【摘要】：目的：檢測(cè)兒童血液系統(tǒng)疾病患者端粒酶催化亞基（humantelomerase reverse transcriptase, hTERT）基因的突變與表達(dá)，并分析不同血液系統(tǒng)疾病與hTERT突變與表達(dá)的情況，hTERT在經(jīng)臨床治療干預(yù)的兒童急性白血病患中的表達(dá)，提高對(duì)端粒酶相關(guān)疾病的認(rèn)識(shí)，及加深對(duì)端粒酶與兒童血液系統(tǒng)疾病的關(guān)系的認(rèn)識(shí)。 方法： 1.據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道成人急性髓系白血病患者h(yuǎn)TERT基因15號(hào)外顯子為高發(fā)突變區(qū)，本研究也選擇該區(qū)在兒童血液病患者的突變狀況：收集71例重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液內(nèi)科住院的血液系統(tǒng)疾病確診患者，其中有47例急性白血病，23例非白血病患者（含2例再生障礙性貧血患者）；再提取患者外周血標(biāo)本中全基因組DNA，PCR擴(kuò)增hTERT基因的15號(hào)外顯子；利用Sanger法對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，分析測(cè)序結(jié)果。 2.檢測(cè)接受化療的兒童急性白血病患者h(yuǎn)TERT基因表達(dá)水平收集60例我院血液內(nèi)科住院的血液系統(tǒng)疾病確診患者，其中37例急性白血病患者接受臨床規(guī)范治療，23例非白血病患者，提取外周血標(biāo)本中總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,熒光定量RT-PCR檢測(cè)hTERT基因表達(dá)水平，以GAPDH基因表達(dá)為對(duì)照。以非參數(shù)Mann-Whitney和Kruskall-Wallis檢驗(yàn)分別對(duì)兩組和多組間表達(dá)水平的比較，置信水平α=0.05，用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。 結(jié)果： 1. hTERT基因15號(hào)外顯子突變分析：2例再生障礙性貧血患者均在5號(hào)染色體1254714堿基發(fā)生C＞A雜合突變（該位點(diǎn)距離15號(hào)外顯子轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游91bp）。而47例兒童急性白血病患者和其余21例非白血病組未發(fā)現(xiàn)該基因區(qū)域的突變。 2. hTERT基因表達(dá)分析：經(jīng)臨床治療干預(yù)并達(dá)緩解的B-ALL、PreB-ALL與T-ALL組間hETRT表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，三組間hTERT表達(dá)水平高低為PreB-ALL＜B-ALL＜T-ALL。但白血病組與非白血病組間、AML與ALL組間、ALL中高危、中危及標(biāo)危組間、初診外周血WBC≥100×109/L,50×109/L-100×109/L與＜50×109/L組間、異常核型與非異常核型組間、年齡≥10歲的ALL患者與1-10歲ALL患者組間hTERT的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.兒童急性白血病與成人AML的hTERT基因突變位點(diǎn)不同，成人AML患者h(yuǎn)TERT基因高突變區(qū)在兒童急性白血病中突變率低；2例再生障礙性貧血患者有相同的hTRET基因雜合突變，該基因突變位點(diǎn)與端粒相關(guān)的再生障礙性貧血相關(guān)，并值得進(jìn)一步研究。 2.經(jīng)臨床治療干預(yù)的并達(dá)緩解的兒童急性白血病患者的hTERT基因表達(dá)水平與非白血病患者無(wú)顯著差異，僅B-ALL、PreB-ALL與T-ALL組間仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其他臨床危險(xiǎn)程度分級(jí)間hTERT基因表達(dá)水平無(wú)差異，hTERT表達(dá)水平可作為兒童急性白血病緩解的分子參考指標(biāo)之一。
【圖文】：

XR 系統(tǒng)成像：在紫外光下進(jìn)行成像，，檢測(cè) PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物位于無(wú)雜帶。序大基因公司測(cè)序，測(cè)序引物為 PCR 擴(kuò)增引物，測(cè)序方法為 Sa ABI 公司的 3730XL 測(cè)序儀。析hromas 軟件進(jìn)行峰圖分析，然后通過(guò) NCBI 和 UCSC s 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行序列比對(duì)。液病患者臨床及實(shí)驗(yàn)室特點(diǎn)。

兒童急性白血病患者中，8例AML患者及38例ALL患者均無(wú)突變，成突變的 5 號(hào)染色體的 1254833 位點(diǎn)也未發(fā)現(xiàn)突變。非白血病的血液病患者中，2 例再生障礙性貧血患者 5 號(hào)染色體 1254基發(fā)生雜合突變，C 突變?yōu)?A（圖 2.2），該位點(diǎn)距離 15 號(hào)外顯子轉(zhuǎn)錄起游 91bp。2 例再生障礙性貧血患者均為男性重型再障患兒；年齡分別為和 9 歲 9 月；以嚴(yán)重的貧血和出血為主要臨床表現(xiàn)。a) Mutation locates at the 53rdsite. c) Mutation locates at the 60thsite.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R725.5

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王紅旭;鄒琳;;端粒-端粒酶在兒童急性白血病診治中的研究進(jìn)展[J];兒科藥學(xué)雜志;2012年11期

2 蔡博;高春記;;腫瘤相關(guān)抗原疫苗在急性髓細(xì)胞性白血病治療中的研究進(jìn)展[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2009年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 蔡博;異基因造血干細(xì)胞移植前后外周血NK細(xì)胞1-磷酸鞘氨醇受體5表達(dá)的變化與急性移植物抗宿主病發(fā)生的關(guān)系[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2010年

本文編號(hào)：2553159