【摘要】： 第一部分SAP與高氧肺纖維化 目的:新生兒長(zhǎng)時(shí)間吸入高氧可發(fā)生肺纖維化及支氣管肺發(fā)育不良(BPD),已受到廣泛重視,但是高氧在新生兒救治中有重要作用。目前高氧肺纖維化損傷的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。血清淀粉樣物質(zhì)P(SAP)是與纖維化疾病相關(guān)的細(xì)胞因子,本研究采用新生大鼠建立高氧肺纖維化的動(dòng)物模型,動(dòng)態(tài)觀察新生大鼠在高氧暴露后其肺組織的病理改變和外周血SAP水平的變化,了解高氧導(dǎo)致肺纖維化過(guò)程中大鼠外周血SAP的水平變化,探討SAP對(duì)高氧肺纖維化的影響。 方法:60只出生12小時(shí)內(nèi)的清潔級(jí)Wistar大鼠(簡(jiǎn)稱(chēng)新生鼠)作為研究對(duì)象。隨機(jī)分成2組:高氧組和空氣對(duì)照組。每組30只,高氧組置于90%O2,同時(shí)空氣對(duì)照組置于正�？諝庵形桂B(yǎng)。分別于72小時(shí)、7天、14天檢測(cè)新生鼠肺組織病理改變及外周血SAP的表達(dá)。 結(jié)果:高氧暴露72小時(shí)后,光鏡下可見(jiàn)肺組織水腫、充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡內(nèi)有液體滲出及出血;7天時(shí)鏡下見(jiàn)肺間質(zhì)增厚,充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)仍明顯;14天光鏡下見(jiàn)肺組織炎性損傷減輕,但間質(zhì)增厚,成纖維細(xì)胞增生明顯,肺泡腔縮小,肺間質(zhì)被膠原纖維和纖維細(xì)胞替代,形成肺纖維化。大鼠外周血SAP水平在高氧3天時(shí)稍高于空氣對(duì)照組水平,但在高氧7天時(shí)即明顯下降,低于空氣對(duì)照組水平,14天時(shí)其表達(dá)水平繼續(xù)下降,與空氣對(duì)照組差距增大。 結(jié)論:新生鼠吸入高氧后可導(dǎo)致肺纖維化。長(zhǎng)期高氧暴露可導(dǎo)致體內(nèi)SAP水平下降,從而加重新生鼠肺纖維化形成,提示SAP在高氧肺纖維化過(guò)程中起了重要作用。 第二部分重組腺病毒Ad5-SAP的構(gòu)建 目的:構(gòu)建表達(dá)目的基因SAP的重組腺病毒質(zhì)粒Ad5-SAP,轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞HEK293后收獲高滴度的腺病毒感染液。 方法:能夠表達(dá)目的基因SAP的腺病毒質(zhì)粒用同源重組的方法構(gòu)建,首先通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增含有設(shè)定酶切位點(diǎn)的目的基因片斷SAP,然后與腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrace—TO4連結(jié)即定向克隆,再轉(zhuǎn)導(dǎo)入已含有腺病毒骨架質(zhì)粒Adeasy-1的感受態(tài)細(xì)菌BJ-Adeasy,二者在細(xì)菌內(nèi)同源重組產(chǎn)生腺病毒質(zhì)粒Ad5-SAP,最后利用脂質(zhì)體幫助轉(zhuǎn)染入包裝細(xì)胞HEK293,經(jīng)過(guò)乒乓交互感染得到高滴度病毒感染液。 結(jié)果:成功的構(gòu)建腺病毒重組質(zhì)粒Ad5-SAP,收獲的病毒感染液滴度達(dá)2.8x108pfu/ml。 結(jié)論:細(xì)菌內(nèi)的同源重組是一種高效率的構(gòu)建腺病毒質(zhì)粒的方法,我們已成功的構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒Ad5-SAP,為進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。
【圖文】：

隆的 PCR 鑒定讀復(fù)雜模版，靈敏度高，反應(yīng)迅速，目的基因片斷具有堿基突變幾率小較高，，會(huì)增加后序基因測(cè)序的工作加入 SalⅠ和 XbaⅠ酶切位點(diǎn)的接頭dTrace-TO4 相連接。PCR 反應(yīng)結(jié)束后條約 0.7kb 的清晰條帶，如圖 12。

一條約 0.7kb 的清晰條帶，如圖 12。1. SAP gene segment; M. DNA Marker圖 12 SAP 基因 PCR 產(chǎn)物的凝膠電泳鑒定igure 12 SAP PCR products of Gel electrophortrace-SAP 的鑒定 13
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張克君;李德春;;重組腺病毒mIκBα基因的構(gòu)建及體外抑制血管生成的作用[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

2 蘇春霞;段相國(guó);張艷麗;擺茹;陳溥言;;口蹄疫病毒VP1基因重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年05期

3 田長(zhǎng)富,李殿俊,申寶忠,劉旭,李天天;hTNF-α重組腺病毒轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞的體外生物學(xué)特性及體內(nèi)抗腫瘤研究[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2002年02期

4 趙軍,馮躍,孟榮貴,黃盛東;雙自殺基因融合基因重組腺病毒的制備與鑒定[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年01期

5 潘欣,王泳,張珉,趙平,潘衛(wèi),戚中田;內(nèi)皮抑素-血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制因子重組腺病毒對(duì)新生血管的抑制效應(yīng)[J];生物技術(shù)通訊;2003年05期

6 陳s

本文編號(hào)：2660040