【摘要】：目的:通過人補體片段C5b6及人血清在體外作用于小鼠足細(xì)胞,建立亞溶破模型,并予不同濃度的地塞米松(dexamethasone,DEX)、黃芪甲苷(astragaloside,AST)預(yù)處理足細(xì)胞,探討地塞米松、黃芪甲苷是否對補體所致的足細(xì)胞損傷是否具有保護(hù)作用,其保護(hù)作用是否與增加了nephrin蛋白的表達(dá)量有關(guān)。方法:1.選擇適宜濃度的人C5b6與人血清在體外反應(yīng),作用于小鼠足細(xì)胞,建立亞溶破模型。2.足細(xì)胞分為以下組別:對照組,高劑量(1×10-5mol/L)、中劑量(1×10-6mol/L)、低劑量(1×10-7mol/L)地塞米松組,高劑量(600μg/ml)、中劑量(400μg/ml)、低劑量(200μg/ml)黃芪甲苷組、高劑量地塞米松+黃芪組及模型組。對照組不予任何處理,模型組僅建立足細(xì)胞亞溶破模型,實驗組則在建立模型前給予藥物預(yù)處理12小時。3.MTT法觀察各組足細(xì)胞活力變化。4.Western印記法檢測各組足細(xì)胞nephrin蛋白的相對表達(dá)量。結(jié)果:1.足細(xì)胞亞溶破模型的建立:借助由LDH釋放實驗所繪制的細(xì)胞毒性曲線,0.2μg/ml為引起LDH釋放率明顯增加的臨界C5b6劑量,故選擇其為建立足細(xì)胞亞溶破模型的C5b6濃度。2.地塞米松、黃芪甲苷預(yù)處理足細(xì)胞后活力變化:實驗組在建立足細(xì)胞亞溶破模型前,使用地塞米松、黃芪甲苷預(yù)處理足細(xì)胞12小時。高劑量地塞米松組及高劑量黃芪甲苷組優(yōu)于低劑量組,其中高劑量地塞米松+黃芪甲苷聯(lián)合組明顯優(yōu)于單獨的地塞米松組及黃芪甲苷組。3.地塞米松、黃芪甲苷預(yù)處理足細(xì)胞后nephrin蛋白表達(dá)的變化:二者預(yù)處理足細(xì)胞后均可檢測到nephrin蛋白的表達(dá)上調(diào),且這種作用呈劑量依賴性。高劑量地塞米松+黃芪甲苷聯(lián)合組的作用明顯優(yōu)于單獨的地塞米松組及黃芪甲苷組。結(jié)論:1.地塞米松、黃芪可以減輕亞溶量C5b-9所致的足細(xì)胞損傷,二者聯(lián)合使用具有協(xié)同作用。2.二者對足細(xì)胞損傷的保護(hù)機制與上調(diào)nephrin蛋白表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

第 4 章 實驗結(jié)果第 4 章 實驗結(jié)果足細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點鼠足細(xì)胞 MPC5[14]由轉(zhuǎn)基因小鼠的腎小球分離培養(yǎng)獲得，所表達(dá)的40 大 T 抗原受到γ干擾素（IFN-γ）誘導(dǎo)的啟動子調(diào)控。在 33℃，有件下，足細(xì)胞僅增殖不分化，逐漸生長融合呈“鋪路石樣”外觀無 IFN-γ存在條件下后，足細(xì)胞停止增殖，逐漸分化，胞體增大，出明顯突起，呈星型結(jié)構(gòu)，相鄰足細(xì)胞的突起可相互交叉形成連接樣”外觀（如圖 1 所示）。

圖 2：細(xì)胞毒性曲線4.3 足細(xì)胞活力測定4.3.1 地塞米松預(yù)處理足細(xì)胞后活力測定在建立足細(xì)胞亞溶破模型前，，予不同濃度的地塞米松溶液預(yù)處理足細(xì)胞 12h，MTT 法檢測足細(xì)胞活力為：空白組（1.20±0.03）、1×10-5mol/L 組（0.82±0.03）、1×10-6mol/L 組（0.73±0.03）、1×10-7mol/L 組（0.54±0.05）以及模型組（0.40±0.04）。地塞米松各亞組與模型組相比（如圖 3 所示），以及三組內(nèi)部相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，P 均小于 0.05。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R726.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2594506