【摘要】：目的1.調(diào)查2015年4月-7月在鄭州市某兒童醫(yī)院住院的手足口病患者的臨床體征、實(shí)驗(yàn)室檢查資料,并比較分析輕、重癥患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的差異,為臨床檢測(cè)患者的重癥化提供依據(jù)。2.通過(guò)描述臨床分離的EV71病毒的病原體分子特征,并分析比較輕、重癥手足口病患者的EV71編碼區(qū)特征的差異性,從病原體的角度探討病原體引起手足口病重癥化的原因。3.探討EV71感染RD細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的氧化應(yīng)激與細(xì)胞因子水平變化的關(guān)系。方法1.采用問卷調(diào)查對(duì)187例手足口病患者的一般情況和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)進(jìn)行收集,利用單因素及多因素分析輕、重癥手足口病患者差異分布的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。2.從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)收集經(jīng)全基因組測(cè)序的EV71病毒共748株,通過(guò)文獻(xiàn)檢索最終篩選有明確臨床特征的共230株。然后通過(guò)生物信息學(xué)軟件進(jìn)行230株EV71的分子特征分析,并進(jìn)行差異位點(diǎn)的統(tǒng)計(jì)分析和二級(jí)結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)域的特點(diǎn)描述。3.通過(guò)檢測(cè)比較EV71感染RD細(xì)胞0h、12h、24h、48h后的細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平來(lái)判斷氧化應(yīng)激的發(fā)生,然后通過(guò)Westernblot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的磷酸化、未磷酸化NF-kappaB和IkBα的蛋白水平變化,ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6和TNF-α等炎性因子的表達(dá)。結(jié)果1.輕、重癥手足口病患兒的中性細(xì)胞比率、淋巴細(xì)胞比率、IgM、降鈣素原均隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化(P0.05);中性細(xì)胞比率(OR=1.198,P=0.001)、淋巴細(xì)胞比率(OR=1.194,P=0.002)、白細(xì)胞個(gè)數(shù)(OR=0.916,P=0.024)、血清鈉離子(OR=0.690,P0.001)是手足口病患兒重癥化結(jié)局的影響或預(yù)警實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。2.共搜集到103株輕癥和127株重癥EV71型手足口病病人的病毒,以C4基因型為主,主要分布于亞太地區(qū)。分離于同一時(shí)間和地區(qū)的病毒之間的相似性較大,而分離于不同時(shí)間和地區(qū)的病毒相似性較小,遺傳距離較遠(yuǎn)。輕癥來(lái)源的EV71病毒之間的VP1氨基酸序列同源性為96%-100%,重癥來(lái)源的病毒之間的VP1氨基酸序列同源性為94-100%,而輕癥和重癥來(lái)源的病毒之間同源性為92%-100%;輕、重癥病毒有41個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),P3蛋白區(qū)域變異最大,有26個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)(P0.001);蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)及非二級(jí)結(jié)構(gòu)分別有21和20個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)的分布,結(jié)構(gòu)域未見差異位點(diǎn)的分布。3.EV71感染RD細(xì)胞24h、48h后與0h相比,細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);而且48h后NF-kappaB被激活轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核內(nèi)部的水平增加(P=0.0394).,與0h組即未感染空白對(duì)照組相比,感染12h、24h、48h后RD細(xì)胞中的IL-6細(xì)胞因子的水平均有明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05).;感染48h后RD細(xì)胞中的TNF-α的水平相比較感染0h組有一定的升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05).,而感染12h、24h組與感染0h組的TNF-α水平相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1.手足口病患者病程中免疫水平處于動(dòng)態(tài)變化,且影響重癥化結(jié)局。2.EV71病毒基因型分布具有時(shí)間和地區(qū)分布的差異;輕、重癥病例來(lái)源病毒的相似性較低,通過(guò)氨基酸替換影響蛋白質(zhì)的一級(jí)、二級(jí)結(jié)構(gòu)可影響蛋白質(zhì)功能的變化。3.EV71感染RD細(xì)胞可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激,并可激活NF-kappaB促進(jìn)細(xì)胞因子IL-6、TNF-α的表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R725.1

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本文編號(hào)：2469449