【摘要】：第一部分極早產(chǎn)兒主要臨床問題回顧性分析 目的： 極早產(chǎn)兒(very preterm infants, VPT,胎齡32wk)由于其解剖生理特點(diǎn),易發(fā)生各種并發(fā)癥,病死率及后遺癥的發(fā)生率較高,對(duì)極早產(chǎn)兒周密的全面管理,是新生兒監(jiān)護(hù)病房(NICU)中體現(xiàn)水平的綜合反映。國(guó)內(nèi)在極早產(chǎn)兒NICU救治、預(yù)后等方面研究資料匱乏。本研究通過回顧性分析超大容量NICU極早產(chǎn)兒臨床病例資料,旨在了解：(1)極早產(chǎn)兒圍生期特征、NICU中主要疾病構(gòu)成、治療手段及疾病負(fù)擔(dān)；(2)極早產(chǎn)兒存活率、主要并發(fā)癥患病比例以及預(yù)后的高危因素；(3)新生兒轉(zhuǎn)運(yùn)以及超大容量NICU對(duì)極早產(chǎn)兒臨床轉(zhuǎn)歸的影響；(4)國(guó)內(nèi)極早產(chǎn)兒救治現(xiàn)狀與發(fā)達(dá)國(guó)家救治情況比較。希望通過此文研究為當(dāng)前極早產(chǎn)兒救治難點(diǎn)、重點(diǎn)提供可靠的臨床研究資料,為更大規(guī)模的極早產(chǎn)兒流行病學(xué)研究提供重要的理論依據(jù)。 方法： 回顧性收集2010年10月1日至2011年09月30日連續(xù)12個(gè)月內(nèi),八一兒童醫(yī)院極早產(chǎn)NICU中收治的極早產(chǎn)兒病例資料。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：出生胎齡(GA)小于32wk、生后24小時(shí)內(nèi)入住極早產(chǎn)NICU者。 用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料中連續(xù)變量呈正態(tài)分布者表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析；偏態(tài)分布者表示為中位數(shù)(范圍或四分位數(shù)間距),組間均數(shù)比較采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以發(fā)生率或構(gòu)成比表示,并對(duì)發(fā)生率作區(qū)間估計(jì),發(fā)生率或構(gòu)成比的比較采用卡方檢驗(yàn)。因本研究為回顧性分析,結(jié)合研究人群特點(diǎn),采用單因素Logistic回歸模型對(duì)極早產(chǎn)兒死亡高危因素分析,進(jìn)一步運(yùn)用多因素Logistic回歸模型進(jìn)行多因素逐步回歸分析以明確死亡的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。變量間相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。 結(jié)果： 1.人口學(xué)特征 本次研究共收集病例1262份,符合入選標(biāo)準(zhǔn)的病例729例。其中164例為超早產(chǎn)兒(胎齡,GA≤28wk),占總數(shù)的22.5%；478例為極低出生體重兒(VLBW1500g),占總數(shù)的65.6%；68例為超低出生體重兒(ELBW1000g),占總數(shù)的9.3%。平均GA為29.8±1.4(范圍23.9-31.9)wk。平均出生體重(BW)為1399±285(范圍610-2415)g。男嬰430例,占總的例數(shù)的59.0%。76例(10.4%)為小于胎齡兒(SGA),199例(27.3%)為多胎。平均入NICU時(shí)齡為2.2±2.3(范圍0.3-24)小時(shí)。 2.圍產(chǎn)期特征 544例(74.6%)極早產(chǎn)兒接受了規(guī)律產(chǎn)前檢查,141例(19.3%)產(chǎn)前檢查大于1次或情況不詳。199例(27.3%)應(yīng)用產(chǎn)前激素,362例(49.7%)剖宮產(chǎn)。153例(21.0%)胎膜早破24h,64例(8.8%)產(chǎn)前抗生素治療。461例(63.3%)的極早產(chǎn)兒母親存在明確妊娠期疾病,包括妊娠高血壓疾病160例(21.9%)、胎膜早破245例(33.6%)、前置胎盤或胎盤早剝72例(9.9%)、糖尿病72例(9.9%)等。