【摘要】：背景和目的:Cornelia de Lange綜合征(CdLS)是一種罕見的多系統(tǒng)障礙遺傳病,主要表現(xiàn)為胚胎期和出生后發(fā)育障礙、上肢畸形、精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育遲滯、智力殘疾和行為異常。至今,已經(jīng)在CdLS病例中鑒定出至少5種致病基因,包括NIPBL(Nipped-B-like)、SMC1A、SMC3、RAD21和HDAC8,他們分別編碼粘連復(fù)合物(cohesin)亞基或與該復(fù)合物相互作用的蛋白質(zhì)。神經(jīng)障礙是CdLS的重要表現(xiàn),50%～60%CdLS病例由NIPBL突變引起,且NIPBL缺陷引起的CdLS病例通常具有更嚴(yán)重的神經(jīng)失調(diào),其機(jī)制還未知。在這里,我們將CaMKIIa-iCre與Nipblflox/flox小鼠雜交,建立錐體神經(jīng)元特異Nipbl敲除模型,研究NIPBL對(duì)神經(jīng)發(fā)育的影響和可能機(jī)制。研究方法:使用熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)技術(shù)檢測乳小鼠和成熟小鼠嗅球、海馬、下丘腦、大腦皮層和小腦的Nipbl表達(dá)。Nipbl Floxed(Nipblflox/flox 小鼠與CaMKIIa-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交,建立錐體神經(jīng)元特異 Nipbl 敲除模型(CaMKIIa-iCre~(+/-);Nipblflox/flox 簡寫為 NipblcKO),CaMKIIa-iCre~(-/-);Nipblflox/+(簡寫Nipbl+/+)作為對(duì)照組。記錄乳鼠的體重增長和生存期。P8對(duì)乳鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)里程碑測量以評(píng)價(jià)神經(jīng)發(fā)育。對(duì)異常的抽搐行為錄像。通過蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin and eosin,HE stain)觀察腦區(qū)的結(jié)構(gòu)變化,TUNEL染色檢查對(duì)應(yīng)腦區(qū)的細(xì)胞凋亡,免疫組織化學(xué)方法檢測突觸后密度蛋白PSD95和膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)。研究結(jié)果:1.Nipbl在乳小鼠嗅球明顯表達(dá),海馬和下丘腦少量表達(dá),而大腦皮層缺失。Nipbl在成年小鼠下丘腦少量表達(dá),而海馬、大腦皮層和小腦不表達(dá)。2.總體而言,NipblcKO乳鼠生長遲緩、神經(jīng)行為發(fā)育遲緩、行為異常和早期致死。在純CaMKIIa-iCre~(+/-);Nipblflox/flow窩中喂養(yǎng)的NipblcKO顯示與在具有混合基因型的乳鼠窩中NipblcKO有相同的表型,排除了與對(duì)照小鼠競爭作為原因的效應(yīng)。其中8/100 NipblcKO乳鼠早期基礎(chǔ)反射正常,2周齡后逐漸發(fā)展行為異常,出現(xiàn)抽搐。31/100 NipblcKO乳鼠2周前運(yùn)動(dòng)發(fā)育障礙。52/100 NipblcKO出生后一周內(nèi)死亡。3.NiblcKO乳鼠腦容量比對(duì)照組小,大腦皮層、海馬和下丘腦大體結(jié)構(gòu)存在。NipblcKO乳鼠皮層、下丘腦和海馬TUNEL陽性細(xì)胞明顯增加。NipblcKO乳鼠海馬突觸后密度蛋白PSD95明顯下降,而PSD95在大腦皮層和下丘腦的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NipblcKO乳鼠下丘腦GFAP信號(hào)有顯著升高。結(jié)論:1.錐體神經(jīng)元NIPBL敲除引起小鼠生長遲緩、神經(jīng)行為發(fā)育遲緩、行為異常和早期致死。2.神經(jīng)細(xì)胞凋亡、海馬的突觸后密度蛋白降低和下丘腦膠質(zhì)細(xì)胞增生可能與錐體神經(jīng)元NIPBL特異敲除小鼠生長遲緩、神經(jīng)行為發(fā)育遲緩和早期致死有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R725.9

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本文編號(hào)：2456323