【摘要】：研究目的自身免疫性心肌炎是一種以侵襲性心肌收縮功能損害,心臟增大和心功能衰竭為主要特征的致死性疾病。病毒感染和自身免疫性心肌損害是病理損害的重要因素,目前尚無有效治療。免疫性心肌炎時炎性細(xì)胞浸潤,心肌細(xì)胞壞死,發(fā)生纖維化,進(jìn)一步加重發(fā)展成擴(kuò)張性心肌病,最終導(dǎo)致心功能衰竭。心肌蛋白(CM)是自身免疫性心肌炎和病毒性心肌炎的主要自身抗原。經(jīng)外源性心肌蛋白免疫后的大鼠是常用的自身免疫性心肌炎的疾病模型,主要是由CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。已知N-乙�；�-絲氨酰-天冬氨酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是一種內(nèi)源性抗炎和抗纖維化的四肽,其前體是胸腺素p4,存在于正常人血漿和組織中,是多向分化造血干細(xì)胞增殖抑制劑。它首先在骨髓中合成、貯存,然后持續(xù)、緩慢釋放入血,分布到腎臟、心臟、肝臟、睪丸等組織和器官中,人外周血單核細(xì)胞、血漿、尿液內(nèi)都能檢測到該因子。AcSDKP幾乎可以被血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)完全水解,應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)后血漿濃度會明顯增高。在自身免疫性心肌炎(EAM)小鼠,ACEI可降低小鼠心肌炎的發(fā)病率,減輕嚴(yán)重程度,減輕遲發(fā)性過敏反應(yīng)。我們推測AcSDKP可能是通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)來改善EAM大鼠的心臟重建和功能障礙。 研究方法(1)用豬心肌球蛋白免疫Lewis大鼠,建立EAM大鼠模型。(2)將實驗大鼠分為2組,一組為AcSDKP治療組,皮下埋入裝有AcSDKP的迷你緩釋泵；另一組為空載對照組,皮下埋入僅裝有生理鹽水的迷你緩釋泵。同時用Lewis大鼠設(shè)立對照組,同樣分為AcSDKP治療組和空載組兩組。(3)實驗過程中每周檢測收縮期血壓,四周后檢測心臟超聲,處死大鼠,取血漿、脾、心臟。(4)心臟石蠟包埋,病理切片,免疫染色,檢測膠原含量及炎性細(xì)胞浸潤。提取脾臟單個核細(xì)胞,流式檢測T淋巴細(xì)胞。酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa),蛋白印跡法(Western Blots)檢測血漿中TNF-α, IL-1β, IL-17等細(xì)胞因子含量。 實驗結(jié)果(1)在EAM大鼠模型,與空載治療組相比,AcSDKP治療組心臟巨噬細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞和輔助性T淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤減少,固有免疫細(xì)胞因子(TNF-αIL-1β)和獲得性免疫細(xì)胞因子(IP-10,IL-17)的表達(dá)減低。(2)AcSDKP可改善EAM大鼠心臟的收縮和舒張功能,減輕心臟肥大,減少炎癥反應(yīng)和心肌纖維化。(3)在正常對照Lewis大鼠,AcSDKP治療組與空載治療組相比無明顯差異。 結(jié)論AcSDKP通過固有免疫和獲得性免疫,抑制EAM大鼠心臟炎性反應(yīng)和纖維化,對EAM大鼠心臟有明顯保護(hù)性作用,可抑制心臟肥大,改善心臟功能。 研究目的高血壓是目前世界上最常見,發(fā)病率最高的心血管疾病之一,長期高血壓的患者,心、腎等的血管發(fā)生纖維化重塑,造成心血管肥厚,腎功能損傷。高血壓是多基因遺傳和多環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。鹽的攝入在高血壓的形成中起著關(guān)鍵的作用,一方面會直接導(dǎo)致腎臟鈉儲留,引起血漿容量增加,從而形成高血壓；另一方面會使類洋地黃類物質(zhì)增加,抑制鈉泵,使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加,從而導(dǎo)致血管平滑肌或心肌的收縮,引起高血壓。