【摘要】：目的: 1、初步了解重慶地區(qū)兒童結(jié)核病結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列(Variable number tandem repeats, VNTR)的分布特征,并尋找適合該地區(qū)的VNTR位點(diǎn)組合。 2、了解兒童結(jié)核病體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌PE_PGRS33基因變異與臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系。 3、了解兒童結(jié)核病患兒體內(nèi)是否存在混合感染,以及結(jié)核分枝桿菌PE_PGRS33基因亞群的存在特點(diǎn)。 方法: 1、采用多位點(diǎn)串聯(lián)重復(fù)序列(Multiple locus VNTR analysis, MLVA)分型方法,選擇標(biāo)準(zhǔn)的24個(gè)VNTR位點(diǎn),對(duì)101例結(jié)核分枝桿菌臨床分離株DNA進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果采用BioNumerics 6.1數(shù)據(jù)庫(kù)軟件進(jìn)行聚類分析和單位點(diǎn)Hunter-Gaston分辨率指數(shù)(Hunter-Gaston index, HGI)分析,并比較分析國(guó)際推薦的分組(12位點(diǎn)、15位點(diǎn)、24位點(diǎn))的基因分型鑒定能力。 2、101例結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的PE_PGRS33基因通過序列比對(duì),分析其基因變異與臨床表型之間的關(guān)系。 3、選擇5例臨床診斷為粟粒性肺結(jié)核合并結(jié)核性腦膜炎的初治患兒,將其培養(yǎng)出的結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)良好及間隙明顯的菌落進(jìn)行單一菌落的分離克隆培養(yǎng),共獲得116株結(jié)核分枝桿菌克隆株,對(duì)其進(jìn)行MLVA分型并對(duì)PE_PGRS33基因進(jìn)行序列分析。 結(jié)果: 1、MLVA分析結(jié)果顯示24個(gè)VNTR位點(diǎn)在不同菌株中存在明顯的多態(tài)性,101例結(jié)核分枝桿菌臨床分離株可分為1個(gè)基因群83種基因型,其中69種基因型只有1個(gè)菌株,占68.32%(69/101),另有32株臨床分離株表現(xiàn)出14種基因型,占31.68%(32/101),成簇率為17.82%; 24個(gè)VNTR位點(diǎn)的HGI具有較大差異(0.168~0.829),HGI能達(dá)到0.5以上的VNTR位點(diǎn)數(shù)有16個(gè);24個(gè)VNTR位點(diǎn)進(jìn)行不同的位點(diǎn)組合:12個(gè)、15個(gè)和24個(gè)位點(diǎn)組合的HGI分別為0.995、0.996、0.996。 2、101例結(jié)核分枝桿菌臨床分離株存在12種PE_PGRS33基因型,其中59.41%的臨床分離株具有PE_PGRS33基因變異,能導(dǎo)致PE_PGRS33蛋白氨基酸序列的改變,這種存在基因變異的結(jié)核分枝桿菌經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)與臨床表現(xiàn)為結(jié)核性腦膜炎與PPD陰性相關(guān)。 3、116株結(jié)核分枝桿菌克隆株通過MLVA基因分型,表現(xiàn)出5種基因型。來自同一患兒的克隆株其基因型相同,同一患兒不同部位的克隆株其基因型亦相同;116株結(jié)核分枝桿菌克隆株P(guān)E_PGRS33基因通過序列分析比對(duì),共表現(xiàn)出2種類型的序列變異。1種為插入突變聯(lián)合點(diǎn)突變,另外1種為缺失突變聯(lián)合點(diǎn)突變。來自同一患兒的克隆株其PE_PGRS33基因變異類型相同,同一患兒不同部位的克隆株其PE_PGRS33基因變異類型亦相同。 結(jié)論: 1、重慶地區(qū)兒童結(jié)核病中結(jié)核分枝桿菌存在基因多態(tài)性,國(guó)際推薦的15個(gè)VNTR位點(diǎn)組合的MLVA分型方法適用于本地區(qū)兒童結(jié)核病中結(jié)核分枝桿菌流行病學(xué)的研究。 2、PE_PGRS33基因與臨床表型之間存在聯(lián)系,其基因變異易在臨床上表現(xiàn)為結(jié)核性腦膜炎與PPD陰性。 3、從單個(gè)結(jié)核病患兒分離出的多克隆結(jié)核分枝桿菌其基因型具有同質(zhì)性,而其PE_PGRS33基因亦相同,說明初治結(jié)核病患兒感染具有單一性,并不存在混合感染。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R725.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2606009