【摘要】：研究背景：過(guò)敏性紫癜(Henoch-Sch(?)nlein purpura, HSP)是兒童期常見(jiàn)的全身性小血管炎性疾病,主要病理特點(diǎn)是以IgA為主的免疫復(fù)合物在微動(dòng)脈、微靜脈、毛細(xì)血管壁和腎小球系膜區(qū)的沉積。臨床上主要表現(xiàn)為非血小板減少性的皮膚紫癜,關(guān)節(jié)痛、關(guān)節(jié)炎,腹痛、消化道出血,血尿、蛋白尿等,此外,還可能累計(jì)肺臟、肝臟、大腦和陰囊等。腸穿孔和中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累比較少見(jiàn),但是HSP患者死亡的主要原因。HSP是一種特征性自限性疾病,但容易反復(fù)發(fā)作,影響其預(yù)后的主要因素是腎臟損傷程度,有的甚至發(fā)展為慢性腎功能衰竭。其病因及發(fā)病機(jī)制仍未完全明確,臨床上仍缺乏診斷HSP的特異性實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)以及腎臟累及的早期預(yù)測(cè)指標(biāo),診斷一般根據(jù)臨床表現(xiàn)、體征和組織病理學(xué)檢查。研究表明,感染、藥物、疫苗、環(huán)境以及自身免疫功能紊亂都可能導(dǎo)致HSP的發(fā)病。因此,通常認(rèn)為HSP是一種環(huán)境因素,尤其是感染因素作用于具有遺傳背景的個(gè)體,導(dǎo)致機(jī)體免疫應(yīng)答異常,輔助性T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞活性增強(qiáng),所引起的以IgA為主的免疫復(fù)合物所介導(dǎo)的系統(tǒng)性免疫性血管炎。該過(guò)程中,存在有細(xì)胞因子異常分泌,凝血和纖溶系統(tǒng)失調(diào),炎性細(xì)胞浸潤(rùn),IgA和補(bǔ)體等免疫復(fù)合物的沉積等。進(jìn)一步研究HSP發(fā)病機(jī)制,尋找其特異性實(shí)驗(yàn)室診斷指標(biāo),早期預(yù)警腎臟累及,根治該疾病,是臨床和科研工作者面臨的重要任務(wù)。最近幾年,臨床和科研工作者結(jié)合臨床流行病資料,利用先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù),從分子和基因水平進(jìn)一步研究了HSP的發(fā)病機(jī)制,取得了一定的研究成果。但對(duì)于HSP患兒細(xì)胞因子表達(dá)水平和免疫功能等方面的研究結(jié)果并不一致,而且仍有許多問(wèn)題有待進(jìn)一步研究和解決。中期因子(midkine, MK)是上世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)的一種新的胚胎發(fā)育相關(guān)分子,又稱為神經(jīng)軸突促進(jìn)生長(zhǎng)因子-2,與多向性因子(pleiotrophin, PTN)共同組成肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子家族。最初以為MK在成年生物體內(nèi)表達(dá)水平極低,并僅限于個(gè)別器官。但新近研究發(fā)現(xiàn),MK在許多腫瘤疾病(如Wilms瘤、胃癌、胰腺癌、肝細(xì)胞癌、食管癌、乳腺癌、白血病等)、慢性炎癥性疾病、自身免疫性疾病(如克羅恩病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎、多發(fā)性硬化等)和組織修復(fù)過(guò)程中存在過(guò)表達(dá)或高表達(dá)。并且具有促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展、侵襲、促進(jìn)血管生成、促有絲分裂、抗凋亡、促進(jìn)炎癥細(xì)胞趨化和纖維蛋白溶解等功能。同時(shí),MK具有抗菌活性,能夠抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(T-regulatory cell, Treg),誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子表達(dá)。一系列研究證明,外周血MK有可能成為一個(gè)敏感且有意義的疾病標(biāo)志物,尤其是腫瘤性疾病和自身免疫性疾病,且其表達(dá)水平與病情輕重、是否伴有并發(fā)癥以及預(yù)后緊密相關(guān)。本研究以檢測(cè)HSP患兒外周血MK的表達(dá)為基礎(chǔ),探討HSP患兒急性期免疫功能狀態(tài)和細(xì)胞因子水平變化,為進(jìn)一步明確HSP發(fā)病機(jī)制、尋找HSP特異性診斷指標(biāo)奠定理論基礎(chǔ)。目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究HSP患兒急性期外周血MK、免疫球蛋白、T細(xì)胞亞群和部分細(xì)胞因子的表達(dá)情況。分析MK與TNF、IFN-γ、IL-2、IL4、IL6、IL10和IL17A等細(xì)胞因子、免疫指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)室檢查的相關(guān)性。探討MK對(duì)HSP患兒病情的診斷和指導(dǎo)作用,以及MK是否能夠早期預(yù)測(cè)HSP患兒的腎臟損害。同時(shí),對(duì)腎臟累及組和無(wú)腎臟累及組HSP患兒補(bǔ)體、肌酐、尿素等生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以期尋找HSP患兒腎臟損害的早期預(yù)測(cè)指標(biāo)。