【摘要】： 目的 肺動(dòng)脈高壓是指肺動(dòng)脈內(nèi)壓力高于正常，在海平面水平，正常人靜息狀態(tài)下肺動(dòng)脈收縮壓的正常范圍是20～25mmHg，，肺動(dòng)脈平均壓測量值＜20mmHg。如肺動(dòng)脈收縮壓＞30mmHg，或肺動(dòng)脈平均壓≥20mmHg則認(rèn)為存在肺動(dòng)脈高壓。肺動(dòng)脈收縮反應(yīng)增強(qiáng)和肺血管結(jié)構(gòu)重建是肺動(dòng)脈高壓主要的病理生理改變。肺血管收縮反應(yīng)增強(qiáng)屬功能性改變，是可逆的；肺血管結(jié)構(gòu)重建以肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、無肌型動(dòng)脈肌化、膠原等細(xì)胞外間質(zhì)在肺血管壁沉積為特征，屬不可逆性的結(jié)構(gòu)性改變。 血管可以通過內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等產(chǎn)生的血管活性物質(zhì)對(duì)其張力進(jìn)行自身調(diào)節(jié)。他們分泌的擴(kuò)血管物質(zhì)減少和／或血管對(duì)其反應(yīng)性減弱，以及縮血管物質(zhì)分泌增多和／或血管對(duì)其反應(yīng)性增強(qiáng)，皆可以使肺動(dòng)脈的收縮性增加，進(jìn)而引起肺血管的重建，例如內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)是目前已知最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)。 近年來人們發(fā)現(xiàn)了一種新的血管活性物質(zhì)—腎上腺髓質(zhì)素(adrenomedullin，ADM)，它的降壓效應(yīng)引起了人們的注意。ADM可顯著降低低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠及肺動(dòng)脈高壓病人的肺動(dòng)脈壓力，改善心功能。研究證實(shí)ADM前體(proadrenomedullin，proADM)在體內(nèi)經(jīng)內(nèi)源性肽酶的作用可以降解產(chǎn)生4個(gè)不同的活性肽段：PAMP、proADM45-92、ADM和ADT。ADM具有擴(kuò)血管、抑制平滑肌細(xì)胞增殖的作用，ADT可收縮血管、升高血壓、促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖。通過對(duì)主動(dòng)脈血管環(huán)和血管平滑肌細(xì)胞增殖的研究發(fā)現(xiàn)，ADM和ADT這兩個(gè)同一前體分子的不同肽段在血管活性上相互拮抗，在釋放上交互抑制，這是分子內(nèi)調(diào)控(intramolecular regulation，IMR)學(xué)說的一種表現(xiàn)，即同一心血管活性多肽的前體分子內(nèi)部不同肽段之間存在的相互調(diào)節(jié)現(xiàn)象。分子內(nèi)調(diào)控學(xué)說的提出對(duì)于研究ADM體系在左向右分流肺動(dòng)脈高壓形成機(jī)制和肺血管結(jié)構(gòu)重建中的作用提供了一條全新的思路。 本研究的目的是檢測腎上腺髓質(zhì)素(ADM)前體各活性肽段在左向右分流腫動(dòng)脈高壓大鼠肺內(nèi)的分布及其含量的變化，為左向右分流肺動(dòng)脈高壓的分子生物學(xué)理論提供有力的證據(jù)，同時(shí)也為ADM通過阻止MAPK這一細(xì)胞增殖的最終途徑來實(shí)現(xiàn)其延緩肺動(dòng)脈高壓發(fā)生的說法提供依據(jù)。 方法 1．Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為2組，將實(shí)驗(yàn)組大鼠的左側(cè)頸總動(dòng)脈與頸外靜脈用套管進(jìn)行連接，對(duì)照組大鼠僅切開頸部皮膚分別分離頸總動(dòng)脈和頸外靜脈后縫合皮膚，不進(jìn)行血管連接術(shù)。 