【摘要】： 第一部分：胞壁酰二肽對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞體外擴(kuò)增的影響 目的探討胞壁酰二肽(MDP)對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞(DC)體外擴(kuò)增及成熟的影響。 方法采用Ficoll-Hypaque法分離急性白血病患兒骨髓單個(gè)核細(xì)胞,對(duì)照組以含10%FCS的RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)單個(gè)核細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組分為3個(gè)亞組：1組：MDP組;2組：細(xì)胞因子組；3組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP組,分別誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞。光學(xué)顯微鏡下觀察每日細(xì)胞生長(zhǎng)情況及細(xì)胞形態(tài),培養(yǎng)第8天,計(jì)數(shù)各組細(xì)胞數(shù)量,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞免疫表型。 結(jié)果①培養(yǎng)第8天,對(duì)照組細(xì)胞數(shù)為(0.85±0.23)×105/L,實(shí)驗(yàn)1組、2組、3組細(xì)胞數(shù)分別為(2.31±0.24)×105/L、(3.26±0.37)×105,L及(4.16±0.34)×105/L,均明顯高于對(duì)照組(t分別為9.82、12.35、18.03,p均0.01)；1組低于2組及3組(t分別為4.81、7.26,p均0.01)；3組明顯高于2組(t=4.00,p0.01)。②細(xì)胞免疫表型顯示：對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、2組及3組的HLA-DR+細(xì)胞比例分別為(19.98±3.74)%、(37.24±4.32)%、(58.81±2.08)%及(77.48±5.57)%,1組明顯高于對(duì)照組(t=6.75,p0.01),而低于2組、3組(t分別為10.06、12.76,p均0.01)：3組明顯高于2組(t=7.02,p0.01)。對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、2組及3組的CD1a+細(xì)胞比例分別為(11.46±2.43)%、(28.71±6.64)%、(46.92±4.78)%及(57.03±3.07)%,1組明顯高于對(duì)照組(t=5.46,p0.01),而低于2組、3組(t分別為4.98、8.66,p均0.01);3組明顯高于2組(t=3.98,p0.01)。對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)1組、2組及3組的CD83+細(xì)胞比例分別為(13.05±5.70)%、(36.32±5.61)%、(54.95±7.83)%及(75.70±6.67)%,1組明顯高于對(duì)照組(t=6.51,p0.01),而低于2組、3組(t分別為4.32、10.10,p均0.01)；3組明顯高于2組(t=6.68,p0.01)。 結(jié)論1.各組均得到一定數(shù)量的DCs,MDP組明顯低于細(xì)胞因子組,細(xì)胞因子聯(lián)合MDP組明顯高于MDP組和細(xì)胞因子組,提示MDP具有促進(jìn)急性白血病患兒骨髓DC增殖的作用,與細(xì)胞因子聯(lián)合作用更強(qiáng)。 2.MDP組CD83+, CD1a+及HLA-DR+表達(dá)明顯高于對(duì)照組,但低于細(xì)胞因子組,細(xì)胞因子聯(lián)合MDP組明顯高于MDP組和細(xì)胞因子組,提示MDP具有促進(jìn)急性白血病患兒骨髓DC成熟的作用,與細(xì)胞因子聯(lián)合作用更強(qiáng)。 第二部分：胞壁酰二肽對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞功能的影響 目的探討胞壁酰二肽(MDP)對(duì)兒童急性白血病骨髓樹突狀細(xì)胞(DC)功能的影響。 方法應(yīng)用Ficoll-Hypaque法分離急性白血病患兒骨髓單個(gè)核細(xì)胞,對(duì)照組用細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)DC；實(shí)驗(yàn)組分為5個(gè)亞組：1組：MDP組(102ug/l)；2組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP (10ug/l)組；3組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP (102ug/l)組；4組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP (103ug/l)組；5組：細(xì)胞因子聯(lián)合MDP (104ug/l)組,分別誘導(dǎo)培養(yǎng)DC,培養(yǎng)第9天收獲各組DC,將DC與兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病同種異體骨髓T淋巴細(xì)胞混合反應(yīng)96h,觀察淋巴細(xì)胞的增殖情況,ELISA方法檢測(cè)上清液中IL-12. IFN-γ含量;經(jīng)HL-60抗原致敏后的DC與培養(yǎng)第7天的骨髓T淋巴細(xì)胞及HL-60細(xì)胞共同孵育72h,MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的殺傷活性。 結(jié)果1.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯示：①T細(xì)胞擴(kuò)增指數(shù)：當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為1×103時(shí),對(duì)照組與1組、2組比較均無(wú)顯著性差異(p0.05)；3組、4組、5組均明顯高于對(duì)照組(t分別為7.37、10.10、13.53,p均0.01),亦明顯高于1組(t分別為8.49、10.24、13.39,p均0.01)。當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為1×103至1×104,各組T細(xì)胞的擴(kuò)增指數(shù)均增加,3組、4組、5組明顯高于對(duì)照組及1組(p均0.01),2組與對(duì)照組、1組比較無(wú)顯著性差異(p0.05)。②T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子：當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為5×104時(shí),對(duì)照組與1組、2組IL-12含量的比較均無(wú)顯著性差異；3組、4組、5組明顯高于對(duì)照組(t分別為8.31、10.63、12.16,p均0.01),亦明顯高于1組(t分別為8.25、10.61、11.90,p均0.01)。對(duì)照組與1組、2組IFN-γ含量的比較均無(wú)顯著性差異；3組、4組、5組明顯高于對(duì)照組(t分別為9.21、12.62、15.38,p均0.01),亦明顯高于1組(t分別為9.59、12.77、15.66,p均0.01)。2.殺瘤活性結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)各組殺傷HL-60細(xì)胞活性均較對(duì)照組顯著增強(qiáng)(t分別為5.24、10.97、15.98、18.19、22.69,p均0.01)；當(dāng)MDP濃度由102ug/l遞增至104ug/l,2組、3組、4組、5組組間比較,殺傷活性逐漸增加(t23=3.79、t24=7.34、t25=10.32、t34=3.75、t35=7.38、t45=3.50,p均0.01),以5組殺傷HL-60細(xì)胞活性最強(qiáng)。 結(jié)論1.經(jīng)MDP誘導(dǎo)后的DC,在1×103即能刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖,當(dāng)刺激細(xì)胞數(shù)為1×103至1×104,淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)增強(qiáng)；MDP組與細(xì)胞因子組比較無(wú)明顯差異；當(dāng)MDP≥102ug/l時(shí),與細(xì)胞因子聯(lián)合效果明顯。提示當(dāng)MDP誘導(dǎo)后的DC數(shù)量≥1×103時(shí),即能促進(jìn)T細(xì)胞的增殖,且有MDP濃度依賴性。 2.經(jīng)MDP誘導(dǎo)后的DC可促進(jìn)T細(xì)胞分泌IL-12及IFN-γ,與細(xì)胞因子組比較無(wú)明顯差異；當(dāng)MDP≥102ug/l時(shí),與細(xì)胞因子聯(lián)合效果明顯。提示經(jīng)MDP誘導(dǎo)后的DC具有促進(jìn)T細(xì)胞分泌的作用,與細(xì)胞因子聯(lián)合作用更強(qiáng)。 3.實(shí)驗(yàn)各組均有明顯的殺瘤活性,當(dāng)MDP濃度由102ug/l遞增至104ug/l,殺瘤活性逐漸增強(qiáng)。提示MDP能從兒童急性白血病骨髓中誘導(dǎo)出有較強(qiáng)的抗原刺激能力的DC,且有MDP濃度依賴性。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2663071