方法：收集2015年在山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院腎臟與風(fēng)濕免疫科住院治療的HSP患兒203例,從中選取符合入組標(biāo)準(zhǔn)的92例患兒進(jìn)行研究。其中,紫癜性腎炎(Henoch-Sch(?)nlein purpura nephritis, HSPN)患兒36例,無(wú)腎臟損害HSP(HSP/no-nephritis)患兒56例。同時(shí)選取60名健康兒童為對(duì)照(normal controls, NC)。收集研究對(duì)象的空腹外周血,酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)檢測(cè)各組研究對(duì)象血清中MK的表達(dá)水平；微量樣本多重蛋白定量實(shí)驗(yàn)(Cytometric Bead Array, CBA)檢測(cè)各組研究對(duì)象血清中TNF、IFN-γ、IL-2、IL4、IL6、IL10和IL17A的表達(dá)水平；免疫比濁法(Turbidimetric inhibition immuno assay)檢測(cè)患兒免疫球蛋白；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)患兒T淋巴細(xì)胞亞群；并結(jié)合相關(guān)臨床實(shí)驗(yàn)室檢查,如尿微量白蛋白、24小時(shí)尿蛋白定量、尿蛋白比肌酐、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、D二聚體等,初步分析MK在HSP急性期患兒疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用IBM SPSS 23.0軟件,雙側(cè)P0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于連續(xù)性變量,根據(jù)數(shù)據(jù)特點(diǎn)采用T檢驗(yàn)、方差分析檢驗(yàn)、Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)、Mann-Whitney U檢驗(yàn)；分類(lèi)變量的比較采用χ2檢驗(yàn)；各檢測(cè)指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析,并采用多重相關(guān)分析的Bonferroni校正；MK對(duì)于HSP的診斷能力評(píng)估采用受試者工作特征(receiver operating characteristics, ROC)曲線分析。ROC曲線下面積(area under the curve, AUC)為1.0時(shí)表示完美的診斷價(jià)值,AUC小于0.5為無(wú)診斷價(jià)值,0.5-0.7為較低診斷價(jià)值,0.7-0.9為有一定診斷價(jià)值,0.9-1.0為較強(qiáng)診斷價(jià)值。另外,計(jì)算其敏感度(sensitivity)、特異度(specificity)、臨界濃度(cutoff concentration)和置信區(qū)間(confidence interval, CI)。結(jié)果：1、92例HSP患兒中,男孩56例(60.87%),女孩36例(39.13%)年齡6.76±2.04歲；60例NC組兒童中,男孩42例(70%),女孩18例(30%),年齡7.01±1.79歲。病例組與健康對(duì)照組兒童在性別和年齡組成上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。92例患兒中,HSP/no-nephritis患兒56例,男孩32例(57.14%),女孩24例(42.86%),年齡6.46±2.12歲；HSPN患兒36例,男孩24例(66.67%),女孩12例(33.33%),年齡7.22±1.83歲。三組兒童在性別和年齡組成上也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。其中,臨床表現(xiàn)為單純皮疹型的14例,男孩7例(50%),女孩7例(50%)；腹型15例,男孩9例(60%),女孩6例(40%)；關(guān)節(jié)型24例,男孩14例(58.33%),女孩10例(41.67%)；腎型13例,男孩11例(84.62%),女孩2例(15.38%)；混合型26例,男孩15例(57.69%),女孩11例(42.31%)2、HSP患兒外周血MK濃度為291.74 (248.56-396.42) pg/ml,明顯高于健康對(duì)照組217.3 (198.98-243.65) pg/ml,(P0.05)。其中,HSPN組MK濃度為326.58 (266.58-459.25) pg/ml, HSP/no-nephritis組為280.72(233.67-384.36) pg/ml,均顯著高于健康對(duì)照組(P0.05),而且,HSPN組MK濃度也高于HSP/no-nephritis組(P0.05)。3、HSP患兒外周血TNF、IFN-γ、IL4、IL6、和IL17A表達(dá)較健康對(duì)照組升高,IL10較健康對(duì)照組降低,而IL-2水平與健康對(duì)照組相比無(wú)差異。