【摘要】： 川崎病(Kawasaki Disease KD)是一種以全身性血管炎為主要病變的兒童急性發(fā)熱出疹性疾病。近年來發(fā)病率逐漸上升。其主要并發(fā)癥為心血管損害，尤其是冠狀動(dòng)脈損害，以冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張、冠狀動(dòng)脈瘤及冠狀動(dòng)脈狹窄最為嚴(yán)重，是KD患兒致死的主要原因，并對(duì)患兒的遠(yuǎn)期生存質(zhì)量發(fā)生影響。因此川崎病冠狀動(dòng)脈損害的發(fā)生機(jī)制研究顯得尤為重要。 川崎病病因不明，目前認(rèn)為急性期存在明顯免疫調(diào)節(jié)異常。免疫細(xì)胞過度激活可分泌產(chǎn)生多種細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α、白介素等，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，從而引發(fā)血管炎。 腫瘤壞死因子-α是人體內(nèi)一種重要的促炎癥因子，與多種疾病有密切的關(guān)系。其啟動(dòng)子區(qū)域基因多態(tài)性目前發(fā)現(xiàn)也與某些疾病的發(fā)生相關(guān)。但是否與川崎病及其冠脈損害相關(guān)目前尚無系統(tǒng)研究。 因此本研究通過對(duì)腫瘤壞死因子-α在血清水平、轉(zhuǎn)錄水平及分子水平的檢測(cè)，了解與川崎病及其冠狀動(dòng)脈損害發(fā)生的相關(guān)性。 第一部分外周血腫瘤壞死因子α的表達(dá)與川崎病冠狀動(dòng)脈損害的研究 目的探討腫瘤壞死因子-α在血清水平、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控與川崎病發(fā)病及并發(fā)冠狀動(dòng)脈損害之間的關(guān)系。 方法 1．ELISA法檢測(cè)40名川崎病患兒與40名對(duì)照組兒童血清腫瘤壞死因子α濃度和可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅰ濃度。 2．實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)檢測(cè)40名川崎病患兒與40名對(duì)照組兒童外周血單個(gè)核細(xì)胞腫瘤壞死因子-αmRNA水平的表達(dá)。 結(jié)果 1．川崎病組血清腫瘤壞死因子-α濃度和可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅰ濃度顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)；冠脈損害組高于無冠脈損害組(P＜0.05)，顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。 2．川崎病患兒血清腫瘤壞死因子-α濃度和血清可溶性腫瘤壞死因子受體濃度成線性相關(guān)(P＜0.05)，二者與Harada評(píng)分亦相關(guān)(P＜0.05)。 3．川崎病組外周血單個(gè)核細(xì)胞腫瘤壞死因子-αmRNA表達(dá)水平高于對(duì)照組(P＜0.05)；冠脈損害組高于無冠脈損害組(P＜0.05)，顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。 4．川崎病組外周血單個(gè)核細(xì)胞腫瘤壞死因子-αmRNA表達(dá)水平與外周血白細(xì)胞、血紅細(xì)胞壓積、血小板、血C反應(yīng)蛋白、血沉均無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，但與Harada評(píng)分明顯相關(guān)(P＜0.01)。 5．川崎病組外周血單個(gè)核細(xì)胞腫瘤壞死因子-αmRNA表達(dá)水平與血清腫瘤壞死因子-α濃度和血清可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅰ濃度有明顯相關(guān)性(P＜0.05)。 結(jié)論 1．川崎病急性期血清TNF-α濃度和血清sTNFRⅠ濃度均明顯升高，尤其合并冠脈損害者，且兩者之間有線性相關(guān)關(guān)系，提示腫瘤壞死因子參與川崎病冠狀動(dòng)脈損害的發(fā)生。 2．川崎病患者尤其是合并冠脈損害者，其外周血單個(gè)核細(xì)胞中TNF-αmRNA表達(dá)水平明顯升高，，且與血清TNF-α濃度和血清sTNFRⅠ濃度成線性相關(guān)關(guān)系。在川崎病冠脈損害發(fā)生機(jī)制中，三者相輔相成，相互作用。 3．川崎病患者血清TNF-α濃度、sTNFRⅠ濃度以及外周血TNF-αmRNA表達(dá)水平與Harada評(píng)分成線性相關(guān)。 