【摘要】：腎臟發(fā)育的研究已逐漸成為腎臟病領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)，闡明腎臟發(fā)生發(fā)育的機(jī)制一方面有助于揭示先天性腎臟發(fā)育不良的機(jī)理，另一方面也有助于理解后天性腎臟疾病發(fā)生進(jìn)展的病理生理過程，從而為腎臟病的診治提供新的思路。 近年來學(xué)者們研究的焦點(diǎn)在腎臟發(fā)育的早期階段，著重研究腎臟早期分化基因表達(dá)差異的變化。迄今為止，國內(nèi)外未見針對腎臟后期發(fā)育階段來篩選腎臟發(fā)育相關(guān)基因的報(bào)道。研究表明，鼠類腎小球數(shù)目于生后7天才發(fā)育完畢，生后21天腎髓質(zhì)始發(fā)育完善。 為了更好地探討腎臟后期發(fā)育的分子機(jī)制，本研究利用生后發(fā)育這個(gè)時(shí)間窗口，從腎臟后期發(fā)育角度出發(fā)來篩選腎臟發(fā)育相關(guān)基因。 第一部分 大鼠腎臟發(fā)育相關(guān)基因差減文庫的構(gòu)建及驗(yàn)證 目的：分離大鼠腎臟發(fā)育相關(guān)基因，構(gòu)建雙向差減文庫并驗(yàn)證。 方法：分別以新生大鼠腎臟組織為檢測組(tester)、生后21天腎臟為驅(qū)逐組(driver)，進(jìn)行正向SSH；以生后21天腎臟為tester、新生大鼠腎臟組織為driver，進(jìn)行反向SSH。經(jīng)過總RNA的提取、mRNA的純化、反轉(zhuǎn)錄、酶切、接頭連接、2輪差減雜交和2輪PCR，獲得正、反向差減雜交產(chǎn)物，將其克隆入質(zhì)粒表達(dá)載體pGEM(?)-T Easy載體，轉(zhuǎn)入XL2-Blue MRF′Uitracompetent Cells以擴(kuò)增，克隆，測序，生物信息學(xué)分析，并隨機(jī)挑選部分基因用RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證其差異表達(dá)。結(jié)果：(1)構(gòu)建了2個(gè)分別含215和142個(gè)重組子的正、反向差減文庫，插入片段大小約200bp-600bp。(2)對測序結(jié)果進(jìn)行初步生物信息學(xué)分析，359個(gè)差異表達(dá)克隆中，，有15個(gè)未知序列、13個(gè)蛋白未知序列、7個(gè)假想蛋白、其他的經(jīng)分析代表已知功能的獨(dú)立基因，對這些已知功能的差異表達(dá)基因進(jìn)行分類發(fā)現(xiàn)主要以發(fā)育相關(guān)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)、能量代謝相關(guān)及轉(zhuǎn)錄因子、核蛋白、骨架蛋白等為主。(3)
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R726.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 李鑫,王秀琴,趙立群,周傳農(nóng),吳e

本文編號(hào)：2685286