)關(guān)系,以及無GI癥狀A(yù)SD兒童的相關(guān)腸道菌群;同時探索ASD最突出GI癥狀亞型兒童的行為損害特點及相關(guān)腸道菌群改變。方法:孤獨癥癥狀使用孤獨癥行為量表(autism behaviour checklist,ABC),兒童孤獨癥評估量表(childhood autism rating scale,CARS),社交反應(yīng)量表(social responsiveness scale,SRS)進行評定,孤獨癥社交行為相關(guān)生物學指標使用CD38和視黃酸受體相關(guān)孤兒受體α(acid-related orphan receptor alpha,RORA)基因作為標志,引用國外(6-GI severity index,6-GSI)問卷作為GI癥狀評估工具。183例ASD兒童和66例CON兒童納入橫斷面調(diào)查,完成上述指標,比較兩組間GI癥狀差異。分析ASD兒童各GI癥狀與ABC、CARS、SRS、CD38和RORA基因表達水平的相關(guān)關(guān)系。分析ASD最突出GI癥狀兒童與無GI癥狀兒童行為差異。將收集到大便的ASD兒童按最突出GI癥狀、ASD無GI癥狀、對照組無GI癥狀進行分層,各分層中隨機抽取24例,分別組成ASD+最突出GI癥狀、ASD-GI、CON-GI組,使用Illumina Mi Seq二代測序進行菌群分析,探索ASD+最突出GI癥狀組與ASD-GI,ASD-GI與CON-GI的菌群組成差異。結(jié)果:ASD較CON而言,GI總問題(52.46%VS.36.36%)及便秘(33.33%VS.15.15%)患病率顯著增高(P均0.05),校正混雜因素后ASD較CON GI總問題(1.08±1.44 VS.0.68±0.98)及便秘得分(0.40±0.62 VS.0.17±0.41)顯著增高(校正P均0.05)。ASD兒童GI癥狀與ABC、CARS、SRS量表得分之間無顯著相關(guān)(P均0.05)。ASD兒童RORA基因表達量與GI癥狀總得分(相關(guān)系數(shù)=-0.21,P=0.0053)、便秘得分(相關(guān)系數(shù)=-0.18,P=0.0184)顯著負相關(guān),CD38基因表達量與GI總得分及各GI癥狀得分無顯著相關(guān)(P均0.05)。ASD有便秘比ASD無GI癥狀兒童ABC、CARS、SRS量表得分無顯著差異(P均0.05),RORA基因表達顯著降低(P=0.0075),CD38有降低趨勢但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。隨機抽樣菌群亞組分析,LEf SE分析顯示ASD-GI較CON-GI顯著優(yōu)勢菌群為Prevotella、Bifidobacterium、Lactobacillales、Streptococcus、Erysipelotrichaceae等。經(jīng)過Wilcoxon秩和檢驗及多重假設(shè)檢驗校正分析,顯著優(yōu)勢菌群為Coriobacteriia、Coriobacteriales、Erysipelotrichales、Pseudomonadales。LEf SE分析顯示ASD+便秘較ASD-GI兒童顯著優(yōu)勢菌群為Prevotellaceae、Prevotella、Paraprevotella、Megasphaera、Christensenellaceae;相對豐度顯著下降的菌群為Eggerthella。經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗以及多重假設(shè)檢驗校正分析,ASD+便秘與ASD-GI間顯著差異菌群沒有找到。結(jié)論:ASD較CON GI癥狀顯著,GI癥狀與社交行為相關(guān)生物指標相關(guān),Lactobacillales、Streptococcus、Bifidobacterium等在ASD-GI兒童中顯著升高。便秘在ASD兒童GI癥狀中居首位,且ASD便秘亞型兒童伴隨更多社交行為相關(guān)生物指標損害,尚未發(fā)現(xiàn)ASD便秘亞型相關(guān)的腸道菌群,需進一步研究。第二部分維生素A與孤獨癥譜系障礙兒童腸道癥狀、腸道菌群及行為的關(guān)系背景:第一部分研究發(fā)現(xiàn)ASD GI癥狀常見,且伴隨腸道菌群改變,這可能加重孤獨癥社交行為相關(guān)生物學指標的損害。維生素A(vitamin A,VA)在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育,腸道機械屏障、免疫屏障、生物屏障方面均有一定調(diào)節(jié)作用。