【摘要】：目的構(gòu)建氯化鈷(CoCl_2)作用下的神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞缺氧模型和左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的小鼠缺血模型并對(duì)其效果進(jìn)行評(píng)價(jià)以后,討論促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin,EPO)在缺氧條件下對(duì)U251細(xì)胞小泛素樣修飾蛋白-1(small ubiquitin-like modifier,SUMO-1)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)表達(dá)的影響以及在缺血條件下對(duì)小鼠堿性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)表達(dá)的影響,為研究EPO對(duì)新生兒缺氧缺血性腦病的神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法1.CCK-8法檢測(cè)不同濃度、不同時(shí)間CoCl_2對(duì)U251細(xì)胞活性的影響。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time RT-PCR,qPCR)法檢測(cè)不同濃度CoCl_2作用下不同組U251細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible-1,HIF-1α)mRNA表達(dá)的變化。3.細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)CoC1_2對(duì)U251細(xì)胞活性氧(ROS)水平的影響。4.U251細(xì)胞缺氧模型構(gòu)建成功后,CCK-8法測(cè)定缺氧條件下EPO對(duì)U251細(xì)胞增殖的影響。5.高通量測(cè)序技術(shù)篩選CoCl_2組和CoCl_2+EPO組的差異表達(dá)基因。6.qPCR法對(duì)高通量測(cè)序結(jié)果中的和神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用相關(guān)的差異表達(dá)基因SUMO-1、GLUT-1進(jìn)行驗(yàn)證。7.構(gòu)建小鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的缺血模型:取46只(雌雄各半)3周齡昆明小白鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組、缺血組(各組n=23),假手術(shù)組僅分離左側(cè)頸總動(dòng)脈,缺血組分離左側(cè)頸總動(dòng)脈并結(jié)扎,術(shù)后2周頸椎脫臼處死,提取小鼠腦組織的mRNA,qPCR法檢測(cè)MBP基因表達(dá)的變化。8.小鼠缺血模型構(gòu)建成功后,取46只(雌雄各半)3周齡的小白鼠隨機(jī)分成缺血組、EPO治療組(各組n=23),EP0治療組按0.01ml/g,1次/日,腹腔注射EPO,缺血組腹腔注射等量生理鹽水。1周后頸椎脫臼處死并提取小鼠腦組織mRNA,qPCR法檢測(cè)MBP基因表達(dá)的變化。結(jié)果1.通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)和qPCR檢測(cè)HIF-1α實(shí)驗(yàn)篩選出U251細(xì)胞的CoCl_2最佳濃度是400μmol/ml;流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示400μmol/ml CoCl_2組的活性氧強(qiáng)度顯著高于0μmol/ml CoCl_2組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)得出缺氧條件下EPO最佳濃度是75IU/ml。3.高通量測(cè)序技術(shù)篩選出CoCl_2組和CoCl_2+EPO組與神經(jīng)保護(hù)相關(guān)的差異表達(dá)基因?yàn)镾UMO-1、GLUT-1。通過(guò)qPCR法驗(yàn)證,結(jié)果表明與高通量測(cè)序結(jié)果相符。4.小鼠在左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)后2周,處死并提取腦組織中的mRNA,運(yùn)用qPCR法檢測(cè)得出缺血組相比假手術(shù)組MBP表達(dá)量增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示小鼠缺血性腦損傷模型構(gòu)建成功。5.缺血性腦損傷模型構(gòu)建成功以后,小鼠腹腔注射EPO 1周,處死并提取腦組織中的mRNA,運(yùn)用qPCR法檢測(cè)得出EPO治療組相比缺血組MBP表達(dá)量降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.成功構(gòu)建了U251細(xì)胞的CoCl_2缺氧模型,并研究得出EPO可以在缺氧條件下促進(jìn)U251的增殖及SUMO-1、GLUT-1的表達(dá)。2.成功構(gòu)建了小鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎的缺血模型,并證實(shí)了EPO可以在小鼠缺血性腦損傷模型中降低MBP的表達(dá)。
【圖文】：

