發(fā)布時(shí)間：2020-05-16 13:59

【摘要】：目的 建立成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)體外培養(yǎng)和擴(kuò)增的方法,建立穩(wěn)定的MSCs體外培養(yǎng)擴(kuò)增體系。觀察MSCs在腹腔注射后能否通過新生大鼠血腦屏障進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)。觀察MSCs在血腦屏障中的最佳穿透時(shí)間以及缺氧缺血性腦病(HIE)后注射MSCs進(jìn)行治療的最佳時(shí)間。觀察MSCs在腦組織的分布特點(diǎn)及分化特性,并觀察新生大鼠HIE對(duì)MSCs透過率的影響。在藥物輔助干預(yù)下,觀察MSCs在腦組織的分布特點(diǎn)及分化特性是否有所更改。 方法 取正常成人骨髓30ml,采用密度梯度離心法體外擴(kuò)增MSCs,移植前48小時(shí)加入5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷標(biāo)記MSCs。Rice法建立新生Wistar大鼠HIE模型,2h后分別經(jīng)腹腔注射3×10~6MSCs細(xì)胞懸液0.4ml(n=8)和加用復(fù)方丹參注射液0.4ml(n=2)以及注射單純的Brdu標(biāo)記液0.4ml(n=5),對(duì)照組采用同齡正常Wistar大鼠分別經(jīng)腹腔注射3×10~6MSCs細(xì)胞懸液0.4ml(n=8)和單純的Brdu標(biāo)記液0.4ml(n=5)。移植后分別于24h、3天、14天、25天取大腦做石蠟切片,SP免疫組化DAB顯色檢測(cè)并計(jì)數(shù)進(jìn)入腦組織的MSCs,觀察其穿過血腦屏障的最佳時(shí)間以及主要分布特點(diǎn),通過NSE、NF、GFAP的檢測(cè),觀察其向神經(jīng)細(xì)胞分化的能力,通過CD44的檢測(cè)證明神經(jīng)細(xì)胞是由人源性的間充質(zhì)干細(xì)胞所分化。HIE模型建立后再于48h經(jīng)腹腔注射3×10~6MSCs細(xì)胞懸液0.4ml
【圖文】：

圖12傳代培養(yǎng)的MSCs表面抗原標(biāo)志:造血干細(xì)胞標(biāo)志抗原CD34、異基因移植時(shí)免疫排斥反應(yīng)發(fā)生的主要位點(diǎn)HLAn類分子HLA一DR均為陰性圖13傳代培養(yǎng)的MSCs表面抗原標(biāo)志:纖連蛋白和透明質(zhì)酸受體CD44為陽性，其為粘附細(xì)胞外基質(zhì)，，T細(xì)胞活化，淋巴細(xì)胞歸巢受體

培養(yǎng)的MSCs表面抗原標(biāo)志:T淋巴細(xì)胞表面抗原CD3為培養(yǎng)的MSCs表面抗原標(biāo)志:造血干細(xì)胞標(biāo)志抗原CD34、疫排斥反應(yīng)發(fā)生的主要位點(diǎn)HLAn類分子HLA一DR均為
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2666840