【摘要】：背景:尿道下裂是小兒常見的先天性泌尿生殖畸形,發(fā)病率高,危害性大,但尿道下裂的發(fā)病機制尚不清楚。尿道的胚胎發(fā)育過程和關(guān)鍵環(huán)節(jié)仍存在爭議,尿道板融合過程中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象也有待進一步研究。目的:研究大鼠正常尿道的發(fā)育動力學(xué)及尿道板的融合機制。發(fā)現(xiàn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化證據(jù);探索尿道下裂的發(fā)生機制,為臨床防治尿道下裂提供科學(xué)的實驗依據(jù)。方法:1.健康清潔級SD孕鼠分別在孕15,16,18,19天麻醉后取雄性胎鼠陰莖,掃描電鏡動態(tài)觀察不同孕期的胎鼠陰莖外觀,連續(xù)切片和HE染色觀察尿道縫融合過程,免疫雙標(biāo)及透射電鏡觀察尿道縫形成過程中尿道板上皮細(xì)胞的生化及形態(tài)學(xué)變化。2.健康清潔級SD孕鼠隨機分成3組:對照組,DEHP_(500)暴露組和DEHP_(750)暴露組,在孕12-18天分別給予玉米油、500mg/kg或750mg/kg DEHP,每天灌胃,于孕19天選取雄性胎鼠陰莖。掃描電鏡和HE染色觀察陰莖及尿道縫的發(fā)育,免疫熒光檢測上皮-間質(zhì)的表達,以及Western blot、PCR檢測TGF-β/Smad信號通路的相關(guān)分子TGF-β1,Smad2/Smad3,Snail,Slug,EMT標(biāo)志物E-cadherin,β-catenin,occludin,ZO-1,α-SMA,N-cadherin,Vimentin在尿道縫中的表達。3.在體實驗中,無菌環(huán)境下選取正常孕16天雄性胎鼠陰莖,隨機分為對照組,MEHP暴露組與TGF-β干預(yù)組,分別用PBS、MEHP、MEHP+TGF-β1處理48小時后觀察陰莖生長情況,以及TGF-β/Smad信號通路的相關(guān)分子(同體內(nèi))在尿道縫中的表達。4.選取孕16天胎鼠陰莖隨機分為對照組、DEHP組、TGF-β組和DEHP+TGF-β組,分別用PBS、MEHP、MEHP+TGF-β1處理24小時、MEHP處理24小時后TGF-β1處理24小時,觀察陰莖生長情況。結(jié)果:1.從孕16天起,隨著雙側(cè)的生殖結(jié)節(jié)向中線生長,兩側(cè)的尿道板在中線由底端向尖端逐漸融合形成尿道縫,最終形成尿道。2.在尿道縫形成的過程中,某些細(xì)胞共表達了上皮和間質(zhì)的標(biāo)志物,某些細(xì)胞共表達了上皮和凋亡的標(biāo)志物。在透射電鏡下,某些上皮細(xì)胞與周圍的細(xì)胞間連接退化消失,伸出偽足,最后變成胞核大胞漿稀少的間質(zhì)細(xì)胞,表現(xiàn)出間質(zhì)細(xì)胞特征;某些細(xì)胞核膜皺縮,染色質(zhì)邊集,與周圍的細(xì)胞間連接退化消失,出現(xiàn)凋亡表現(xiàn)。3.與對照組相比,DEHP孕期暴露會導(dǎo)致胎鼠發(fā)生尿道下裂,尿道縫融合受阻,融合過程中TGF-β1,p-Smad2/Smad3,Snail,Slug,間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA,N-cadherin和Vimentin表達減少,上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin,β-catenin,occludin和ZO-1表達增加(P0.05)。在體實驗中,給予TGF-β1干預(yù)后,TGF-β1,p-Smad2/Smad3,Snail,Slug,α-SMA,N-cadherin和Vimentin表達增加,E-cadherin,β-catenin,occludin和ZO-1表達減少(P0.05)。4.MEHP可導(dǎo)致體外培養(yǎng)陰莖發(fā)育障礙,尿道開口更靠近陰莖根部。而TGF-β1因子能部分改善尿道的發(fā)育障礙。結(jié)論:尿道是通過尿道板從底端向尖端逐漸卷曲融合成尿道縫而形成。在融合塑形過程中,出現(xiàn)了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和上皮細(xì)胞凋亡。尿道縫融合過程中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化減少,引起尿道縫融合受阻,從而導(dǎo)致尿道下裂。TGF-β1可以干預(yù)這一過程,防止尿道下裂的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R726.9

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本文編號：2632546