【摘要】：背景與目的:呼吸道感染(respiratory tract infection,RTI)是兒童發(fā)病和死亡的一個重要原因。呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、流感病毒(influenza virus,Flu)、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)是病毒性呼吸道感染的病原體。即便運用敏感有效的診斷方法,仍有1/3病例的感染源尚不明確,提示存在未知或尚未被認識的病原體。2001年,van den Hoogen BG從荷蘭呼吸道感染患兒氣道分泌物中分離出一種新的呼吸道病毒。根據病毒學數據、序列同源性和基因結構分析表明該病毒屬于副黏病毒科肺病毒亞科偏肺病毒屬,被命名為人類偏肺病毒(human metapenumovirus,hMPV)。該病毒全球分布與流行,歐洲、北美、南美、澳大利亞、亞洲、非洲等地方先后報道了大量有關hMPV感染的臨床和分子流行病學特征的數據。雖然各個年齡組均可檢測到hMPV感染,嬰幼兒似乎對hMPV特別易感,疾病診斷包括上、下呼吸道感染。目前,尚未有關從化市hMPV感染的臨床與分子流行病學特征的報道。研究從化市hMPV感染的臨床與分子流行病學特征對于了解從化市hMPV感染及防治具有重要的意義。本研究的目的:(1)研究從化市小兒呼吸道hMPV感染的臨床與分子流行病學特征。(2)探討hMPV感染與小兒毛細支氣管炎、支氣管肺炎、支氣管炎、支氣管哮喘的關系。(3)通過對hMPV感染陽性PCR產物進行基因測序及種系進化分析,探討從化市小兒呼吸道感染的hMPV分離株與其他地區(qū)hMPV分離株的同源性及基因分型的差異。(4)了解其他常見呼吸道病毒感染的臨床與分子流行病學特征。材料與方法:(1)標本收集:收集2008年12月至2009年10月從化中心醫(yī)院6歲以下呼吸道感染住院患兒氣道分泌物標本260例。(2)采用巢式聚合酶鏈式反應(nested PCR)檢測呼吸道分泌物hMPV感染,兩輪PCR擴增產物(hMPV-1, hMPV-2)經2%瓊脂糖凝膠電泳后成像并存檔。(3)采用多重PCR(multiple PCR)檢測呼吸道合胞病毒A、B型(RSV-A, RSV-B),流感病毒甲、乙型(Flu-A, Flu-B),副流感病毒1、2、3型(PIV-1, PIV-2, PIV-3),PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳后成像并存檔。(4)隨機挑選7例hMPV-1陽性PCR產物進行基因測序,測序工作由上海英駿生物技術有限公司(invitrogen)完成。(5)所有測序結果與GenBank中的序列進行比對,分析同源性;多重序列比對采用Clustal W軟件;種系進化分析采用DNAStar軟件。 結果:(1)hMPV-1陽性PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳后成像并存檔,陽性標本和陽性對照于450bp～600bp間各出現一條目的條帶,與預期條帶大小一致(462bp);hMPV-2陽性PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳后成像,陽性標本和陽性對照于400bp～500bp間各出現一條目的條帶,與預期條帶大小一致(431bp)。(2)hMPV-1男性陽性標本17例,陽性率9.83% ;女性標本4例,陽性率4.60%。男、女感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(χ~2=2.132,P0.05);hMPV-2男性陽性標本36例,陽性率20.81% ;女性標本12例,陽性率13.79%。男、女感染陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(χ~2=2.132,P0.05)。hMPV-2男、女感染陽性率與hMPV-1比較差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=8.04, P0.05;χ~2=4.41, P0.05)。hMPV-1發(fā)病年齡中年齡6個月組陽性率7.51%;6個月年齡"f1歲組陽性率13.11%,兩個年齡組比較差異無統(tǒng)計學意義;hMPV-2年齡6個月組陽性率13.87%;6個月年齡"f1歲組陽性率31.15%;1歲年齡"f3歲組陽性率20.83%。三個年齡組陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義。hMPV-2發(fā)病年齡中1歲年齡"f3歲組陽性率與hMPV-1比較有顯著性差異(χ~2=5.76, P0.05)。hMPV感染3、4月份發(fā)病率較高,春季高發(fā),發(fā)病高峰期與RSV感染有重疊。(3)hMPV-1陽性標本21例,陽性率為8.08%;hMPV-2陽性標本48例,陽性率為18.46%。兩輪擴增產物陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=54.14, P0.05)。