【摘要】： 目的通過臨床觀察,客觀評(píng)價(jià)槐耳對(duì)哮喘緩解期兒童的干預(yù)效果;并通過體外實(shí)驗(yàn),探討槐耳改善哮喘緩解期兒童T淋巴細(xì)胞調(diào)控失衡的機(jī)理,為槐耳的進(jìn)一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法 第一部分:槐耳對(duì)哮喘緩解期兒童臨床干預(yù)作用的評(píng)估 將60例哮喘緩解期兒童分為2組,即對(duì)照組和槐耳組,分別給予中藥調(diào)理方及中藥調(diào)理方+槐杞黃顆粒,通過門診隨訪的方式,觀察并記錄以下情況:①用藥前后患兒中醫(yī)證候群的累計(jì)例數(shù);②應(yīng)用ACT/C-ACT量表,每隔4周對(duì)病人進(jìn)行一次哮喘控制水平評(píng)估,其時(shí)間點(diǎn)為首診、第4周、第8周和第12周時(shí)。 第二部分:槐耳對(duì)哮喘緩解期兒童T淋巴細(xì)胞體外干預(yù)作用的觀察 應(yīng)用肝素抗凝管采集哮喘緩解期兒童外周血3ml,用Ficoll法分離PBMCs,均分為3組,即對(duì)照組、中劑量組和大劑量組,分別與不同濃度的槐耳菌質(zhì)配液(0、3、6μg/ml)及培養(yǎng)液作用48小時(shí);然后利用Real-Time PCR的方法測定細(xì)胞培養(yǎng)沉淀中IFN-γ,、IL-4、IL-10 mRNA的表達(dá)及T-bet、GATA-3、Foxp3 mRNA的表達(dá),利用ELISA的方法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-4及IL-10的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析: 第一部分?jǐn)?shù)據(jù)為計(jì)數(shù)資料,第二部分?jǐn)?shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 第一部分: 1、中醫(yī)證候群的差異表達(dá) 1.1在槐耳組和對(duì)照組中,治療后患兒面色淡白、自汗、倦怠乏力、舌苔白、舌苔花剝及脈細(xì)無力的中醫(yī)證候較治療前有所改善(23vs14/21vs12,21vs11/20vs11,18vs9/15vs6等等,P值0.05);其中,治療后槐耳組中的自汗癥狀、兩組中的舌苔花剝和脈細(xì)無力癥狀較治療前有明顯的改善(21vs11,10vs1,12vs0等等,P值0.01)。但是,患兒納差的中醫(yī)證候在治療前后改善不明顯(12vs6,10vs4,P值0.05)。 1.2在對(duì)照組中,患兒大便干結(jié)與盜汗的中醫(yī)證候在治療前后改善不明顯(13vs8,22vs15,P值0.05);在槐耳組中,以上兩個(gè)證候治療前后有明顯的改善(12vs2,19vs7,P值0.01)。 1.3在治療前,中醫(yī)證候大便干結(jié)與盜汗在槐耳組與對(duì)照組間無差異表達(dá)(12vs13,19vs22,P值0.05);但在治療后,大便干結(jié)與盜汗在槐耳組與對(duì)照組中的組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2vs8,7vs15,P值0.05)。 2、ACT/C-ACT的差異表達(dá) 2.1在槐耳組,將第4周、第8周和第12周的哮喘控制測試(Asthma ControlTest,ACT)水平隨訪結(jié)果,分別與首診時(shí)的ACT水平相比較,其差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P值0.05);而在對(duì)照組,第4周與第8周的ACT水平隨訪結(jié)果,與首診的ACT水平相比較,其差異表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值0.05)。 2.2在治療后第4周和第12周時(shí),槐耳組與對(duì)照組的ACT水平間的差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值0.05);而在治療后第8周時(shí),槐耳組與對(duì)照組ACT水平之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值0.05)。 第二部分: 1、T淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子mRNA水平的表達(dá):細(xì)胞沉淀中IFN-γmRNA在三組中兩兩組間的差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.21±0.26vs2.17±0.33vs2.10±0.31,P值0.05)。IL-4 mRNA在大劑量組的表達(dá)明顯低于對(duì)照組(0.86±0.13vs1.28±0.14,P值0.01);同時(shí),亦低于中劑量組(0.86±0.13vs1.21±0.17,P值0.05)。IL-10 mRNA在大劑量組的表達(dá)高于對(duì)照組(2.99±0.33vs2.63±0.36,P值0.05)。 2、T淋巴細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子mRNA水平的表達(dá):細(xì)胞沉淀中T-bet、Foxp3mRNA在大劑量組的表達(dá)均低于對(duì)照組(2.40±0.30vs2.63±0.25,2.31±0.31vs2.60±0.39,P值0.05);GATA-3 mRNA在大劑量組的表達(dá)明顯低于與對(duì)照組(1.56±0.22vs1.87±0.29,P值0.01);同時(shí),辦低于中劑量組(1.56±0.22vs1.71±0.24,P值0.05)。 3、T淋巴細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子蛋白水平的表達(dá):細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-10在大劑量組的表達(dá)均高于對(duì)照組(672.78±184.72vs503.74±189.78,586.47±191.83vs431.67±135.25,P值0.05);IL-4在三組中兩兩組間差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(22.76±7.08vs21.17±6.84vs18.73±4.55,P值0.05)。 4、Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子及轉(zhuǎn)錄因子比值的表達(dá):細(xì)胞沉淀中IFN-γ/IL-4 mRNA在大劑量組的表達(dá)明顯高于對(duì)照組和中劑量組(2.61±0.59vs1.91±0.61,2.61±0.59vs2.00±0.62,P值0.01);T-bet/GATA-3 mRNA在三組中兩兩組間差異的表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.43±0.22vs1.52±0.22vs1.55±0.24,P值0.05)。細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ/IL-4在大劑量組的表達(dá)高于對(duì)照組(37.90±13.59vs25.62±15.28,P值0.05)。 結(jié)論 1、與對(duì)照組相比較,槐耳組可有效改善中醫(yī)證候群中的大便干結(jié)、盜汗兩項(xiàng)癥狀;此外,在治療后第8周的隨訪中發(fā)現(xiàn),槐耳組在控制哮喘發(fā)作時(shí)優(yōu)于對(duì)照組,以上結(jié)果提示槐耳可以對(duì)哮喘緩解期兒童進(jìn)行有效的干預(yù),從而改善患兒體質(zhì),調(diào)整肺脾腎不足,以此達(dá)到維持病情穩(wěn)定的目的。 2、體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,槐耳可上調(diào)培養(yǎng)上清中IFN-γ的表達(dá),同時(shí)下調(diào)細(xì)胞沉淀中IL-4 mRNA的表達(dá)。以上結(jié)果提示槐耳可以通過上調(diào)Th1類細(xì)胞因子及下調(diào)Th2類細(xì)胞因子的途徑,糾正Th1/Th2活性細(xì)胞所分泌細(xì)胞因子的偏移,從而進(jìn)一步平衡Th1/Th2細(xì)胞比值的失衡。 3、體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,槐耳可下調(diào)細(xì)胞沉淀中GATA-3 mRNA的表達(dá),同時(shí)伴有T-bet mRNA的消耗。提示槐耳亦可通過下調(diào)Th2相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的途徑,抑制Th0向Th2的分化,達(dá)到平衡Th1/Th2細(xì)胞比值的目的。 4、體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,槐耳可上調(diào)細(xì)胞沉淀及培養(yǎng)上清中IL-10的表達(dá),同時(shí)伴有Foxp3 mRNA的消耗。以上結(jié)果提示,槐耳可通過IL-10途徑減輕患兒體內(nèi)的慢性變應(yīng)性炎癥,同時(shí)也可作用于轉(zhuǎn)錄因子Foxp3,促進(jìn)了未分化T細(xì)胞向CD4~+CD25~+Treg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,抑制了Th2細(xì)胞的產(chǎn)生,調(diào)節(jié)了Th1/Th2細(xì)胞比值的失衡。
【圖文】：