2．術(shù)后8周，右心室導(dǎo)管法測取大鼠肺動(dòng)脈收縮壓；分離心臟為右心室和(室間隔+左心室)，計(jì)算二者重量比；HE染色觀察大鼠肺血管的病理變化，測量中等肺動(dòng)脈的中膜厚度所占管徑百分比。 3．采用免疫組化法和Western blotting測定PAMP、ADM、ADT在大鼠肺組織中的分布及其相對(duì)含量變化。 4．RT-PCR法檢測大鼠肺組織中PAMP、ADM、ADT、proADM45-92、p38MAPK、ERK1 mRNA相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果 1．本研究采用套管連接血管技術(shù)成功建立了大鼠頸部左向右分流肺動(dòng)脈高壓模型。 (1) HE染色可見實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈壁增厚，包括平滑肌層及內(nèi)膜層。對(duì)照組大鼠肺動(dòng)脈管壁厚度正常，內(nèi)膜光滑、連續(xù)。 (2)實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈收縮壓與對(duì)照組比較明顯升高，實(shí)驗(yàn)組大鼠肺動(dòng)脈相對(duì)中膜厚度及右室／(左室+室間隔)比例明顯增加。 2．免疫組化法測定ADM、ADT、PAMP三種活性肽段在兩組大鼠肺內(nèi)的分布及其蛋白表達(dá)可見： (1) ADM、ADT在肺高壓組及對(duì)照組大鼠肺組織內(nèi)的分布較一致，棕色顆粒比較顯著的分布于血管平滑肌層，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)則黃染不明顯。 (2)正常對(duì)照組大鼠中，PAMP主要分布在肺血管平滑肌細(xì)胞中，蛋白表達(dá)量較低，實(shí)驗(yàn)組大鼠中黃染區(qū)域明顯增加，存在于血管外膜、血管平滑肌細(xì)胞之中。 (3)免疫組化累積光密度顯示，實(shí)驗(yàn)組大鼠肺內(nèi)ADM、PAMP蛋白表達(dá)量增加而ADT含量則降低。 3．RT-PCR法測定結(jié)果可見實(shí)驗(yàn)組大鼠肺組織ADM、proADM45-92 mRNA表達(dá)增強(qiáng)，ADT mRNA表達(dá)減弱，PAMP mRNA無統(tǒng)計(jì)學(xué)變化，p38MAPK、ERK1 mRNA水平升高。 4．Western blotting測定ADM、PAMP在肺組織中實(shí)驗(yàn)組蛋白相對(duì)含量高于對(duì)照組，ADT含量降低。 結(jié)論 1．本研究采用套管連接血管技術(shù)成功的建立了大鼠左向右分流肺高壓模型，模型的建立與小兒先天性心臟病左向右分流肺動(dòng)脈高壓形成過程相似，更有利于探究先天性心臟病肺高壓的形成機(jī)制。 2．ADM可能起到延緩左向右分流肺動(dòng)脈高壓進(jìn)展的作用；本研究首次明確了ADT在肺高壓大鼠肺內(nèi)的分布情況。 3．分布于正常對(duì)照組血管平滑肌細(xì)胞中的PAMP可能在肺動(dòng)脈高壓形成的過程中被分泌至血管外膜及血管平滑肌中，以阻止肺動(dòng)脈高壓的進(jìn)程。 4．ADM前體各活性肽段之間在分泌方面的互相抑制及其在生物活性方面的相互影響是proADM各活性肽段分子內(nèi)調(diào)控的一種表現(xiàn)，proADM分子內(nèi)調(diào)控學(xué)說在肺動(dòng)脈高壓的發(fā)生機(jī)制中起到了重要的作用。 5．ADM可能通過第二信使cAMP對(duì)MAPK信號(hào)途徑起到抑制作用，以延緩肺動(dòng)脈高壓的進(jìn)程。
【圖文】：

ADT在Wistar大鼠肺內(nèi)的分布
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R725.4

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