第二部分TNF-α基因多態(tài)性和川崎病冠狀動(dòng)脈損害的相關(guān)性研究 目的探討腫瘤壞死因子-α基因-308位點(diǎn)和-238位點(diǎn)G/A單核苷酸多態(tài)性與川崎病發(fā)病及并發(fā)冠狀動(dòng)脈損害之間的關(guān)系。 方法對(duì)100名川崎病患兒和100名對(duì)照組兒童分別進(jìn)行腫瘤壞死因子-α基因-308位點(diǎn)和-238位點(diǎn)基因突變位點(diǎn)的確認(rèn)。 結(jié)果 1．川崎病組腫瘤壞死因子-α基因-308位點(diǎn)G/A等位基因頻率與對(duì)照組相比無顯著性差異(P＞0.05)；冠脈損害組與無冠脈損害組及對(duì)照組相比均有顯著性差異(P＜0.05)。 2．存在腫瘤壞死因子-α基因-308位點(diǎn)A等位基因的患兒，血小板升高及白蛋白降低的程度較G等位基因患兒更明顯(P＜0.05)。 3．川崎病組腫瘤壞死因子-α基因-238位點(diǎn)G/A等位基因頻率與對(duì)照組相比無顯著性差異(P＞0.05)。冠脈損害組與無冠脈損害組及對(duì)照組相比也無明顯差異(P＞0.05)。 4．存在腫瘤壞死因子-α基因-238位點(diǎn)A等位基因的患兒，其臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查與G等位基因患兒相比無明顯差異(P＞0.05)。 5．存在腫瘤壞死因子-α基因-308位點(diǎn)A等位基因的患兒，其外周血單個(gè)核細(xì)胞腫瘤壞死-αmRNA表達(dá)水平、血清TNF-α濃度及血清sTNFRⅠ濃度均較G等位基因患兒為高(P＜0.05)；存在腫瘤壞死因子-α基因-238位點(diǎn)A等位基因的患兒，與G等位基因患兒相比無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論 1、TNF-α基因-308位點(diǎn)A等位基因與川崎病及冠狀動(dòng)脈損害發(fā)生相關(guān)，可能可作為川崎病冠脈損害的遺傳易感性標(biāo)志之一。 2、TNF-α基因-238位點(diǎn)A等位基因與川崎病及冠脈損害無顯著相關(guān)性。 3、TNF-α-308位點(diǎn)G/A多態(tài)性對(duì)TNF-α血清水平及轉(zhuǎn)錄水平均有調(diào)節(jié)作用，可能是TNF-α發(fā)揮作用的始動(dòng)因素之一。 4、TNF基因多態(tài)性尤其是-308位點(diǎn)G/A單核苷酸多態(tài)性可作為川崎病易感性的遺傳標(biāo)志，可能作為川崎病冠狀動(dòng)脈損害的又一項(xiàng)預(yù)測(cè)性指標(biāo)。 總結(jié) 腫瘤壞死因子-α參與川崎病及其冠狀動(dòng)脈損害的病理過程。TNF-α-308啟動(dòng)子區(qū)域多態(tài)性對(duì)TNF-α血清水平及轉(zhuǎn)錄水平均有調(diào)節(jié)作用，可能是TNF-α發(fā)揮作用的始動(dòng)因素之一。 TNF基因多態(tài)性尤其是-308位點(diǎn)G/A單核苷酸多態(tài)性可作為川崎病易感性的遺傳標(biāo)志，可能作為川崎病冠狀動(dòng)脈損害的又一項(xiàng)預(yù)測(cè)性指標(biāo)。 隨著對(duì)TNF基因多態(tài)性與川崎病相關(guān)性研究的深入開展，必將對(duì)KD冠脈損害發(fā)生的病因、發(fā)病機(jī)制及預(yù)防、治療等方面的認(rèn)識(shí)產(chǎn)生一個(gè)新的飛躍。
【圖文】：

圖1RNA凝膠電泳條帶EPC水補(bǔ)充體積至10.5川，加入，迅速置于冰盒，加入以下反一MLV逆轉(zhuǎn)錄緩沖液4.10mMDNTP1.0.1MDTT1.M一MLV1.RNasin0.5aC10min，37oC60min，70oC1混勻并分裝，一20℃凍存。用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)(primerpre一actin和TNF一Q均用熒光染料法

有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。冠脈損害組血清，INF一。濃度為42.33士46.75pg/ml，無冠脈損害組為22.27士11.18Pg/ml，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組分別與對(duì)照組相比，P<0.01，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(表4，圖5)表4各組對(duì)象血清TNF一Q濃度比較血清TNF一。濃度(p留ml)川崎病組冠脈損害組無冠脈損害組對(duì)照組25.61士22.06

本文編號(hào)：2607129