【摘要】：第一部分新生兒膿毒癥miRNAs表達譜及其對免疫應(yīng)答基因和蛋白的調(diào)節(jié)目的：miRNAs在免疫系統(tǒng)的異常表達可能在抗感染免疫應(yīng)答中發(fā)揮關(guān)鍵的作用,并且參與到膿毒癥的免疫調(diào)節(jié)過程中。本研究的目的在于探索miRNAs在新生兒膿毒癥的免疫應(yīng)答調(diào)控中的重要作用。方法：首先,我們采用微陣列技術(shù)檢測了來自膿毒癥新生兒和非感染新生兒的外周血白細胞的miRNAs表達譜。然后,基于靶基因預(yù)測的方法,我們從這些差異表達的miRNAs中挑選出26個免疫相關(guān)的miRNAs,采用熒光定量PCR的方法進行進一步的檢測。同時,我們運用了PCR Array及蛋白芯片技術(shù)分別對這些新生兒白細胞免疫應(yīng)答基因的表達譜和血漿中的免疫及炎癥相關(guān)細胞因子進行了定量檢測,以探尋這些顯著變化的miRNAs對新生兒膿毒癥免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果：與非感染新生兒相比,膿毒癥新生兒中的10個免疫調(diào)控miRNAs在表達量上出現(xiàn)了2倍以上的明顯變化。而11個免疫應(yīng)答基因及15個血漿細胞因子或受體也在膿毒癥新生兒中出現(xiàn)明顯的上調(diào)或下調(diào)。綜合分析結(jié)果表明,這些異常表達的miRNAs對新生兒膿毒癥免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)以負向和抑制反應(yīng)占優(yōu)勢。結(jié)論：我們的研究證明在新生兒膿毒癥中存在某些miRNAs表達水平的異常,這些顯著變化的miRNAs很可能參與了新生兒膿毒癥免疫應(yīng)答的調(diào)控,所表現(xiàn)出的新生兒炎癥反應(yīng)的特點與其免疫功能的不成熟有關(guān)。第二部分LPS誘導(dǎo)的臍血白細胞miRNAs表達譜和對TLR通路的調(diào)節(jié)及其與成人的差異目的：為進一步證實miRNAs在新生兒抗感染免疫和炎癥反應(yīng)中的作用。本研究通過體外細胞培養(yǎng),檢測LPS誘導(dǎo)的臍血白細胞miRNAs表達譜變化,探討miRNAs在新生兒固有免疫,尤其是在TLR信號通路中的調(diào)控作用,同時比較臍血白細胞與成人外周血白細胞miRNAs對LPS刺激的應(yīng)答差異,以進一步探討新生兒對感染的易感機制。方法：采集臍血和成人外周血標本進行體外全血細胞培養(yǎng),在加入LPS刺激2h后收獲和分離白細胞,抽提總RNA,應(yīng)用微陣列技術(shù)和PCR Array分別檢測 LPS誘導(dǎo)的miRNAs和TLR相關(guān)基因的表達譜。運用生物信息學(xué)方法分析這些miRNAs可能參與調(diào)控的生物過程,及其作用于TLR信號通路的靶基因。結(jié)果：臍血白細胞經(jīng)LPS誘導(dǎo)后(與未刺激細胞相比)共有85個miRNAs及41個TLR相關(guān)基因被檢測到有差異表達的現(xiàn)象；與LPS刺激的成人外周血白細胞相比,共有53個miRNAs及29個TLR相關(guān)基因差異表達。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),LPS誘導(dǎo)臍血白細胞(與未刺激細胞相比)上調(diào)和下調(diào)的這些miRNAs的靶基因共同參與到細胞生物合成過程,基因表達,大分子生物合成過程等的調(diào)控中；而與LPS刺激的成人外周血白細胞相比上調(diào)和下調(diào)的miRNAs的靶基因分別在細胞蛋白質(zhì)代謝過程和高分子代謝過程的負調(diào)控等生物過程存在差異。LPS誘導(dǎo)臍血白細胞(與未刺激細胞相比)產(chǎn)生的11個差異表達的TLR信號通路基因的cDNA序列中,我們發(fā)現(xiàn)了13個潛在的miRNA-mRNA相互作用位點；而與LPS刺激的成人外周血白細胞相比產(chǎn)生的10個差異表達的TLR信號通路基因則接受12個差異表達的miRNAs的調(diào)控。結(jié)論：我們的體外細胞培養(yǎng)研究證實,在細菌內(nèi)毒素LPS誘導(dǎo)的急性炎癥反應(yīng)中miRNAs表達譜發(fā)生了顯著的變化,并且臍血白細胞與成人白細胞的miRNAs表達譜存在明顯差異。這些miRNAs調(diào)控的預(yù)測靶基因參與多個重要的生物過程。LPS誘導(dǎo)的miRNAs對TLR信號通路可能發(fā)揮重要的免疫調(diào)控作用,并且這種調(diào)控作用在新生兒和成人之間有所不同。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R720.597

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本文編號：2544017