HSP/no-nephritis組與HSPN組患兒血清中以上檢測(cè)的細(xì)胞因子水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、HSP急性期患兒免疫功能各檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(1)T淋巴細(xì)胞亞群分析：與健康對(duì)照組相比,HSP患兒外周血CD4+T淋巴細(xì)胞百分率和CD4+/CD8+比值下降(P0.01),CD8+T淋巴細(xì)胞百分率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；CD4+、CD8+百分率以及CD4+/CD8+比值在HSPN組和HSP/no-nephritis組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。(2)免疫球蛋白分析：與健康對(duì)照組相比,HSP患兒外周血IgA、IgM、 IgE水平顯著升高(P0.01),而IgG水平無(wú)明顯差異(P0.05);IgA、 IgM、IgE水平在HSPN組和HSP/no-nephritis組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05),而IgG水平在HSPN組低于HSP/no-nephritis組(P=0.04)。(3)其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)：與健康對(duì)照組相比,HSP患兒外周血D二聚體水平顯著升高(P=0.002),纖維蛋白原也顯著增高(P0.01)。補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、血尿素氮和血肌酐水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)；D二聚體、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、血尿素氮和血肌酐水平在HSPN組和HSP/no-nephritis組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05),HSPN組纖維蛋白原也高于HSP/no-nephritis組(P=0.02)。5、外周血MK濃度與HSP患兒臨床特點(diǎn)的相關(guān)性分析。相關(guān)分析結(jié)果示：外周血MK與IL-4、IL-6,、L17A、IgA和IgE呈正相關(guān)；HSPN亞組,外周血MK與HSPN患兒血肌酐、尿微量白蛋白、24小時(shí)尿蛋白定量和尿蛋白比肌酐呈正相關(guān)。6、血清MK ROC曲線下面積是0.902,95%置信區(qū)間為0.841-0.963(P0.001)。外周血清MK對(duì)HSPN的診斷最佳臨界值是295.58pg/ml,其敏感度為80.6%,特異性為88.3%。即當(dāng)外周血清MK濃度大于295.58pg/ml時(shí),HSP患兒可能出現(xiàn)腎臟累及。結(jié)論：1、MK在過(guò)敏性紫癜患兒,尤其是紫癜性腎炎患兒外周血中明顯升高。2、進(jìn)一步證實(shí)過(guò)敏性紫癜急性期患兒體內(nèi)存在細(xì)胞免疫和體液免疫功能紊亂,以及炎癥細(xì)胞因子分泌的紊亂和凝血功能紊亂。3、過(guò)敏性紫癜患兒外周血升高的MK與機(jī)體內(nèi)IL-4、IL-6、L17A、IgA和IgE水平呈正相關(guān),而且在HSPN患兒,MK與血肌酐、尿微量白蛋白、24小時(shí)尿蛋白定量和尿蛋白比肌酐呈正相關(guān)。4、本研究提示,MK在HSP的發(fā)病中可能具有重要作用,尤其是在紫癜腎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中。MK不僅有望成為HSP診斷的生物學(xué)指標(biāo),而且有可能是HSP患兒合并HSPN的早期預(yù)測(cè)指標(biāo)。
【圖文】：

ａ：標(biāo)準(zhǔn)１；邋ｂ：標(biāo)準(zhǔn)１０；邋Ｃ：邋１３５號(hào)標(biāo)本；ｄ：邋３號(hào)標(biāo)本逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｑｕａｎｔｋａｔｉｖｅ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏ打邋ｏｆ邋ｃｙｌ：ｏｋｉｎｅｓ邋ｂｙ邋Ｃｊｔｏｍｅｔｒｉｃ邋Ｂｅａｄ邋Ａｒｒａｙ逡逑ａ：邋ｓ化ｎｄａｒｄ邋１；邋ｂ：邋ｓ化ｎｄａｒｄ邋１０；邋ｃ：邋ｓｐｅｃｉｍｅｎ邋１３５邋ｄ：邋ｓｐｅｃｉｍｅｎ邋３逡逑

圖２邋９２例患兒臨床表現(xiàn)分型逡逑Ｆｉｇ．２邋ＣＵｉｉｉｃａｌ邋ｃｌａｓｓｉ行ｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋９２邋ｃａｓｅｓ邋ｏｆ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ逡逑ＭＯＣ－邐＊＊邐５ＪＪ０－逡逑．…邐。＂逡逑。幻邐＊00？逡逑４邐…？’；；邐Ｔ逡逑？？邐Ｏ邐８：逡逑１ＳＣＣ－邐Ｏ邐？Ｍ逡逑１邋Ｔ邋＾邐１邋媤…ｉ邋１邋ｉ逡逑，…子Ｔ邋Ｔ邐－邋ｇ邋ｇ申逡逑ｃｃ－邐１＿Ｄ0－逡逑ＨＳＰＮ邐ＨＳＰ邐ＮＣ邐ｍ５邐ｔＫ逡逑ｗｍ邐巧巧逡逑８００００－逡逑？０００９－逡逑宣N邐Ｔ逡逑占逡逑，００邋的－逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R725.5

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10 張婷婷;過(guò)敏性紫癜患兒Th17、Treg細(xì)胞及IL-17、IL-23水平的測(cè)定[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2571587