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 細(xì)胞流式術(shù)測(cè)定 CoC12對(duì) U251 細(xì)胞活性氧（ROS）強(qiáng)度的影響oC12誘導(dǎo)下的 U251 細(xì)胞缺氧環(huán)境，可以引起 U251 細(xì)胞損傷并生成粒體膜電位閾值，最終導(dǎo)致細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡。通過(guò)采用 DCFH-胞給細(xì)胞裝載熒光探針觀察活性氧 ROS 水平變化情況，運(yùn)用流式細(xì)得出，作用于 U251 細(xì)胞 48 小時(shí)以后 400μ mol/ml CoC12組細(xì)胞的顯高于 0μ mol/ml CoC12組細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05） 2）。

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 細(xì)胞流式術(shù)測(cè)定 CoC12對(duì) U251 細(xì)胞活性氧（ROS）強(qiáng)度的影響oC12誘導(dǎo)下的 U251 細(xì)胞缺氧環(huán)境，可以引起 U251 細(xì)胞損傷并生成粒體膜電位閾值，最終導(dǎo)致細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡。通過(guò)采用 DCFH-胞給細(xì)胞裝載熒光探針觀察活性氧 ROS 水平變化情況，，運(yùn)用流式細(xì)得出，作用于 U251 細(xì)胞 48 小時(shí)以后 400μ mol/ml CoC12組細(xì)胞的顯高于 0μ mol/ml CoC12組細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05） 2）。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王立平;;基于“因材施教,充分釋放學(xué)生潛能”的教學(xué)案例研究——“細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能”復(fù)習(xí)課教學(xué)設(shè)計(jì)[J];中學(xué)生物學(xué);2017年05期

2 高暢;;說(shuō)說(shuō)我們的細(xì)胞情境教室[J];中國(guó)教師;2017年13期

3 付曉星;;2017年高考生物考點(diǎn)略觀[J];考試與招生;2017年05期

4 鈕聞婧;;IB課程與上海高中生命科學(xué)“細(xì)胞結(jié)構(gòu)”部分的比較與思考[J];現(xiàn)代教學(xué);2017年Z3期

5 余自強(qiáng);;細(xì)胞的系統(tǒng)觀[J];生物學(xué)通報(bào);1987年12期

6 劉懷瓊;熱力學(xué)與休克細(xì)胞的研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊(cè);1988年05期

7 俞立發(fā);;觀察水綿細(xì)胞結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)易方法[J];生物學(xué)通報(bào);1988年12期

8 郁禮興;;鎂對(duì)心臟疾病的影響[J];上海醫(yī)學(xué);1988年01期

9 張鴻卿;連慕蘭;宋平根;李素文;柳惠圖;游勁松;薛紹白;;活細(xì)胞的離心淘洗分離[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1988年01期

10 ;組織學(xué)[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘(基礎(chǔ)醫(yī)學(xué));1989年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 隋森芳;;電子顯微學(xué)研究的新前沿:從分子向復(fù)雜結(jié)構(gòu)層次的過(guò)渡[A];第九次全國(guó)生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

2 吳波;周曉軍;;虛擬病理切片及其實(shí)現(xiàn)[A];第六屆全國(guó)生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第九屆全軍軍事病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議、第五屆全軍定量病理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

3 ;第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)日程安排[A];第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)論文摘要[C];2010年

4 徐鋼;;外氣調(diào)“像”法對(duì)健康的影響[A];中國(guó)醫(yī)學(xué)氣功學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

5 黃耀熊;;對(duì)單個(gè)活態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能及其分子分布與相互作用進(jìn)行監(jiān)測(cè)的顯微測(cè)定技術(shù)[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

6 吳志奎;張亞強(qiáng);;應(yīng)用細(xì)胞CT技術(shù)對(duì)前列腺炎組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和DNA熒光強(qiáng)度的觀察[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)泌尿外科專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第三屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

7 張亞強(qiáng);吳志奎;;應(yīng)用細(xì)胞CT技術(shù)對(duì)前列腺炎組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和DNA熒光強(qiáng)度的觀察[A];第五次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

8 黃耀熊;袁志堅(jiān);陳文心;周平;;對(duì)蛋白、細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能及其與藥物相互作用進(jìn)行監(jiān)測(cè)的顯微測(cè)定技術(shù)[A];藥物相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)專(zhuān)題研討會(huì)論文集[C];2006年

9 張波;程茜;陳明;錢(qián)夢(mèng)

本文編號(hào)：2610797