213例(29.2%)極早產(chǎn)兒中有的產(chǎn)房用氧復(fù)蘇史,其中103例(14.1%)極早產(chǎn)兒接受過氧氣或氣囊加壓給氧,110例(15.1%)極早產(chǎn)兒在產(chǎn)房接受了氣管插管,25例(3.4%)極早產(chǎn)兒接受了產(chǎn)房心臟按壓,14例(1.9%)極早產(chǎn)兒產(chǎn)房復(fù)蘇藥物。 3.極早產(chǎn)兒NICU主要疾病構(gòu)成 極早產(chǎn)兒主要疾病構(gòu)成與GA、BW成密切相關(guān),胎齡、BW越小,患病比例越高。呼吸系統(tǒng)疾病是極早產(chǎn)兒最常見診斷疾病,主要包括：499例(68.4%)呼吸窘迫綜合癥(RDS),353例(48.4%)新生兒肺炎,61例(8.4%)肺出血,55例(7.5%)新生兒持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓(PPHN),22例(3.0%,,n=606例)支氣管肺發(fā)育不良(BPD),16例(2.2%)氣胸等。其他常見疾病主要有動(dòng)脈導(dǎo)管未閉(PDA)462例(63.4%),呼吸暫停287例(39.4%),敗血癥92例(12.6%),腦室內(nèi)出血(IVH)157例(21.5%),腦室周圍白質(zhì)軟化(PVL)11例(1.5%),壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)22例(3.0%),3期以上早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病(ROP)11例(1.7%)等。 4.呼吸系統(tǒng)疾病特征及臨床治療特點(diǎn) 499例RDS極早產(chǎn)兒中,447例(89.6%)接受了肺表面活性物質(zhì)(PS)治療,66例(13.2%)接受了超過1次的PS治療。應(yīng)用PS與未使用PS相比,存活率無差異,但PS患兒GA較低、并發(fā)癥比例較高、MV和氧療時(shí)間較長(zhǎng)；產(chǎn)房使用PS與NICU使用PS相比,兩者GA、存活率、并發(fā)癥、MV和氧療時(shí)間等均無顯著差異(P0.05)；與牛源性PS相比,豬源性PS患兒GA、BW更低,住院時(shí)間更長(zhǎng),存活率較低但無顯著差異(x2=2.625,P=0.105),主要并發(fā)癥、MV和氧療時(shí)間等均無顯著差異(P0.05)。 RDS患兒499例(100%)接受機(jī)械通氣(MV),其中79例(15.8%)只接受nCPAP,357例(71.5%)接受常頻機(jī)械通氣(CMV,不含HFOV),63例(12.6%)接受HFOV。三種通氣方式中,HFOV存活率最低,MV時(shí)間最長(zhǎng),相關(guān)疾病或并發(fā)癥比例最高(肺出血、氣胸、重度IVH)；與僅nCPAP相比,CMV除肺出血比例較高外,存活率或主要并發(fā)癥無差異。 358例新生兒肺炎患兒中,57例(16.1%)痰培養(yǎng)陽(yáng)性,其中培養(yǎng)陽(yáng)性率較高的有：28例(49.1%)鮑曼不動(dòng)桿菌,18例(31.6%)肺炎克雷伯菌,6例(10.5%)大腸埃希菌和3例(7.0%)銅綠假單胞菌。 55例PPHN患兒中HFOV的比例為24例(43.6%),吸入NO治療的比例為44例(80.0%)。PPHN與PDA密切相關(guān),接受PDA結(jié)扎術(shù)患兒中患有PPHN的比例顯著高于非PPHN患兒(16.4%vs1.9%,P0.001)。48例吸入NO的患兒中,8例(16.7%)需要接受PDA結(jié)扎術(shù),占所有PDA結(jié)扎術(shù)患兒(22例)的36.4%。 606例極早產(chǎn)兒糾正胎齡36wk治愈或好轉(zhuǎn)出院無氧依賴,22例(3.6%)糾正胎齡36wk仍需氧療診斷為BPD。其中7例(31.8%)在生后28天接受激素治療,3例(13.6%)出科時(shí)需吸氧,19例(86.4%)治愈出院。 5.其他常見疾病特征及臨床治療特點(diǎn) 極早產(chǎn)兒入住NICU后根據(jù)病情需要至少進(jìn)行1次床旁頭顱超聲。157例(21.5%)IVH是超聲診斷比例最高的疾病,GA越小、BW越低,IVH比例越高。IVH在超早產(chǎn)兒比例為42.1%,VLBW比例為24.3%。 92例敗血癥極早產(chǎn)兒中,血培養(yǎng)陽(yáng)性70例(76.1%)。其中,肺炎克雷伯菌培養(yǎng)陽(yáng)性率最高37.1%(26例),其次為葡萄球菌30.0%(21例)、真菌12.9%(9例)、大腸埃希菌7.1%(5例)、鮑曼不動(dòng)桿菌5.7%(4例)等。 