【摘要】：目的 眾所周知,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor VEGF)是一種血管生成劑。是否有其它作用,目前尚不清楚。本課題著重研究VEGF對(duì)肺發(fā)育的影響,特別是VEGF是否能促進(jìn)肺泡Ⅱ型細(xì)胞(alveolar epithelial cellsⅡ AEC Ⅱ)發(fā)育、增加肺泡表面活性物質(zhì)結(jié)合蛋白(肺泡活性蛋白surfactant protein SP)表達(dá)和肺泡表面活性物質(zhì)(pulmonary surfactant PS)合成和分泌,探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)肺泡活性蛋白和肺表面活性物質(zhì)代謝的影響。 方法 孕21天Wistar大鼠剖腹取胎鼠,不同消化方法分離純化肺泡Ⅱ型細(xì)胞,原代培養(yǎng)的肺泡Ⅱ型細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)分組:①VEGF-165組:VEGF-165 6ng/ml;②地塞米松組:地塞米松10~(-7)mmol/L;③VEGF-165和地塞米松聯(lián)合應(yīng)用組:VEGF-165 6ng/ml和地塞米松10~(-7)mmol/L;④不加VEGF-165和地塞米松的DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Media)對(duì)照組。SABC法檢測(cè)肺泡Ⅱ型細(xì)胞VEGF及其受體Flk-1、Flt-1和SP-B的表達(dá),總磷脂含量測(cè)定,薄層層析法定量檢測(cè)肺泡表面活性物質(zhì)中卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰甘油各種成份的含量。 結(jié)果 原代培養(yǎng)AECⅡ,純度可以達(dá)到89%,細(xì)胞活力高達(dá)91.85%以上,不同濃度胰蛋白酶消化法分離肺組織,所得AECⅡ純度、活力、產(chǎn)量同樣能夠滿(mǎn)足體外研究AECⅡ功能的需要。VEGF-165組:總磷脂、磷脂酰膽堿、鞘磷脂、磷脂酰甘油是(μg/ml):119.8±5.1、58.7±2.1、29.5±0.58、6.1±0.2,VEGF、Flk-1、Flt-1、SP-B陽(yáng)性表達(dá);地塞米松組:總磷脂、磷脂酰膽堿、鞘磷脂、磷脂酰甘油分別是(μg/ml):84.1±10.3、41.1±4.04、22.6±1.05、4.97±0.12,VEGF、Flk-1、Flt-1陰性表達(dá),SP-B陽(yáng)性表達(dá);VEGF-165與地塞米松組:總磷脂、磷脂酰膽堿、鞘磷脂、磷脂酰甘油是(μg/ml):143.7+7.75、56±2.25、32.2±2.01、7.0±0.15;VEGF、FIk-1、Flt-1、SP-B陽(yáng)性表達(dá);對(duì)照組:總磷脂、磷脂酰膽堿、鞘磷脂、磷脂酰甘油是(μg/ml):43.4±5.1、25.8±1.52、14.3±1.02、3.97±0.15,VEGF陽(yáng)性Flk-1、Fit-1陽(yáng)性表達(dá),SP-B陰性表達(dá)。 結(jié)論 VEGF-165單獨(dú)應(yīng)用與聯(lián)合應(yīng)用地塞米松促進(jìn)肺泡磷脂合成及細(xì)胞VEGF、Flk-1、Flt-1、SP-B表達(dá);AECⅡ正常狀態(tài)VEGF、Flk-1、Flt-1陽(yáng)性表
【圖文】：

特異的中等纖維蛋白亞基Vimentni作為成纖維細(xì)胞的標(biāo)記，波形蛋白CK作為上皮細(xì)胞源性細(xì)AEcll的標(biāo)記，進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)[3J，，細(xì)胞胞漿胞核均呈淡藍(lán)色是Vimnetni陰性的AECn，見(jiàn)附圖3，胞漿顯示粗大的棕黃色顆粒為CK陽(yáng)性AECn，見(jiàn)附圖4。兩種消化方法所分離純化的細(xì)胞在細(xì)胞純度，細(xì)胞的活力、細(xì)胞產(chǎn)量和細(xì)胞生存時(shí)間上，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異，見(jiàn)附表2。4電鏡檢測(cè)結(jié)果電鏡下可見(jiàn)細(xì)胞表面有短小微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)富含線(xiàn)粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體和溶酶體，還有許多分泌顆粒。顆粒大小不一，直徑0.1一1腳，電子密度高，內(nèi)含同心圓或平行排列的板層結(jié)構(gòu)

各試驗(yàn)組民含量比較
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R722

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本文編號(hào)：2601784