【摘要】：目的:為了明確1例血小板無力癥患者發(fā)生的分子機制。方法:用40對引物對血小板無力癥患者GPⅡb/Ⅲa(αIIbβ3)基因的45個外顯子序列及其剪切點進行全長擴增,用SSCP-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對擴增產(chǎn)物進行基因突變篩選,將篩選出的PCR產(chǎn)物進行直接測序。結(jié)果:患者GPⅡb基因Exon4的PCR產(chǎn)物經(jīng)SSCP-聚丙烯酰胺凝膠電泳后出現(xiàn)異常條帶,PCR產(chǎn)物直接測序顯示GPⅡb基因540A缺失導(dǎo)致后面的氨基酸編碼發(fā)生移碼突變。結(jié)論:GPⅡb基因540A缺失發(fā)生移碼突變是GPⅡb基因的一種新突變,是血小板無力癥發(fā)病的分子基礎(chǔ)之一。
【圖文】：

作由上海博亞生物技術(shù)有限公司完成。2　結(jié)　　果2. 1　免疫印跡　　圖1和圖2顯示,與正常人比較,患者GPⅢa表達(dá)減少,而GPⅡb幾乎不表達(dá)。2. 2　基因擴增　　用40對引物擴增患者GPⅡb/Ⅲa基因的45個外顯子,均可見陽性條帶。2. 3　SSCP-聚丙烯酰胺凝膠電泳　　以正常人為對照,將患者GPⅡb/Ⅲa基因的45個外顯子的40份基因擴增產(chǎn)物分別與正常人相應(yīng)的基因擴增產(chǎn)物同時進行SSCP-聚丙烯酰胺凝膠電泳,結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者Ex-on4基因擴增產(chǎn)物電泳遷移率有異常(圖3)。圖1　血小板無力癥患者GPⅢa蛋白表達(dá)　　1:正常人; 2:病人父親; 3:病人母親, 4:病人Fig.1GPⅢa expression in the patientwithGlanzmann thrombasthenia　1:Normal people; 2: Patient’s fa-ther;

因Exon4的540A缺失,導(dǎo)致后面的氨基酸編碼發(fā)生移碼突變,并最終在181位氨基酸后出現(xiàn)終止密碼TGA(圖4)。圖4　GPⅡb基因Exon4部分序列分析圖　　A:正常人;B:病人Fig.4DNA sequencing of GPⅡbExon4 mutation　　A:Normal people;B: Patient3　討　論血小板膜GPⅡb /Ⅲa復(fù)合物是血小板膜上一種主要的黏附蛋白受體,屬于整合素超基因家族成員,可以結(jié)合纖維蛋白原、血管性血友病因子(von wilebrand factor, vWF)和纖維連接蛋白等多種黏附分子,在血小板黏附聚集過程中起關(guān)鍵作用。GPⅡb /Ⅲa是在鈣離子參與下以1∶1比例構(gòu)成的復(fù)合物,是一個完整的功能單位。GPⅡb或Ⅲa任一亞基發(fā)生突變都會影響復(fù)合物的形成及細(xì)胞表面的表達(dá),從而導(dǎo)致血小板無力癥。GPⅡb和GPⅢa的基因都定位于17號染色體上q21-23片段內(nèi), GPⅡb基因約17 kb

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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