【摘要】：兒童肥胖多屬于單純性肥胖癥，即一種無明顯病因可尋的機體攝入熱量多于生理需求量而形成的肥胖癥，近年，呈現(xiàn)持續(xù)快速增加的趨勢，已成為影響兒童健康的重要因素。而且與其成人期糖尿病、心腦血管疾病、高脂血癥等密切相關(guān)。高熱量飲食是兒童單純性肥胖發(fā)生的主要誘因，而良好的腸道吸收以及脂類合成和分解代謝的失衡則是該病形成機制的根源。小腸是人體營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要場所，小腸型脂肪酸結(jié)合蛋白（intestinal fatty acid-binding protein，F(xiàn)ABP2）是一種低分子量胞內(nèi)載脂蛋白，特異地分布于小腸上皮吸收細胞，與食物中長鏈脂肪酸（LCFA）的吸收、靶向運輸及代謝關(guān)系密切。人類FABP2基因第2外顯子54密碼子（rs1799883）存在單核苷酸多態(tài)性位點，即由丙氨酸置換成蘇氨酸（Ala→Thr），Ala54Thr突變可能影響了蛋白的功能。近幾年，國內(nèi)外學者相繼報道54T等位基因與脂代謝障礙、胰島素抵抗相關(guān)，但與兒童單純性肥胖關(guān)系的研究鮮有報道，，兒童肥胖的發(fā)生是否與FABP2基因54位密碼子單核苷酸多態(tài)性及其FABP2的表達有關(guān)，尚不清楚。為此，我們檢測了單純性肥胖兒童FABP2基因多態(tài)性分布頻率及血清脂質(zhì)等生物化學指標，探討54T等位基因與兒童肥胖的相關(guān)性以及Ala54Thr多態(tài)性對血脂、血糖代謝的影響；并通過建立的肥胖幼年大鼠模型，探討FABP2在幼年肥胖發(fā)生發(fā)展中的意義。 首先檢測單純性肥胖兒童FABP2基因A54T基因型和等位基因分布頻率。依據(jù)中國肥胖問題工作組制定的“中國學齡兒童青少年超重、肥胖篩查BMI分類標準”，篩選張家口市單純性肥胖兒童83例和正常對照兒童100例；采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）-限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）技術(shù),檢測體重正常對照組和超重肥胖組FABP2基因Ala54Thr基因型及等位基因分布頻率，并經(jīng)DNA序列測定確證；采用全自動生化分析儀酶法檢測空腹血糖（FBG）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、放射免疫法測定胰島素（Ins）；ELISA方法測定游離脂肪酸（FFA），計算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）；分析54T等位基因與兒童肥胖發(fā)生的關(guān)系及其與血清脂質(zhì)異常、胰島素抵抗的相關(guān)性。 然后模擬肥胖兒童的飲食習慣，建立肥胖幼年大鼠模型；采用SYBR Green I熒光染料實時熒光定量PCR方法檢測幼年大鼠十二指腸、空腸和回腸組織中FABP2mRNA的表達情況；與上述同樣方法檢測血清生化指標的變化；分析FABP2的基因表達與幼年肥胖的相關(guān)性。 基因多態(tài)性研究結(jié)果顯示FABP2基因A54T單核苷酸多態(tài)性頻率分布為：在超重/肥胖組，AA、AT、TT基因型頻率分別為33.7%、49.4%和16.9%；在正常對照組，AA、AT、TT基因型頻率分別為51.0%、40.0%和9.0%，差異有統(tǒng)計學意義（2=6.27，P＜0.05）。超重/肥胖組54A、54T等位基因頻率分別為58.4%和41.6%；正常對照組54A、54T等位基因頻率分別為71.0%和29.0%，兩組等位基因分布頻率差異有統(tǒng)計學意義（2=6.32，P＜0.05）。血清生化指標結(jié)果顯示，與正常組相比，超重/肥胖組的血漿TG（P＜0.01）、Ins（P＜0.05）、HOMA-IR（P＜0.05）均升高，差異有統(tǒng)計學意義。同時，在超重/肥胖組中，與A/A野生型攜帶者比較，T/T純合子突變型攜帶者血漿TG水平明顯升高（P＜0.05），血漿Ins、FFA水平和HOMA-IR雖有升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；A/T雜合子突變型攜帶者血清各項指標與AA野生型攜帶者比較無差異（P＞0.05）。 動物模型研究結(jié)果顯示：無論是對照組還是肥胖組大鼠，F(xiàn)ABP2mRNA的表達水平在回腸最高，空腸次之，十二指腸最低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與對照組比較，肥胖組大鼠十二指腸、空腸和回腸組織中FABP2mRNA表達水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且肥胖組大鼠血清TG水平顯著升高（P＜0.01）。 綜上，F(xiàn)ABP2基因A54T多態(tài)性與兒童單純性肥胖發(fā)生有關(guān)；54T等位基因可能是促進脂代謝異常和胰島素抵抗進程的一個潛在因素，攜帶54T等位基因的個體，發(fā)生肥胖和脂代謝紊亂的風險增高；FABP2基因在小腸組織不同區(qū)段表達量不同；高脂飲食使幼年大鼠小腸組織FABP2mRNA表達水平降低，體重增加，血清TG水平升高，提示FABP2參與了脂類代謝，與幼年肥胖的發(fā)生、發(fā)展可能具有一定的關(guān)系。該研究結(jié)果為進一步深入研究FABP2基因與營養(yǎng)的交互作用及其基因表達調(diào)控的機制奠定了理論和實驗基礎(chǔ)，并為預防兒童單純性肥胖癥、尋找基因治療的有效靶點提供了依據(jù)。
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R723.14

【參考文獻】

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本文編號：2529180