目的:此部分研究旨在探索VA在ASD腸道癥狀、腸道菌群及行為方面的作用。方法:VA使用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)測定,孤獨癥癥狀使用ABC、CARS、SRS量表進行評定,孤獨癥社交行為相關(guān)生物學指標使用CD38和RORA基因作為標志,6-GSI問卷作為GI癥狀評估工具。首先,橫斷面調(diào)查的參與者同第一部分ASD兒童,其接受血漿VA水平、腸道癥狀、ABC、CARS、SRS、CD38和RORA基因表達水平的評估及測定。對VA與GI癥狀、ABC、CARS、SRS、CD38和RORA基因表達水平的相關(guān)關(guān)系進行分析。然后,建立64例ASD兒童的隨訪隊列,完成VA大劑量20萬IU干預(yù),6月后隨訪。比較干預(yù)前后血漿VA水平、GI癥狀,ABC、CARS、SRS、CD38和RORA基因表達水平的差異。對64例中完成大便收集的20例兒童進行腸道Illumina Mi Seq二代測序菌群分析,了解VA干預(yù)前后腸道菌群差異。結(jié)果:ASD患者中VA與GI總得分、大便性狀改變得分顯著負相關(guān)(γs=-0.15,γs=-0.18,P=0.0449,P=0.0268)。VA與孤獨癥癥狀量表ABC、CARS、SRS得分無顯著關(guān)系(全部P0.05)。VA與孤獨癥社交行為相關(guān)生物學指標CD38和RORA基因表達量顯著正相關(guān)(γs=0.30,γs=0.21,P=0.0001,P=0.0097)。VA干預(yù)6月后,64例隊列兒童原有GI總問題,便秘、腹瀉、大便氣味改變等癥狀好轉(zhuǎn)(全部P0.05);血漿VA,CD38和RORA基因表達水平顯著升高(全部P0.05);ABC、CARS、SRS得分無顯著差異(全部P0.05)。20例腸道菌群分析兒童,LEf SE和Wilcoxon秩和檢驗均發(fā)現(xiàn),VA干預(yù)6月后,Bacteroidetes/Bacteroidia/Bacteroidales(門綱目水平)相對豐度顯著增加,Actinobacteria/Bifidobacteriales/Bifidobacteriaceae/Bifidobacterium(綱目科屬水平)相對豐度顯著降低。結(jié)論:VA對ASD兒童部分GI癥狀及孤獨癥社交行為相關(guān)生物學指標CD38及RORA有改善作用,Bacteroidetes/Bacteroidales可能是VA參與調(diào)解ASD的特異菌群,VA對ASD核心癥狀的作用需進一步大樣本隨機對照研究去驗證。
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圖 1 課題假設(shè)圖ig 1 Scheme of the research hypothesis ASD GI 癥狀、腸道菌群及行為的腸道菌群，改善 ASD 行為。一共分系障礙兒童腸道癥狀及腸道菌群與卷對 ASD、CON 進行比較，了解 采用孤獨癥行為量表（autism behaildhood autism rating scale, CARS），）及孤獨癥行為相關(guān)生物學指標 CDorphan receptor alpha, RORA）基因 癥狀與行為相關(guān)關(guān)系；同時進行分無 GI 癥狀兒童的行為差異；將 ASD

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文行為的相關(guān)關(guān)系。第二節(jié)為 VA 作用于 ASD 兒童腸道癥狀、腸道菌群及行為瞻性隊列研究。將第一部分納入的 ASD 兒童進行 VA20 萬單位補充，6 月后。比較干預(yù)前后 VA、GI 癥狀、腸道菌群及孤獨癥行為的差異，，探討 VA 是否通過調(diào)節(jié) ASD GI 癥狀及腸道菌群，影響 ASD 行為，同時找到 ASD 中 VA 調(diào)特異腸道菌群。技術(shù)路線第一部分：孤獨癥譜系障礙兒童腸道癥狀及腸道菌群與行為關(guān)系
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R749.94

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 春婷,李廷玉,劉友學,瞿平;邊緣型維生素A缺乏對幼鼠學習記憶的影響及干預(yù)效果[J];中華兒科雜志;2005年07期

本文編號：2685602