【摘要】：目的:通過分選、鑒定兒童急性淋巴細(xì)胞白血病干細(xì)胞,建立白血病干細(xì)胞/NOD-SCID小鼠白血病模型,觀察其對(duì)小鼠生存的影響,并分析白血病干細(xì)胞與急淋臨床特征及預(yù)后的關(guān)系;研究β-arrestin1以及相關(guān)基因在白血病干細(xì)胞中的表達(dá),探索白血病干細(xì)胞影響急淋的發(fā)病機(jī)制,為尋找兒童急淋治療的靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:通過免疫磁珠分選法分選、流式細(xì)胞術(shù)分析、RT-PCR和熒光原位雜交技術(shù)鑒定急淋患兒骨髓中的白血病干細(xì)胞,并將該群細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注入輻照后的NOD-SCID小鼠體內(nèi),建立小鼠白血病模型。利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)急淋患兒骨髓中白血病干細(xì)胞表面標(biāo)記CD34~+CD38~-的表達(dá),分析具有白血病干細(xì)胞表面標(biāo)記的細(xì)胞與急淋臨床特征及預(yù)后的相關(guān)性,并利用建立的白血病小鼠模型驗(yàn)證該群細(xì)胞對(duì)急淋預(yù)后的影響。采用real-time RT-PCR、免疫熒光、免疫組化等技術(shù)檢測(cè)β-arrestin1在病人骨髓分選細(xì)胞和小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞中mRNA和蛋白的表達(dá)水平,real-time RT-PCR檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)。 結(jié)果:經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)成功分選出CD34~+CD38~-白血病干細(xì)胞群,且該群細(xì)胞表達(dá)白血病干細(xì)胞相關(guān)的分子標(biāo)記CD19和急淋相關(guān)融合基因。尾靜脈注射入NOD-SCID鼠體內(nèi)后,小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)逐漸增高,可見幼稚細(xì)胞,骨髓呈急淋骨髓像,說明成功建立了白血病小鼠模型。注入CD34~+CD38~-細(xì)胞群小鼠的總體生存率低于CD34-CD38+組和空白對(duì)照組小鼠(P0.05)。檢測(cè)和分析臨床ALL患兒的標(biāo)本,發(fā)現(xiàn)CD34~+CD38~-的表達(dá)與急淋的預(yù)后因素有關(guān),如年齡、外周血白細(xì)胞數(shù)、外周血原始細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞遺傳分類、融合基因、化療反應(yīng)、髓外浸潤(rùn)及危險(xiǎn)分級(jí)(P0.05)。此外,與對(duì)照組相比,CD34~+CD38~-細(xì)胞中β-arrestin1 mRNA和蛋白的表達(dá)增高(P0.05);real- time RT-PCR檢測(cè)發(fā)育相關(guān)基因的mRNA表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)Wnt3a和β-catenin在CD34~+CD38~-細(xì)胞中的表達(dá)較對(duì)照組高,以β-catenin增高更為明顯(P0.05)。 結(jié)論:成功分選與鑒定了兒童急性淋巴細(xì)胞白血病干細(xì)胞,并建立了NOD-SCID小鼠白血病模型,注射CD34~+CD38~-細(xì)胞群小鼠的總體生存率明顯降低。臨床研究發(fā)現(xiàn)CD34~+CD38~-的高表達(dá)與兒童急淋預(yù)后差相關(guān)。β-arrestin1、Wnt3a和β-catenin在CD34~+CD38~-細(xì)胞群中呈高表達(dá)。
【圖文】：

分選前 分選后 圖 1-1：分選前與分選后細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果 Fig1-1：Flow cytometry sheets before and after sorting 兒童 ALL 樣本 CD19 的檢測(cè)兒童急淋中常見的干細(xì)胞表面標(biāo)志為 CD34+CD38 /CD19+[10]，因此用流式檢病 CD34+CD38 細(xì)胞群中是否有 CD19 的表達(dá)（通過 R1 圈定的白血病細(xì)胞析 CD34、CD38 及 CD19 的表達(dá)），結(jié)果顯示其表達(dá)為陽性（圖 1-2）。

分選前 分選后 圖 1-1：分選前與分選后細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果 Fig1-1：Flow cytometry sheets before and after sorting2 兒童 ALL 樣本 CD19 的檢測(cè)兒童急淋中常見的干細(xì)胞表面標(biāo)志為 CD34+CD38 /CD19+[10]，因此用流式血病 CD34+CD38 細(xì)胞群中是否有 CD19 的表達(dá)（通過 R1 圈定的白血病細(xì)分析 CD34、CD38 及 CD19 的表達(dá)），，結(jié)果顯示其表達(dá)為陽性（圖 1-2）。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R733.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉慧;龍娟;譚俊杰;王世一;涂植光;鄒琳;;β-arrestin1和β-arrestin2在白血病中的表達(dá)及意義[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年02期

2 劉壯;張義堂;吳香苓;韋紅英;劉紅艷;;p73基因在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的表達(dá)[J];臨床兒科雜志;2010年05期

本文編號(hào)：2625320