【摘要】：目的 分析CHD(Congenital Heart Disease，先天性心臟癇)患兒Aktl及Akt2基因的第1-4個(gè)外顯子(編碼PHD(Plecks~in Homologue Domain，PH結(jié)構(gòu)域))的突變情況，檢測Akt蛋白表達(dá)，期望為進(jìn)一步闡明CHD發(fā)癇的分子機(jī)理提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 選取18例接受手術(shù)治療的CHD患兒作為研究對象，，體外循環(huán)開始前采集外周血分離淋巴細(xì)胞，根據(jù)試劑盒步驟提取基因組DNA(Deoxyribonucleic Acid，脫氧核糖核酸)后，應(yīng)用PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶鏈反應(yīng))擴(kuò)增后進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化及測序，分別篩查分析Aktl以及Akt2基因PHD(第14個(gè)外顯子)的突變情況，Aktl以及Akt2基因序列來源于GenBank(編號(hào)分別為NM001014432和NM 001626)。采用Western blotting(蛋白免疫印跡法)分析患兒外周血淋巴細(xì)胞中Aktl蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 通過測序分析，所有樣本的Aktl以及Akt2基因的PHD部分未發(fā)現(xiàn)突變；在Akt2第1-3個(gè)內(nèi)含子部分未篩查到突變，在Aktl第1-3個(gè)內(nèi)含子部分共篩查到以下5個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)即SNP(Single Nucleotide Polymorphism，單核苷酸多態(tài)性)，檢出率分別為：C15674T(5 6％)，A15756T(72 2％），A19115G(88 9％），C19155T(5 6％)和A19853G(88 9％。將以上結(jié)果與PUBMED數(shù)據(jù)庫已發(fā)表公布Aktl的所有SNP位點(diǎn)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)其中三個(gè)SNP已有報(bào)道，分別為A19853G(PUBMED編號(hào)rs2498797)，C15674T(rs3730358)，C19155T(rsl7846822)；另兩個(gè)未被報(bào)道過新SNP即A15756T和A191 15G。此外，有研究顯示以上SNP中的rs3730358可能影響A／a一』的蛋白表達(dá)水平，并且該sNP已被證實(shí)與精神分裂癥的發(fā)癇相關(guān)。因此我們采用westem blotting方法分析了患兒外周血中Aktl蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在伴有rs3730358多態(tài)性改變的樣本中，Aktl蛋白的表達(dá)水平降低。 結(jié)論轉(zhuǎn)基因及基因敲除小鼠模型已經(jīng)證實(shí)Aktl蛋白是心血管發(fā)育及功能正常的重要調(diào)節(jié)因子，因此本研究中Aktl基因的單核苷酸多態(tài)性改變以及Aktl蛋白表達(dá)水平降低提示Aktl可能參與先天性心臟癇的發(fā)癇過程。且該sNP已被證實(shí)與精神分裂癥的發(fā)癇相關(guān)。因此我們采用westem blotting方法分析了患兒外周血中Aktl蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在伴有rs3730358多態(tài)性改變的樣本中，Aktl蛋白的表達(dá)水平降低。 結(jié)論轉(zhuǎn)基因及基因敲除小鼠模型已經(jīng)證實(shí)Aktl蛋白是心血管發(fā)育及功能正常的重要調(diào)節(jié)因子，因此本研究中Aktl基因的單核苷酸多態(tài)性改變以及Aktl蛋白表達(dá)水平降低提示Aktl可能參與先天性心臟癇的發(fā)癇過程。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R725.4

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