別與首診時(shí)的ACT水平相比較，，其差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尸值>0.05;而對(duì)于對(duì)照組，其第4周與第8周的ACT水平隨訪結(jié)果，與首診的ACT水平相比較，其差異表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尸值<0.05。具體見表1一7一3和圖1一7一2:2)在治療后第4周和第12周時(shí)，槐耳組與對(duì)照組的ACT水平間的差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尸值>0.05;而在治療后第8周時(shí)，槐耳組與對(duì)照組間的ACT水平之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P值<0.05。具體見表1一7一4和圖1一7一2:

I群樹累數(shù)證候計(jì)錢中圖1一7一1中醫(yī)證候群的差異表達(dá)7.2哮喘控制水平的比較l)對(duì)于槐耳組，將其第4周、第8周和第12周的ACT水平隨訪結(jié)果，分別與首診時(shí)的ACT水平相比較，其差異表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尸值>0.05;而對(duì)于對(duì)照組，其第4周與第8周的ACT水平隨訪結(jié)果，與首診的ACT水平相比較，其差異表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尸值<0.05。具體見表1一7一3和圖1一7一2:2)在治療后第4周和第12周時(shí)
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R272

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳瑜;槐杞黃對(duì)小鼠IgA腎病的治療作用及機(jī)制探討[D];華中科技大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2592526