hMPV感染臨床表現以咳嗽和喘息為主;hMPV-1感染患兒喘息癥狀及中性粒細胞百分比(%)與PIV-3感染比較差異有統(tǒng)計學意義(χ~2=4.219,P0.05;t=-2.424,P0.05)。hMPV-2中性粒細胞百分比(N%)與PIV-3比較差異有統(tǒng)計學意義(t = - 2.26, P0.05)。hMPV-1陽性患兒診斷為LRTI,其中毛細支氣管炎12例(57.14%),支氣管肺炎3例(14.29%),支氣管炎6例(28.57%)。hMPV-2陽性患兒診斷包括上、下呼吸道感染。上呼吸道感染表現為喉炎1例(2.08%),下呼吸道感染表現為毛細支氣管炎25例(52.08%),支氣管炎14例(29.17%),支氣管肺炎6例(12.5%),支氣管哮喘2例(4.17%)。(4)其他常見呼吸道病毒感染檢測陽性126例,陽性率為48.46%;RSV-A感染陽性標本18例,陽性率6.92%;RSV-B感染陽性標本27例,陽性率10.83%。RSV陽性標本共45例,總陽性率17.31%。臨床表現以咳嗽、喘息、發(fā)熱、憋氣為主。臨床診斷為LRTI。RSV感染春季高發(fā);Flu-A感染陽性標本4例,陽性率1.54%;Flu-B感染陽性標本10例,陽性率3.85%;Flu陽性標本共14例,總陽性率為5.38%;臨床表現以咳嗽、喘息、發(fā)熱為主。臨床診斷以LRTI為主,其中1例Flu-A陽性患兒診斷為喉炎,2例Flu-B陽性患兒診斷為支氣管哮喘。Flu感染春季高發(fā);PIV-3感染陽性標本67例,陽性率25.77%;未檢測到PIV-1、PIV-2型感染。臨床表現為咳嗽、喘息、發(fā)熱、憋氣、咳痰為主。臨床診斷以LRTI為主,其中2例PIV-3陽性患兒診斷為喉炎。PIV-3感染春季高發(fā);hMPV-1中其他常見病毒混合感染共19例,混合感染率15.08%。其中RSV-B/Flu-B 1例,RSV-B/PIV-3 14例,Flu-A/PIV-3 1例,Flu-B/PIV-3 3例;hMPV-2中其他常見病毒混合感染17例,混合感染率為13.49%。其中RSV-B/Flu-B 1例,RSV-B/PIV-3 12例,Flu-A/PIV-3 1例,Flu-B/PIV-3 3例;兩者比較差異無統(tǒng)計學意義。(5)hMPV-1陽性標本中合并其他病毒感染7例,混合感染率為33.33%,其中hMPV/RSV-B 1例,hMPV/Flu-B 3例, hMPV/PIV-3 3例;未見多重感染;hMPV-2陽性標本中合并其他病毒感染17例,混合感染率為35.42%,其中hMPV/RSV-A 4例, hMPV/RSV-B 1例,hMPV/Flu-B 3例,hMPV/PIV- 3 7例。三重病毒感染hMPV/RSV-B/PIV-3 2例(11.76%)。hMPV-1與hMPV-2病毒混合感染率比較差異無統(tǒng)計學意義。hMPV混合感染患兒臨床表現以咳嗽、喘息為主,臨床診斷為LRTI。(6)hMPV-1陽性PCR產物測序結果與GenBank中序列進行比對,與序列HMPVgz01 (GenBank acession: GQ153651.1)及BJ(GenBank acession: DQ843659.1)局部相似性為98%～100%,具有同源性。多重序列比對及進化樹分析表明7例測序標本基因型均為A型中A2亞型。 結論:(1)從化市hMPV感染臨床及分子流行病學特征:hMPV感染陽性標本48例,感染率為18.46%,感染性別及年齡組無差異。hMPV感染具有明顯季節(jié)性,3、4月份發(fā)病率高,冬、春季高發(fā)。臨床癥狀以咳嗽、喘息為主,臨床診斷為下呼吸道感染,表現為毛細支氣管炎、支氣管肺炎、支氣管炎。hMPV是引起小兒病毒性下呼吸道感染的一種重要病原體。(2)從化市hMPV合并其他病毒感染臨床及流行病學特征:48例hMPV感染陽性標本中,合并其他病毒感染17例,合并感染率為35.42%。臨床表現及流行病學特征與hMPV感染相似。(3)從化市hMPV感染基因測序及種系進化分析:hMPV-1測序結果與HMPVgz01(GenBank accession:GQ153651.1)及BJ1887(GenBank accession:DQ843659.1)局部相似性為98%～100%,具有同源性。種系進化分析表明7例測序標本基因型均為A型中A2亞型。(4)其他常見呼吸道病毒感染臨床及分子流行病學特征:其他常見呼吸道病毒感染陽性標本126例,陽性率48.46%。PIV-3感染率最高,其次是RSV。各種病毒的臨床癥狀與體征相似,發(fā)病季節(jié)交叉,給臨床鑒別與診斷造成困難。
【圖文】：

A B11045171063167010204060801001206月<年齡 6月<=年齡<1歲 1歲<=年齡<3歲 3歲<=年齡<5歲 年齡>5歲男性女性圖1 各年齡組男、女性別分布情況數（人）人年齡分組

各年齡組男、女性別分布情況
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R725.6

【參考文獻】

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本文編號：2645949