【摘要】： 目的觀察研究卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus Calmette Guerin, BCG-PSN)對(duì)急性白血病兒童外周血負(fù)載腫瘤抗原的樹突狀細(xì)胞(dentritic cell, DC)誘導(dǎo)的抗白血病作用的影響。以期提高白血病患兒抗白血病免疫效應(yīng)。方法取12例完全緩解期急性淋巴細(xì)胞白血病兒童外周血,采用密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),以不同細(xì)胞因子和刺激物組合誘導(dǎo)DC。對(duì)照組：重組人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)+重組人白細(xì)胞介素-4 (rhIL-4)+重組人腫瘤壞死因子-α(rhTNF-α) (GIT組)：實(shí)驗(yàn)組分為兩組：實(shí)驗(yàn)1組,rhGM-CSF+rhIL-4+rhTNF-α+HL-60細(xì)胞凍融全細(xì)胞抗原(antigen, Ag) (GITA組)；實(shí)驗(yàn)2組,rhGM-CSF+rhIL-4+rhTNF-α+HL-60細(xì)胞凍融全細(xì)胞抗原(Ag)+卡介菌多糖核酸(BCG-PSN) (GITAB組),分別誘導(dǎo)培養(yǎng)DC。光學(xué)顯微鏡下觀察DC的形態(tài),培養(yǎng)第8天獲得成熟DC,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞CD1a、CD83、HLA-DR表達(dá)率。后將成熟DC與急性白血病兒童自體外周血淋巴細(xì)胞加重組白細(xì)胞介素-2(rhIL-2)共培養(yǎng)96h誘導(dǎo)出CTL。將CTL與HL-60細(xì)胞共同孵育6h,觀察不同組別DC對(duì)CTL殺傷HL-60細(xì)胞作用的影響,LDH釋放法檢測(cè)其殺傷活性。ELISA方法檢測(cè)DC誘導(dǎo)第8天時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-12的含量及CTL誘導(dǎo)96h細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ的含量。 結(jié)果①DC培養(yǎng)第8天,各組90%以上的細(xì)胞表現(xiàn)出較為典型的樹突狀。②CD1a表達(dá)率實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組比較,差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為1.120、1.812，P0.05),實(shí)驗(yàn)2組表達(dá)率低于實(shí)驗(yàn)1組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t為4.078,P0.05)；CD83的表達(dá)率實(shí)驗(yàn)各組均高于對(duì)照組(t分別為4.578、8.670，P0.01),實(shí)驗(yàn)2組表達(dá)率高于實(shí)驗(yàn)1組(t為4.695,P0.05),差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HLA-DR表達(dá)率實(shí)驗(yàn)各組均高于對(duì)照組(t分別為2.174、5.279，P0.05),實(shí)驗(yàn)2組表達(dá)率高于實(shí)驗(yàn)1組(t為2.454，P0.05),差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③LDH釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：效靶比20：1時(shí),實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組CTL對(duì)HL-60細(xì)胞殺傷活性比較,差異均有顯著性(t分別為2.561,3.651,P0.05)；實(shí)驗(yàn)2組CTL對(duì)HL-60細(xì)胞殺傷活性高于實(shí)驗(yàn)1組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t為2.222,P0.05)。④DC培養(yǎng)第8天上清液中IL-12含量測(cè)定和CTL誘導(dǎo)4天培養(yǎng)上清液中IFN-γ的含量測(cè)定結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)各組IL-12、IFN-β的含量均高于對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(IL-12,t分別為4.086、7.011, P＜0.05; IFN-γ, t分別為2.362、5.170，P0.05)；實(shí)驗(yàn)2組IL-12、IFN-γ的含量均高于實(shí)驗(yàn)1組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為2.180、2.817,P均0.05)。 結(jié)論①負(fù)載HL-60凍融全細(xì)胞抗原的緩解期白血病患兒DC較未負(fù)載DC成熟度高,分泌高水平的IL-12,可能促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化；能更有效地激活T淋巴細(xì)胞,誘生抗白血病CTL效應(yīng)。②卡介菌多糖核酸能協(xié)同rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α促進(jìn)急性白血病兒童外周血DC的成熟和分泌IL-12的能力,活化T淋巴細(xì)胞,進(jìn)一步提高抗白血病CTL殺傷活性,從而增強(qiáng)兒童急性白血病外周血來源負(fù)載腫瘤抗原的樹突狀細(xì)胞所誘導(dǎo)的抗白血病免疫效應(yīng)。
【圖文】：

圖2.5各組DC免疫表型分析比較直方圖2.3OC介導(dǎo)的特異性抗白血病細(xì)胞毒效應(yīng)經(jīng)LDH釋放法檢測(cè)結(jié)果顯示，效靶比為20:1時(shí)，各組CTL殺傷率分別對(duì)照組(30.70社10.858)%;實(shí)驗(yàn)l組(40.22社4.499)%;實(shí)驗(yàn)2組(48.66肚1%，實(shí)驗(yàn)各組殺傷活性高于對(duì)照組，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為2.561，，P<0.05);實(shí)驗(yàn)2組殺傷活性高于實(shí)驗(yàn)1組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(護(hù)2.222，P<(見表2.3，圖2.7)。表2.2:LDH法檢湯各組CTL殺傷活性(無出又n=12)Gro即GITGITAGITAB殺傷率(%)30.70社10.85840.22社4.49948.66肚11.136

圖2.5各組DC免疫表型分析比較直方圖2.3OC介導(dǎo)的特異性抗白血病細(xì)胞毒效應(yīng)經(jīng)LDH釋放法檢測(cè)結(jié)果顯示，效靶比為20:1時(shí)，各組CTL殺傷率分別為對(duì)照組(30.70社10.858)%;實(shí)驗(yàn)l組(40.22社4.499)%;實(shí)驗(yàn)2組(48.66肚11.1%，實(shí)驗(yàn)各組殺傷活性高于對(duì)照組，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為2.561，3.6P<0.05);實(shí)驗(yàn)2組殺傷活性高于實(shí)驗(yàn)1組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(護(hù)2.222，P<0.05(見表2.3，圖2.7)。表2.2:LDH法檢湯各組CTL殺傷活性(無出又n=12)Gro即GITGITAGITAB殺傷率(%)30.70社10.85840.22社4.49948.66肚11.136*▲P<0.05，。.pare側(cè)i山co.如，1group;.P<0.05，coIn腳花初thG】TAg門up
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R733.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2623641