【摘要】：第一部分不同類型罕見重癥聯(lián)合免疫缺陷病的產(chǎn)前診斷分析目的:探討不同類型罕見重癥聯(lián)合免疫缺陷病(severe combined immunodeficiency disease,SCID)的產(chǎn)前診斷方法及結(jié)果分析。方法:以重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院2016至2017年進行產(chǎn)前診斷的4個家系5例高危兒為研究對象,回顧性分析進行羊水脫落細胞、臍帶血基因檢測及出生后基因復(fù)核的過程,并通過淋巴細胞計數(shù)、淋巴細胞亞群分析、TCRVβ亞家族克隆譜、TREC及T淋巴細胞增殖試驗對其進行免疫學(xué)功能評估。結(jié)果:(1)4個家系分別為IL-2RG(家系1:c.562CT,p.Q188X;家系2:c.725GA、p.W237X)、RAG1(家系3:c.2168CT,p.A723V;c.2275CT,p.R759C;c.3020AG,p.N1007S)和IL-7Rα(家系4:IVS4+1GA;c.638CT,p.R206X)基因突變,父母一方或雙方為攜帶者;(2)經(jīng)過羊水脫落細胞檢測,5例高危兒中3例為正常基因型,1例為攜帶者,1例為缺陷患兒;(3)3例正�；蛐透呶撼錾蟋F(xiàn)均體健,1例攜帶者進一步行臍帶血檢查、生后基因復(fù)核,以及免疫學(xué)功能評估,均提示正常,與羊水脫落細胞檢測結(jié)果一致。結(jié)論:羊水脫落細胞檢測在SCID的產(chǎn)前診斷中準確性較高,但當(dāng)先證者為復(fù)合雜合突變時,我們在對高危兒進行羊水檢測后額外進行了臍帶血檢測以除外羊水中母體組織細胞污染。X連鎖疾病可同時行性別篩查協(xié)助基因檢測。所有高危兒在出生后均應(yīng)行基因復(fù)核及免疫學(xué)功能評估,以驗證檢測的準確性。第二部分ZAP70缺陷病的臨床、免疫學(xué)特征及基因突變分析目的:詳細描述了中國首例ZAP70缺陷的新型復(fù)合雜合突變,擴展了ZAP70缺陷病的表型譜。方法:該患兒是一名7個月大男孩,于2016年6月在重慶醫(yī)科大學(xué)兒童醫(yī)院住院治療。我們對其外周血單個核細胞(PBMCs)進行了采集,并對淋巴細胞的亞群進行分析,同時對淋巴細胞進行免疫學(xué)功能學(xué)評估。結(jié)果:該患兒有早發(fā)及反復(fù)的感染,但其生長發(fā)育正常,故提示為不典型重癥聯(lián)合免疫缺陷病。同時該患兒具有自身免疫性疾病系列表現(xiàn),包括濕疹樣皮疹、炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)及難治性腹瀉,提示T細胞免疫耐受功能受損。免疫學(xué)分析結(jié)果提示患兒外周血CD8+T細胞選擇性缺失,CD4+T細胞對PHA刺激及CD19+B細胞對PWM刺激均無反應(yīng)。CD4+T細胞亞群分析顯示,患兒的濾泡輔助性T細胞(Tfh)和調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)水平均低于正常對照。對患兒進行基因及蛋白表達分析,發(fā)現(xiàn)ZAP70基因新型復(fù)合雜合突變(c.598-599del CT,p.L200fs X28;c.847CT,p.R283X),ZAP70蛋白檢測提示表達量較正常對照明顯減少。結(jié)論:本文從臨床和免疫學(xué)的角度分析了中國首例ZAP70新型復(fù)合雜合突變患兒的臨床和免疫學(xué)特征。臨床表現(xiàn)為早發(fā)嚴重感染合并嚴重的自身免疫性疾病或過度炎癥的嬰兒,免疫表型為選擇性CD8缺乏,應(yīng)進行ZAP70缺陷病的篩查。
【圖文】：

圖 1.1 4 個 SCID 家系圖譜Figure 1.1 Family trees of four families2.2 高危兒基因檢測結(jié)果2.2.1 羊水脫落細胞基因分析高危兒 1 來自家系 1，高危兒 2 和高危兒 3 來自家系 2，高危兒 4 來自家系 3，高危兒 5 來自家系 4，如圖 1.2 所示，4 例高危孕婦羊水脫落細胞分析為高危兒 1、高危兒 2 和高危兒 3 為正�；蛐吞海呶� 4 為缺陷胎兒，與其先證者基因型完全相同，高危兒 5 為正常攜帶胎兒。缺陷胎兒基因診斷結(jié)果均經(jīng)雙向重復(fù)測序 2 次以上。

22圖 1.2 5 例高危兒基因診斷結(jié)果圖 A 為高危兒 1、2、3、4 羊水脫落細胞基因結(jié)果，高危兒 1、高危兒 2 及高危兒 3 均提示 IL-2RG 相應(yīng)位點無突變，，高危兒 4 提示 RAG1 基因 3 個位點突變（1（）2）（3），與先證者完全相同；圖 B 為家系 4 父母 IL-7Rα相應(yīng)位點基因測序及高危兒 5 羊水脫落細胞、臍帶血和出生后全血基因結(jié)果，提示其為雜合攜帶者，僅攜帶母親來源致病位點Figure 1.2 The sequencing figures of five high-risk fetus2.3 免疫學(xué)功能評估2.3.1 淋巴細胞計數(shù)及淋巴細胞亞群分析
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R725.9

【參考文獻】

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本文編號：2645803