【摘要】： 目的擬通過建立正常中國兒童CSF蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜,篩選表皮葡萄球菌腦膜炎(Staphylococcus epidermidis meningitis,SeM)特異性蛋白質(zhì),為SeM的早期診斷提供線索,同時也為進一步治療提供參考。 方法收集SeM患兒和同年齡正常兒童CSF各4ml,三氯乙酸(trichloracetic acid,TCA)沉淀法獲取CSF總蛋白質(zhì),固相pH梯度(immobile pH gradient,IPG)二維聚丙烯酰胺凝膠電泳(2-DE)技術(shù)分離蛋白質(zhì),染色后,對凝膠進行掃描獲取圖像,利用圖像分析軟件進行比較分析,尋找兩組患兒CSF蛋白質(zhì)譜的異常變化斑點。篩選出5個顯著差異表達的蛋白質(zhì)斑點,切取后進行基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix-assisted laser desorption/ionization time offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,獲得肽質(zhì)量指紋圖譜(Peptide mass fingerprinting,PMF),運用生物信息學技術(shù)獲取蛋白的基本信息,確定差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果正常兒童CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點438個,SeM患兒CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點425個,其中發(fā)現(xiàn)有25個蛋白質(zhì)點僅在正常CSF表達,在SeM CSF中表達而在正常CSF中無表達的蛋白質(zhì)點為12個;與正常CSF蛋白質(zhì)點表達量比較,SeM有6個蛋白質(zhì)點表達量有2倍以上上調(diào),而19個蛋白質(zhì)點表達量有2倍以上下調(diào)。共選出5個差異比較明顯的蛋白質(zhì)點進行MALDI-TOF-MS分析,獲得了5張肽質(zhì)量指紋圖譜。軟件識別其有效肽片斷峰后查詢數(shù)據(jù)庫,搜索后匹配到蛋白質(zhì)的點有5個。發(fā)現(xiàn)高親和力的谷氨酸運載體和α2-HS糖蛋白僅在SeM CSF中表達,HP蛋白在SeM CSF中表達量上調(diào),載脂蛋白E和激肽釋放酶6在SeM CSF中表達量下調(diào)�？赡艹蔀镾eM的特異性蛋白質(zhì)分子。 結(jié)論本實驗成功建立了正常兒童和SeM患兒CSF的雙向凝膠電泳圖譜。通過凝膠圖像分析和計算機信息處理,兩者比較發(fā)現(xiàn)有蛋白質(zhì)點存在著量或質(zhì)的差別。其中高親和力的谷氨酸運載體、α2-HS糖蛋白、HP蛋白、載脂蛋白E和激肽釋放酶6可能與SeM發(fā)生發(fā)展相關(guān),為早期診斷及尋找新的藥物靶點提供了新的思路。
【圖文】：

質(zhì)譜使用基質(zhì)峰和胰蛋白酶自動降解離子峰作為內(nèi)對照進行標準校正。每個蛋白樣品分別測定3次的質(zhì)譜峰，，采用 Dataexpforer軟件分析，顯示的質(zhì)譜峰界面如圖2一2所示。Voya口 .rSP一e口1[BP一刀印么24么拓]22刃若二1引e1姍曰習工洽廷.側(cè)‘一筍癱1日加田悶Z乙7刁湘圖2一 2MALD工一TOF一S膚質(zhì)量指紋圖譜(X軸為m/z;Y軸為相對強度2.2.6.3生物信息學通過 MascotDistiller軟件掃描質(zhì)譜峰的高度和坐標值，將上述數(shù)據(jù)輸入Mascot數(shù)據(jù)庫中搜索(~matrixscienc已com)，檢索時各主要參數(shù)設(shè)置(表

中南大學碩士學位論文第三章結(jié)果第三章結(jié)果3.1seM組esF圖譜與正常組CsF圖譜比較正常組與seM組CSFZ一DE圖譜見圖3一1、圖3一2。選擇圖3一t作為參考膠，將圖3一2與其進行匹配。結(jié)果測得正常兒童CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點438個，seM患兒CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點425個，其中發(fā)現(xiàn)有25個蛋白質(zhì)點僅在正常CSF表達(圖3一3)，在SeMCSF中表達而在正常CSF中無表達的蛋白質(zhì)點為12個(圖3一4);與正常CSF蛋白質(zhì)點表達量比較，而19個蛋白質(zhì)點表達量有2倍以上下調(diào)(圖3一5)，SeM有6個蛋白質(zhì)點表達量有2倍以上上調(diào)(圖3一6)。以下所分析的差異蛋白質(zhì)點均為SeM與正常對照組CSF比較的結(jié)果。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R725.1

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本文編號：2614554