22例NEC患兒中,只有7例(31.8%)接受手術(shù)治療,病死率為36.4%(8例)。死亡患兒中3例(37.5%)接受了手術(shù)治療,5例(62.5%)選擇了放棄治療。 638例極早產(chǎn)兒在出院或死亡之前至少接受了1次眼底篩查,106例(16.6%)極早產(chǎn)兒有不同程度ROP表現(xiàn),其中127例受檢超早產(chǎn)兒、410例受檢VLBW患兒的檢出比例分別為47.2%(60例)、23.4%(96例)。ROP患兒中11例(10.4%)接受了激光光凝手術(shù)治療。與未檢出ROP的存活極早產(chǎn)兒比較,ROP患兒的吸氧時(shí)間顯著延長(zhǎng)(中位數(shù)：26天vs7天,P0.001)；與未接受手術(shù)治療的ROP超早產(chǎn)兒相比,接受ROP光凝術(shù)的超早產(chǎn)兒氧療時(shí)間顯著較長(zhǎng)(中位數(shù)：44天vs29天,P0.001)。 極早產(chǎn)兒PDA比例按胎齡分層有顯著差異,GA越小,患病比例越高。462例PDA患兒中,380例(82.3%)接受了布洛芬治療,其中130例(34.2%)患兒接受布洛芬治療超過1個(gè)療程,GA越小,接受布洛芬治療療程越多。365例接受心臟超聲復(fù)查,205例(56.2%)患兒首個(gè)療程后PDA閉合,83例(22.7%)的患兒需接受多個(gè)療程后PDA閉合；GA越小,PDA閉合的比例越低。22例(4.8%)PDA患兒在接受布洛芬治療后選擇PDA結(jié)扎術(shù)；GA越小,PDA結(jié)扎術(shù)的比例越高。82例(17.7%)PDA未接受布洛芬治療,心臟超聲復(fù)查PDA自發(fā)性閉合的比例較布洛芬治療的比例高(90.2%vs78.9%,P0.05),但布洛芬治療者GA和BW均較低、合并肺出血的比例較高、接受MV、氧療和住院時(shí)間較長(zhǎng)以及住院費(fèi)用較高,存活率無差異。接受多療程布洛芬治療的PDA患兒,GA較低,合并PPHN及吸入NO治療的比例、PDA結(jié)扎術(shù)的比例均較高,接受MV、氧療和住院時(shí)間較長(zhǎng)以及住院費(fèi)用較高,但存活率與1個(gè)療程布洛芬PDA患兒相比無差異(92.8%vs94.6%,P=0.495)。 6.極早產(chǎn)兒轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)以及對(duì)極早產(chǎn)兒臨床轉(zhuǎn)歸的影響 入選研究對(duì)象中,73例(10%)為本院出生新生兒(inborn),656例(90%)為轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒(outborn)。轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒入院時(shí)齡為2.0小時(shí)(中位數(shù)),本院出生新生兒為0.5小時(shí)(中位數(shù)),兩者有顯著性差異；GA、BW無差異(P0.05)。本院出生新生兒剖宮產(chǎn)、胎膜早破24小時(shí)比例高于轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒,而后者多胎比例高于前者(x2=4.173,P=0.041)。轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒產(chǎn)房搶救措施比例較本院出生新生兒高,但無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=3.588,P=0.058)。573例(78.6%)極早產(chǎn)兒入NICU前轉(zhuǎn)運(yùn)中接受氧療。轉(zhuǎn)運(yùn)中氧療模式主要為面罩319例(55.7%)和氣管插管氣囊加壓人工呼吸240例(41.9%)；氧療的比例與GA、BW密切相關(guān),胎齡越小、BW越低,接受氧療比例越高(x2=124.7,P0.001)。 對(duì)極早產(chǎn)兒入院后呼吸系統(tǒng)主要疾病、治療措施以及IVH比例比較,轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒和本院出生新生兒無差異(P0.05)。