【摘要】： 目的：新生兒缺氧缺血性腦病(Hypoxic-ischemic encephalopathy HIE)是新生兒的常見疾病，其病情重，病死率高，并可產(chǎn)生永久性神經(jīng)功能障礙。缺氧缺血是HIE發(fā)生的本質(zhì)。改善新生兒腦缺氧，減輕腦損傷，對臟的預(yù)后具有重要意義。血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)，又稱血管通透因子(Vascular pleamity factor VPF)，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGFR，通過細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，最終導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，遷移及誘導(dǎo)血管生成，同時VEGF具有減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡，神經(jīng)保護(hù)等生物學(xué)作用。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)VEGF的這些生物活性，將負(fù)載有鼠VEGF120cDNA的真核表達(dá)質(zhì)粒pCDNA 3.1注射至新生鼠缺氧缺血腦損傷局部，探討VEGF對新生鼠缺氧缺血性腦損傷(Hypoxic-ischemic brain damage HIBD)的治療作用。 方法：一、構(gòu)建真核表達(dá)載體PCDNA3.1/rVEGF120。二、通過結(jié)扎左頸總動脈，吸入8％氧氣制備左腦HIBD的新生鼠模型。三、將48只7日齡SD大鼠隨機(jī)分為兩組：(一)、對照組制備HIBD后，即刻通過前囟注射空載質(zhì)粒100μg/只，回籠喂養(yǎng)7天；(二)、治療組，制備HIBD模型后，即刻通過前囟注射載有rVEGF120基因的質(zhì)粒100μg/只，回籠喂養(yǎng)7天。在規(guī)定時間內(nèi)，斷頭處死，即刻取出大腦，，每組各取6例。三、免疫組化 腦組織在經(jīng)4％甲醛固定后，常規(guī)石蠟包埋，應(yīng)用LSAB法檢測VEGF蛋白的表達(dá)情況。四、蛋白點(diǎn)雜交 取新鮮腦組織，提取總蛋白，用點(diǎn)雜交儀加樣后，測定VEGF蛋白的表達(dá)情況。五、流式細(xì)胞儀 將腦組織制成單細(xì)胞懸液后，上機(jī)檢測腦細(xì)胞的凋亡情況。 結(jié)果：免疫組化及蛋白點(diǎn)雜交結(jié)果示：治療組VEGF蛋白表達(dá)明顯高于對照組(灰度分析P＜0.05)，免疫組化示：VEGF高表達(dá)于缺血大腦皮質(zhì)，海馬的神經(jīng)細(xì)胞，膠質(zhì)細(xì)胞，及血管內(nèi)皮細(xì)胞(P＜0.05)。流式細(xì)胞儀結(jié)果示：治療組的腦細(xì)胞凋亡率明顯低于對照組(P＜0.05)。 結(jié)論:一、腦內(nèi)注射外源性VEGF基因，在大腦皮質(zhì)及海馬處神經(jīng)細(xì)胞，神 經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中高度表達(dá)。二、外源性的VEGF可以減少腦細(xì) 胞的凋亡。本實(shí)驗(yàn)的研究為H刃BD的治療提供一條新的探索途徑。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉艷秋,周愛儒,牛大地,朱小君,陳光慧,湯健;血管內(nèi)皮生長因子基因治療大鼠腦缺血的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);1999年05期

2 許良中，楊文濤;免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J];中國癌癥雜志;1996年04期

本文編號：2617242