樹突狀細胞在小兒哮喘免疫發(fā)病機制中的作用研究

發(fā)布時間：2020-04-18 17:27

【摘要】： 支氣管哮喘（bronchial asthma）是臨床常見的危害頗大的慢性疾病。哮喘的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且其發(fā)病機制至今仍不明確。近年研究發(fā)現(xiàn)支氣管哮喘最重要的免疫學異常是TH1/TH2細胞比例和功能的失衡。而樹突狀細胞（dendritic cells, DC）是抗原遞呈功能最強的抗原遞呈細胞（Antigen presenting cells, APC），是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能激活初始型T細胞（Na?ve T cells）的APC，其在誘導(dǎo)TH1/TH2型細胞反應(yīng)的平衡和偏移過程中起關(guān)鍵作用。為探討小兒哮喘時DC在誘導(dǎo)TH1/TH2細胞分化中的作用及關(guān)系，本研究通過粒-巨噬細胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colony stimulating factor，GM-CSF），白細胞介素4（Interleukin-4，IL-4）和腫瘤壞死因子(（Tumor necrosis factor-(，TNF-(）聯(lián)合體外培養(yǎng)誘導(dǎo)哮喘患兒外周血單個核細胞（Peripherial blood mononuclear cells ，PBMC）發(fā)育為DC，并觀察其形態(tài)學變化，流式細胞儀對其進行細胞表面分子鑒定，以及檢測其分泌的IL-10、IL-12、IL-18和前列腺素E2（PGE2）等細胞因子水平和DC的免疫誘導(dǎo)功能，為進一步探討DC在小兒哮喘免疫發(fā)病機制及防治中的作用提供新的思路。主要結(jié)果及結(jié)論如下： 1．外周血PBMC中粘附細胞在培養(yǎng)12小時后，可見粘附細胞呈圓形。培養(yǎng)3天后觀察到胞體出現(xiàn)樹突狀突起。第4天后，，細胞大多呈懸浮生長，為典型DC外形，貼壁細胞開始均呈集落樣生長。培養(yǎng)7天后，培養(yǎng)細胞均勻分散在培養(yǎng)基中。至培養(yǎng)第8天時細胞呈DC外形 WP=10 并繼續(xù)增殖。 2．哮喘及健康對照組兒童外周血PBMC誘導(dǎo)的DC均表達DC相關(guān)分化抗原：CD_{1a}、CD_{40}、CD_{80}、CD_{83}、CD_{86}和HLA-DR，同時不具備其它細胞的分化抗原如CD_{14}、CD_{16}、CD_{19}等，哮喘組CD_{86}和HLA-DR較健康對照組均有明顯升高；而CD_{40}較健康對照組有明顯降低。其余CD分化抗原在兩組兒童之間比較無明顯差異。 3．哮喘患兒及健康對照組兒童DC均能刺激自體T淋巴細胞、健康同種異體T淋巴細胞和健康同種臍帶血初始T淋巴細胞強烈增殖。隨刺激細胞數(shù)目的增加其促增殖作用增強。 4．哮喘患兒血漿及DC分泌的IL-10、IL-12水平均顯著降低，與對照組比較差異顯著；哮喘患兒血漿IL-18水平明顯升高，而DC分泌的IL-18水平顯著降低，與對照組比較差異顯著；哮喘患兒血漿及DC分泌的PGE2水平均顯著升高，與對照組比較差異顯著。 5．哮喘患兒血漿和DC分泌的IL12與PGE2存在明顯負相關(guān)；而與CD86等相關(guān)不顯著。綜上，從以上1、2和3點充分說明我們成功的培養(yǎng)出了DC細胞。哮喘患兒可通過其DC表面差異表達CD_{40}、CD_{86}和HLA-DR等協(xié)同刺激分子，從而使其激發(fā)T淋巴細胞的作用增強。哮喘時血漿及DC分泌的IL-10、IL-12水平均顯著降低，血漿IL-18水平升高，DC分泌的IL-18水平降低以及血漿及DC分泌的PGE2水平均明顯升高。導(dǎo)致哮喘時TH1/TH2偏移，使TH2型反應(yīng)亢進，TH1型反應(yīng)不足，造成氣道慢性變態(tài)反應(yīng)性炎癥，氣道高反應(yīng)性而致哮喘發(fā)作。本研究為小兒哮喘免疫發(fā)病機制的研究提供了新的途徑，也為小兒哮喘的防治指出了新的方向。
【圖文】：

小兒哮喘,醫(yī)科大學,樹突狀細胞,博士研究生