治愈或好轉(zhuǎn)出院患兒中轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒與本院出生新生兒的存活率無差異(91.3%vs94.5%,P=0.384),主要并發(fā)癥比例、MV、氧療和住院時(shí)間、住院費(fèi)用均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 對(duì)入院極早產(chǎn)兒按入院時(shí)齡2小時(shí)(中位數(shù))分層比較,入院時(shí)齡≤2h組GA、 BW均無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。入院時(shí)齡2h患兒母親體外人工受精妊娠、妊娠高血壓疾病、規(guī)律產(chǎn)檢、產(chǎn)前激素治療和選擇剖宮產(chǎn)比例顯著高于入院時(shí)齡2h組,而后者生后窒息、產(chǎn)房有創(chuàng)性復(fù)蘇措施比例較高。入院時(shí)齡≤2h組患兒存活率高于入院時(shí)齡2h組(91.2%vs84.8%,P0.05),且放棄治療存活出院的比例顯著低于后者(11.2%vs21.7%,P0.01)；存活者中主要并發(fā)癥比例、MV、氧療時(shí)間和住院時(shí)間以及住院費(fèi)用等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 7.死亡、存活者主要并發(fā)癥高危因素分析 極早產(chǎn)兒NICU病死率為8.4%(61例),包括13例(1.8%)院內(nèi)死亡和48例(6.6%)放棄治療死亡。其中病死率超早產(chǎn)兒為21.3%(35例),VLBW為10.5%(50例),ELBW患兒為26.5%(18例)。GA、BW越低,病死率越高。57例(93.4%)患兒死于新生兒期。 多因素logistic回歸分析表明低GA、有創(chuàng)MV、入院時(shí)齡2h、合并氣胸、合并肺出血、未使用PS治療、嚴(yán)重先天畸形是極早產(chǎn)兒死亡的獨(dú)立高危因素。 8.存活極早產(chǎn)兒住院時(shí)間和疾病負(fù)擔(dān) 存活極早產(chǎn)兒住院時(shí)間為43天(中位數(shù)),住院費(fèi)用為46409元(中位數(shù)),住院費(fèi)用大約為同期北京市城市居民年收入的1.4倍。GA越小,住院時(shí)間越長(zhǎng)、疾病負(fù)擔(dān)越重。例如,住院時(shí)間(中位數(shù))、住院費(fèi)用(中位數(shù))GA26wk分別為92天、132771元,GA31wk分別為37天、38142元。 9.放棄或姑息治療 131例(18.0%)極早產(chǎn)兒家長(zhǎng)放棄或姑息治療,其中67例(51.1%)是由于不能支付繼續(xù)住院治療費(fèi)用,31例(23.7%)與患兒治療效果差有關(guān),21例(16.0%)是由于伴有嚴(yán)重并發(fā)癥,12例(9.2%)是由于嚴(yán)重先天性疾病�；純悍艞壷委熀笏烙卺t(yī)院的比例為36.6%(48例)。 10.極早產(chǎn)兒臨床特征與發(fā)達(dá)國(guó)家比較 本研究中極早產(chǎn)兒產(chǎn)科干預(yù)比例與發(fā)達(dá)國(guó)家相比明顯較低,新生兒轉(zhuǎn)運(yùn)比例明顯高于發(fā)達(dá)國(guó)家,后者以產(chǎn)前轉(zhuǎn)運(yùn)為主。極早產(chǎn)兒總體存活率與發(fā)達(dá)國(guó)家水平相當(dāng),但主要并發(fā)癥比例較發(fā)達(dá)國(guó)家低,分析可能與本院超早產(chǎn)兒的比例低、存活率較低有關(guān)。 結(jié)論： 1、本研究首次回顧性全面分析了國(guó)內(nèi)超大容量NICU極早產(chǎn)兒病例資料,開創(chuàng)性的總結(jié)了國(guó)內(nèi)首個(gè)NICU亞專科監(jiān)護(hù)病房極早產(chǎn)兒的救治經(jīng)驗(yàn)。研究結(jié)果表明極早產(chǎn)兒的救治水平,如89.5%的VLBW患兒治愈或好轉(zhuǎn)出院,與美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家同期NICU中VLBW患兒存活率90%相當(dāng)。 2、本研究中極早產(chǎn)兒產(chǎn)科主動(dòng)干預(yù)比例(如產(chǎn)前激素應(yīng)用、剖腹產(chǎn)比例)明顯低于發(fā)達(dá)國(guó)家水平,而后者大量文獻(xiàn)研究表明極早產(chǎn)兒產(chǎn)前激素應(yīng)用可以顯著降低極早產(chǎn)兒的病死率和并發(fā)癥比例,因此我們可能在一定程度上延緩了極早產(chǎn)兒搶救時(shí)機(jī),影響了極早產(chǎn)兒,特別是超早產(chǎn)兒在NICU中的轉(zhuǎn)歸。