【摘要】： 背景和目的：感染性腦水腫是由于各種腦部或全身疾病所引起的一種共同病理改變，包括血管源性腦水腫和細(xì)胞毒性腦水腫，與疾病的預(yù)后密切相關(guān)。目前由于對(duì)腦內(nèi)水積聚和消除的分子機(jī)制還不十分清楚，以至于對(duì)腦水腫的治療一直缺乏突破性進(jìn)展。近年研究發(fā)現(xiàn)β1整合素(β1 integrin)在腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte,AC)中表達(dá)豐富對(duì)支持營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞及維持血腦屏障(blood-brain barrier,BBB)的完整性具有重要作用；基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在腦缺血后表達(dá)及活性增加，與腦微血管通透性增加，BBB完整性破壞，炎性細(xì)胞侵入和腦水腫明顯相關(guān)。革蘭氏陰性桿菌是嬰幼兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)細(xì)菌感染的常見病原體，目前認(rèn)為其產(chǎn)生的內(nèi)毒素(lipopolysaccharide，LPS)是致病的主要因素，在革蘭氏陰性桿菌感染引起的腦水腫(brain edema,BE)中具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)采用頸內(nèi)動(dòng)脈注射內(nèi)毒素制作腦水腫模型，根據(jù)大鼠腦水腫發(fā)生過程中不同時(shí)間點(diǎn)的病理學(xué)改變、腦組織含水量及伊文思蘭(Evens blue，EB)含量的變化，來研究LPS致感染性腦水腫的發(fā)生發(fā)展規(guī)律；同時(shí)應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)及免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定注射生理鹽水(normal sodium,NS)的對(duì)照組與注射LPS的實(shí)驗(yàn)組不同時(shí)間點(diǎn)β1整合素及其mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，用免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定MMP-2蛋白含量的變化，研究β1整合素及MMP-2在感染性腦水腫中的變化規(guī)律，以及通過對(duì)感染性腦水腫后不同時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量、EB含量、β1整合素及MMP-2表達(dá)變化進(jìn)行相關(guān)性分析，觀察β1整合素及MMP-2與腦水腫發(fā)生發(fā)展時(shí)程的關(guān)系，探討其在感染性腦水腫中的作用，為臨床治療腦水腫提供新的思路。 方法：健康1月齡清潔級(jí)SD大鼠50只，雌雄不限，體重70～100g，隨機(jī)分為兩組。對(duì)照組(NS組)：10只，頸內(nèi)動(dòng)脈注射0.1ml生理鹽水；內(nèi)毒素組(LPS組)：40只，頸內(nèi)動(dòng)脈注射100μg LPS，LPS組按觀察時(shí)間點(diǎn)分為6h、12h、24h和48h 4個(gè)亞組，每組各時(shí)間點(diǎn)均為10只。上述各組有5只不注射伊文思蘭以進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。各組處理后，對(duì)照組于6h、內(nèi)毒素組于6h、12h、24h及48h分批處死，制備腦組織標(biāo)本。采用干濕重法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量，甲酰胺法測(cè)定腦組織EB含量，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腦水腫不同時(shí)間點(diǎn)β1整合素及MMP-2的表達(dá)量，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)β1整合素mRNA的表達(dá)量。結(jié)果統(tǒng)計(jì)采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，所用計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示，多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，兩變量之間相關(guān)關(guān)系行Pearson相關(guān)分析，以p＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：(1)形態(tài)學(xué)變化：與對(duì)照組相比，LPS組HE染色光鏡下可見血管周圍間隙增寬，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。膠質(zhì)細(xì)胞腫脹、體積增大，神經(jīng)元空泡變性、細(xì)胞核壞死。(2)腦組織含水量的變化：與對(duì)照組比較，LPS組在注射LPS后6h，腦組織含水量已經(jīng)開始增加，12h達(dá)高峰，24h仍較NS組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。48h與對(duì)照組相比變化不明顯。(3)腦組織EB含量的變化：與對(duì)照組比較，LPS組在注射LPS后6h，EB含量已經(jīng)開始增加，12h達(dá)高峰。各時(shí)間點(diǎn)均較NS組高，至24h差異有顯著性(p＜0.01)，48h時(shí)仍高于NS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。(4)腦組織β1整合素表達(dá)變化：注射LPS后6h，LPS組腦組織β1整合素表達(dá)即開始下降，隨時(shí)間延長(zhǎng)呈持續(xù)下降趨勢(shì)，48h達(dá)最低點(diǎn)。與NS組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。(5)腦組織β1整合素mRNA表達(dá)變化：注射LPS后6h，LPS組腦組織β1整合素mRNA表達(dá)已下降，且持續(xù)降低于48h達(dá)最低點(diǎn)，與NS組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。(6)腦組織MMP-2表達(dá)變化：注射LPS后6h，LPS組腦組織MMP-2表達(dá)即上調(diào)，于24h達(dá)高峰，隨后表達(dá)逐漸減少。與NS組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。(7)腦組織含水量、EB含量、MMP-2表達(dá)量、β1整合素表達(dá)量及β1整合素mRNA表達(dá)量行相關(guān)性分析：腦組織含水量和EB含量呈正相關(guān)(r=0.755，p＜0.01)；MMP-2表達(dá)量與含水量呈正相關(guān)(r=0.712，p＜0.01)，MMP-2表達(dá)量與EB含量呈正相關(guān)(r=0.891，p＜0.01)；β1整合素表達(dá)量與MMP-2表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.586，p＜0.01)，β1整合素在蛋白水平與mRNA水平表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.813，p＜0.01)。 結(jié)論：(1)經(jīng)幼年大鼠頸內(nèi)動(dòng)脈注射LPS可以建立起穩(wěn)定、可靠的感染性腦水腫實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，各�?shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，腦組織含水量增加，血腦屏障通透性增加。形態(tài)學(xué)觀察到血管源性腦水腫和細(xì)胞毒性腦水腫病理改變。(2)大鼠頸內(nèi)動(dòng)脈注射LPS后，β1整合素及其mRNA表達(dá)的變化規(guī)律是：LPS注射后6hβ1整合素及其mRNA表達(dá)即明顯減少并呈持續(xù)下降趨勢(shì)，至48h仍低于12h組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明β1整合素參與了腦水腫的發(fā)生發(fā)展，對(duì)血腦屏障的完整性有保護(hù)性作用。(3)大鼠頸內(nèi)動(dòng)脈注射LPS后，MMP-2表達(dá)的變化規(guī)律是：LPS注射后6h MMP-2表達(dá)即明顯增加并持續(xù)上升，在注射后24h表達(dá)達(dá)高峰，至48h仍高于對(duì)照組，，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明MMP-2參與了腦組織含水量的增加及血腦屏障的破壞過程。(4)LPS組腦組織含水量、EB含量、MMP-2表達(dá)量、β1整合素表達(dá)量及β1整合素mRNA表達(dá)量相關(guān)性分析：LPS組腦組織含水量和EB含量呈正相關(guān)，提示腦水腫的發(fā)生與血腦屏障的破壞有關(guān)；β1整合素和MMP-2表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)，提示β1整合素下降、MMP-2增加可能影響AC正常形態(tài)功能的維持，與血腦屏障通透性增加有關(guān)；MMP-2表達(dá)量與含水量呈正相關(guān)，β1整合素表達(dá)量隨腦水腫加重而逐漸下降；提示二者參與了腦水腫的形成。
【圖文】：

