發(fā)布時間：2020-04-28 06:35

【摘要】： 注意缺陷多動障礙(ADHD)是兒童期尤其是學(xué)齡期兒童最常見的行為障礙。ADHD的病因是多方面的,包括生理、心理、社會等因素。本實驗從神經(jīng)生化的角度來尋找病因線索,重點研究單胺類神經(jīng)遞質(zhì)和氨基酸在ADHD發(fā)病中的作用。 本實驗在以下三個方面進(jìn)行了研究:1)建立多種氨基酸同時測定的方法(包括已有和未見文獻(xiàn)報道的可能與ADHD相關(guān)的氨基酸;2)建立與ADHD相關(guān)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物的靈敏準(zhǔn)確的測定方法;3)研究這些神經(jīng)遞質(zhì)及氨基酸在ADHD中的改變,探討ADHD可能的病理生化機(jī)制。論文主要工作如下: 一、建立柱前衍生化-高效液相色譜法測定氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的方法及其評價 所研究的幾種氨基酸由于不含有芳香環(huán)等生色團(tuán),無法直接檢測,因此選用柱前衍生試劑-丹酰氯,先將氨基酸衍生為具有較強(qiáng)紫外和熒光吸收的衍生物,通過測定其衍生產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度對氨基酸進(jìn)行定量分析。 本實驗建立了一種同時快速測定谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸、甘氨酸、�；撬�5種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的高效液相色譜法。采用KromasilC18 (4.6×250mm,5um)為色譜柱,丹酰氯為柱前衍生試劑,以曲唑酮為內(nèi)標(biāo),0.1mol/L醋酸鈉緩沖液:甲醇=58:42,14mmol/L庚烷磺酸鈉溶液為流動相,流速為1ml/min,熒光檢測器檢測,等度洗脫。在1～200mg/L范圍內(nèi),各組分線性關(guān)系良好(r=0.999),每種氨基酸的回收率為80.1%～92.9%。本方法簡便、快速、準(zhǔn)確,可用于腦組織中氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的測定。 二、建立高效液相色譜法測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的方法及其評價 根據(jù)實驗的需要,分別建立了高效液相色譜-熒光檢測法(HPLC-Flu)和丹酰氯柱前衍生化-高效液相色譜法-紫外(Dns-HPLC-UV)測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝物的方法。 HPLC-Flu法是以KromasilC18 (4.6×250mm, 5μm)為色譜柱,0.1mol/L的醋酸鈉溶液:甲醇(體積比10:90)為流動相,用冰醋酸調(diào)pH為5.5,其中含0.2mmol/L乙二胺四乙酸二鈉。流速1.5ml/min,進(jìn)樣量20μl,柱溫為室溫,激發(fā)波長286nm,發(fā)射波長318nm。各待測物的檢出限可達(dá)1.0pmol~3.0pmol,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)分別為2.3%, 2.6%, 3.1%、2.9%、2.7%、1.4%和2.9%(n=5),在2~300pmol范圍內(nèi),各組分線性關(guān)系良好
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R749.94

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本文編號：2643174