如我院超早產(chǎn)兒存活率為78.7%,與美國(guó)(88%)等發(fā)達(dá)國(guó)家同期水平相比,仍然存在一定的差距。 3、本院已成功建立了目前國(guó)內(nèi)最大的極早產(chǎn)兒轉(zhuǎn)運(yùn)中心,所收治極早產(chǎn)兒中,90%通過本院新生兒轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)由分娩醫(yī)院主動(dòng)轉(zhuǎn)入。眾所周知,極早產(chǎn)兒轉(zhuǎn)運(yùn)可能增加死亡和顱內(nèi)出血等并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn),但本研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)運(yùn)新生兒和本院出生新生兒的存活率、主要并發(fā)癥比例無顯著差異,提示通過完善的轉(zhuǎn)運(yùn)網(wǎng)絡(luò),短距離、2小時(shí)內(nèi)新生兒轉(zhuǎn)運(yùn)以及區(qū)域性大規(guī)模的Ⅲ級(jí)NICU救治可以將轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的不良事件降至最低。 4、極早產(chǎn)兒,特別是超早產(chǎn)兒的預(yù)后差風(fēng)險(xiǎn)高、疾病負(fù)擔(dān)重,患兒家長(zhǎng)救治意識(shí)(擔(dān)心預(yù)后)以及社會(huì)、家庭經(jīng)濟(jì)水平嚴(yán)重影響這些患兒的預(yù)后。 第二部分人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞制備研究 目的： 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是干細(xì)胞家族的重要成員,具有高度增殖、自我更新能力,廣泛分布于骨髓、臍帶血、臍帶、胎盤等各種組織中。由于臍帶血來源豐富,采集方便,排斥小,無倫理爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn),臍帶血來源MSCs作為新生兒嚴(yán)重疾病移植用種子細(xì)胞受到重視。然而,臍帶血(Umbilical Cord Blood, UCB) MSCs分離培養(yǎng)成功率低,目前對(duì)于如何從臍帶血中獲取MSCs仍存在爭(zhēng)議。本研究的目的：(1)研究UCB-MSCs其體外分離、純化及培養(yǎng)條件,并對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定,建立了穩(wěn)定的UCB-MSCs培養(yǎng)體系。(2)明確不同GA來源UCB-MSCs培養(yǎng)成功率是否有差異。 方法： (1)無菌條件下收集新鮮健康新生兒UCB,采用密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法體外分離UCB-MSCs,加入含體積分?jǐn)?shù)為10%人胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基,調(diào)整細(xì)胞密度為1×1011/L接種于胎牛血清包被過的塑料培養(yǎng)瓶中,置于37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的C02飽和濕度環(huán)境下培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞生長(zhǎng)到80%融合時(shí),胰酶-EDTA混合液消化傳代。觀察貼壁細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征,計(jì)算累積群體倍增水平,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)分析細(xì)胞增殖活性、免疫表型,特異性染色方法鑒定細(xì)胞的多向分化潛能。(2)將UCB依GA分為3組：足月兒組(GA36周；n=16)；早產(chǎn)兒組(GA32-36周；n=11)；極早產(chǎn)兒組(GA32周；n=9)。采取相對(duì)適應(yīng)的條件培養(yǎng),觀察能成功培養(yǎng)出MSCs的比率,探討GA、UCB采集量、UCB單核細(xì)胞(monocuclear cells,MNCs)數(shù)量對(duì)MSCs培養(yǎng)成功率的影響。 