整合素mRNA灰度值與Ns組比較“尸 <0.01;免疫組化檢測(cè)MMP一2蛋白含量，LPs組與Ns組比較△P<0.ol4.各組大鼠腦組織pl整合素含量的變化(見表2、圖1、附圖11一巧)光鏡下可見NS組腦組織pl整合素表達(dá)成陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞主要為棕黃色顆

圖1各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦組織pl整合素表達(dá)變化。 F191Changeofp1integrinProteinexPressioninbraintissueafterinjectingLPS.5.各組大鼠腦組織pl整合素mRNA表達(dá)變化(見表2、圖2、附圖16)Rl’ -PCR反應(yīng)后，瓊脂糖凝膠電泳250bp處清晰可見亮度不同的條帶，與NS組比較LPS組腦組織Dl整合素 mRNA表達(dá)水平在不同時(shí)間點(diǎn)均降低，并隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸下降。LPS組各時(shí)間點(diǎn)與NS組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。組別..NS.LpS 22321500050800素合整氏三刀Z>怪值灰哈時(shí)間(時(shí)圖2各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)腦組織pl整合素mRNA變化。 F192Changeofp1integrinmRNAexPressioninbraintissueafterinjeetingLPS(Rl’ -PCR).
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R748

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李玉勤;王懷立;禚志紅;樊香;田培超;;水通道蛋白4在感染性腦水腫大鼠腦組織中變化的意義[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2006年18期

2 禚志紅,趙曉明,王懷立,高鐵錚;巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2在脂多糖致大鼠腦水腫中的表達(dá)[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2005年04期

本文編號(hào)：2675507