【摘要】： 目的重癥肌無力(MG)是一種自身免疫性疾病(AID),目前它的治療方法有很多,而糖皮質(zhì)激素仍是一種有效而主要的治療方法,研究發(fā)現(xiàn),糖皮質(zhì)激素的藥理作用是通過與GR高親和力結(jié)合而介導(dǎo),GR是GC發(fā)揮生理及藥理作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié),GR的含量直接影響機體對GC的反應(yīng),而熱休克蛋白90(HsP 90)是GR的重要伴侶蛋白。本研究主要通過研究重癥肌無力患兒在經(jīng)過糖皮質(zhì)激素治療前后其受體及HSP90α、β的改變,探討熱休克蛋白90(HsP 90αβ)和糖皮質(zhì)激素受體(GRαβ)在糖皮質(zhì)激素敏感型、依賴型兒童重癥肌無力中的表達情況及其與患兒激素敏感性的關(guān)系 方法 1.收集正常組(17名)及患者SS組(19名)、SD組(3名)臨床資料并分析; 2.處理全血:用人淋巴細胞分離液分離MG組、健康對照組外周血單個核細胞(PBMC):一部分細胞提取RNA,合成cDNA用于做RT-PCR;另一部分細胞滴片后用于做免疫細胞化學(xué); 3.免疫細胞化學(xué)(ICC)法觀察健康對照組、GC治療前組、GC治療后組PBMC中GRα、β和HSP90α、β表達情況; 4.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測PBMC中GRα、β和HSP90α、β,設(shè)立健康對照組、GC治療敏感組、GC治療依賴組,每組抽血3ml,選用RT-PCR方法測定上述指標; 結(jié)果 1. (1)激素敏感組、激素依賴組治療前GRα、GRβ陽性細胞及mRNA表達均高于對照組,差異有顯著性(P0.05),激素敏感組激素依賴組之間比較,差異無顯著性(P0.05);(2)經(jīng)激素治療后,激素敏感組GRα、GRβ陽性細胞及mRNA和激素依賴組GRα陽性細胞及mRNA表達恢復(fù)正常,但激素耐藥組GRβ表達仍高于正常組,差異有顯著性(P0.05);(3)激素敏感組治療后GRα、GRβ陽性細胞及mRNA表達均有下降,其中GRβ陽性細胞及mRNA表達量治療后較治療前下降,差異有顯著性(P0.05);(4)激素依賴組治療后GRα、GRβ陽性細胞及mRNA表達下降,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05) 2.(1)治療前激素敏感組、激素耐藥組HSPα、HSPβ陽性細胞及mRNA表達均高于對照組,差異有顯著性(P〈0.05);而激素敏感組,激素耐藥組HSPα、HSPβ陽性細胞及mRNA表達差異無顯著性(P0.05)。(2)治療后激素敏感組,激素依賴組HSPα陽性細胞及mRNA與對照組比較仍升高,差異有顯著性(P0.05);而HSPβ陽性細胞及mRNA表達有下降,其中敏感組經(jīng)治療后與正常組差異無顯著性(P0.05),激素依賴組治療后與對照組比較仍高于正常組,差異有顯著性(P0.05);(3)敏感組治療后HSPαβ陽性細胞及mRNA表達均下降,但前后比較差異無顯著性(P0.05);(4)激素依賴組治療后HSPα陽性細胞及mRNA表達較治療前升高、而HSPβ陽性細胞及mRNA表達下降,但差異無顯著性。 結(jié)論 1.兒童重癥肌無力患者絕大多數(shù)對激素治療敏感,在我們的病人中,未發(fā)現(xiàn)對激素抵抗者,激素依賴患兒僅有3例(占13.6%)。 2.激素敏感組,激素依賴組GRα、GRβ陽性細胞及mRNA在GC治療前均明顯高于健康對照組,推測MG患者PBMC內(nèi)GRα、GRβ陽性細胞及mRNA表達異常與MG的發(fā)病有關(guān),GRα增高可能與轉(zhuǎn)運受阻或其功能結(jié)構(gòu)異常有關(guān),而GRβ增高可抑制GRα攜帶GC轉(zhuǎn)運入細胞核發(fā)揮藥理學(xué)作用;用GC治療后,激素敏感組GRα、GRβ陽性細胞及mRNA表達均下降,與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,而激素依賴組GRα陽性細胞及mRNA表達恢復(fù)正常,但激素耐藥組GRβ陽性細胞及mRNA表達仍有增高,與正常組比較有統(tǒng)計學(xué)意義;同時敏感組GRβ治療后較治療前有下降,而耐藥組GRβ治療后無明顯下降,因此我們認為GRβ的高表達抑制或減低GRa對靶基因的激活作用,進而影響GC的基因調(diào)控作用,可能正是激素耐藥的原因所在。 3. HSP90α、β在GC治療前后均高于對照組,推測MG患兒處于應(yīng)激狀態(tài),它的增高與HSP90在炎癥等病理狀態(tài)下應(yīng)激性增加有關(guān),而HSP90的表達異常增加可能在一定程度上影響了GR功能的正常發(fā)揮及GC生理學(xué)效應(yīng)。在激素敏感組經(jīng)激素治療后HSP90β的表達與正常組無差異,而激素依賴組HSP90β仍高于正常組,因此我們考慮可能是HSP90β導(dǎo)致GR與GC結(jié)合困難或HSP90與GR解離困難,使GR無法很好發(fā)揮與GC的有效結(jié)合,從而影響GC調(diào)節(jié)的基因轉(zhuǎn)錄作用,導(dǎo)致患兒對GC依賴。
【圖文】：

圖 1 對照組 GRα免疫組化圖片（40×） 圖 2 敏感組治療前 GRα免疫組化圖片（40×）Fig 1 GRα of normal group by ICC（40×） Fig 2 GRα of GC Sensitive grouppre-treatment by ICC（40×）

圖 1 對照組 GRα免疫組化圖片（40×） 圖 2 敏感組治療前 GRα免疫組化圖片（40×）Fig 1 GRα of normal group by ICC（40×） Fig 2 GRα of GC Sensitive grouppre-treatment by ICC（40×）
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R746.1

【參考文獻】

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本文編號：2663560