結(jié)果： (1)UCB-單核細(xì)胞分離接種4-5d后開始可見有少量細(xì)胞貼壁,后貼壁細(xì)胞逐漸增多,并出現(xiàn)少量梭形和多角形細(xì)胞,2周后可見細(xì)胞形成集落,培養(yǎng)4-5周呈現(xiàn)融合。第2代細(xì)胞接種后24h內(nèi)開始貼壁,2周左右即可達(dá)80%～90%融合。流式細(xì)胞儀細(xì)胞表面分子標(biāo)記檢測(cè),此類細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)相關(guān)MSCs抗原標(biāo)記CD105、CD90、CD73和HLA-ABC,但不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD14、CD34和CD45。經(jīng)特殊培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)證實(shí)成功向軟骨、脂肪分化。傳代15代以內(nèi)細(xì)胞數(shù)擴(kuò)增能力逐漸降低,第3代至第7代擴(kuò)增能力較明顯。流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡檢測(cè)表明細(xì)胞增殖力和生長(zhǎng)均良好。細(xì)胞反復(fù)凍存復(fù)蘇后細(xì)胞生物特性穩(wěn)定。 (2)GA、UCB采集量、MNCs數(shù)量對(duì)UCB-MSCs培養(yǎng)成功與否的有顯著影響：①UCB-MSCs培養(yǎng)成功率為52.8%,成功者GA明顯小于未成功者(34.0±4.2vs36.8±3.3wk;t=2.184,P=0.036),MSCs培養(yǎng)成功率隨GA增加呈降低趨勢(shì),差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=3.769,P=0.152)。②成功者采血量顯著高于未成功者(43.2±13.6vs32.1±11.5ml;t=2.635,P=0.013)。成功者不同GA間UCB采血量有顯著差異(F=4.003,P=0.039),GA越大,采血量越多。③成功培養(yǎng)MSCs的樣本單位體積內(nèi)MNCs數(shù)顯著高于未培養(yǎng)出MSCs的樣本(32.9±11.7vs23.7±6.5×106/ml；t=2.863,P=0.008)；成功者不同GA間UCB單位體積內(nèi)MNCs數(shù)無顯著差異(F=1.087,P=0.361)。④按GA分層對(duì)MSCs產(chǎn)率比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三組間有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=13.309,P=0.000):GA越小,MSCs產(chǎn)率越高。 結(jié)論： (1)本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)傳統(tǒng)方法的優(yōu)化,根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)、細(xì)胞表明標(biāo)記分子以及體外分化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明我們成功分離UCB-MSCs,同時(shí)體外擴(kuò)增可以獲得豐量的UCB-MSCs,細(xì)胞經(jīng)凍存后復(fù)蘇培養(yǎng)、反復(fù)傳代后檢測(cè)細(xì)胞生物學(xué)特性穩(wěn)定,表明我們已建立了穩(wěn)定的UCB-MSCs培養(yǎng)體系。 (2)UCB培養(yǎng)成功率仍較低,其中GA.UCB采集量、MNCs數(shù)量對(duì)UCB-MSCs培養(yǎng)成功與否的有顯著影響。小胎齡、UCB采集量越多、單位體積內(nèi)MNCs數(shù)量越多等可能是UCB-MSCs相對(duì)容易培養(yǎng)成功的原因。小胎齡UCB-MSCs產(chǎn)率高于大胎齡,提示小胎齡UCB可能是更佳的MSCs體外分離培養(yǎng)來源。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R722.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2461935