Dahl鹽敏感(DSS)大鼠常被用來做為人類鹽敏感高血壓的動物模型。DSS大鼠給予高濃度鹽飲食后發(fā)生高血壓,極易出現(xiàn)終末器官損害(EOD),包括腎和心功能損害,輔助性T細(xì)胞(Th)參與高血壓EOD的發(fā)生。文獻(xiàn)報道在實驗性自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠中,Th細(xì)胞參與發(fā)病,我們前期實驗也發(fā)現(xiàn)AcSDKP通過固有免疫和獲得性免疫調(diào)節(jié)對EAM大鼠產(chǎn)生明顯保護(hù)性作用,抑制心臟炎性反應(yīng)和纖維化,改善大鼠心臟重塑和功能障礙。同時在醋酸脫氧皮質(zhì)酮(DOCA)鹽敏感性高血壓大鼠和5/6腎切除高血壓大鼠模型中,AcSDKP可明顯改善腎臟功能,抑制腎纖維化發(fā)生。我們推測AcSDKP可能通過免疫調(diào)節(jié)改善DSS高血壓大鼠的EOD。 研究方法(1)給予Dahl鹽敏感大鼠不同鹽濃度食物,濃度分別為0.23%鹽濃度和4.O%鹽濃度食物。給予4.0%鹽濃度食物組再分為2個治療組,一組為AcSDKP治療組,皮下埋入裝有AcSDKP的迷你緩釋泵；另一組為空載對照組,皮下埋入僅裝有生理鹽水的迷你緩釋泵。(2)每周監(jiān)測收縮期血壓,尿白蛋白含量。(3)6周后麻醉狀態(tài)下檢測腎小球濾過率(GFR),處死大鼠后留取血漿、腎臟及脾臟標(biāo)本。(4)腎臟石蠟包埋,制作病理切片,進(jìn)行免疫染色。并提取脾臟單個核細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞。Elisa方法,Western Blots法檢測脾臟細(xì)胞因子表達(dá)。 實驗結(jié)果對于DSS鹽敏感高血壓大鼠模型,AcSDKP不能降低大鼠的血壓,也不能增加腎小球濾過率,但可明顯減低Dahl鹽敏感大鼠尿白蛋白含量,抑制巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞在腎臟的浸潤,最終減少腎臟炎癥反應(yīng)和纖維化。 結(jié)論AcSDKP可以降低Dahl鹽敏感大鼠尿白蛋白含量,減輕腎臟纖維化。 研究目的N-乙酰基-絲氨-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酰(AcSDKP)是一種產(chǎn)生于骨髓,廣泛存在于血液和組織中的四肽,它是一種抑制細(xì)胞增殖的細(xì)胞因子。AcSDKP能夠刺激血管新生,尤其是腫瘤血管新生,在人類乳腺癌,頭頸癌,腎癌,肺癌,皮癌,卵巢癌,前列腺癌等多種癌癥中的表達(dá)升高。急性髓系白血病患者血漿中濃度增高,骨髓增殖性疾病患者血漿中濃度增高更為明顯。AcSDKP通過抑制單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和細(xì)胞因子,如PDGF、ET-1、MMPs等的浸潤,抑制成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成。同時AcSDKP可通過抑制TGF-β的下游調(diào)控因子Smads,減低NF-κB等的活性,抑制膠原合成,明顯減輕組織器官的纖維化,同時AcSDKP有促進(jìn)血管新生的作用。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)通過與相應(yīng)的血管內(nèi)皮生長因子受體結(jié)合刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移,增加微血管通透性,促進(jìn)新生血管的生成,與白血病的發(fā)生和轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。我們前期的研究結(jié)果,表明AcSDKP可能通過調(diào)控VEGF途徑來參與白血病發(fā)病中的血管新生,為研究AcSDKP在兒童急性白血病中的作用,我們本部分初步探討了AcSDKP在兒童急性白血病中的表達(dá)及與血管內(nèi)皮生長因子的相關(guān)性。 研究方法收集兒童急性白血病的血液標(biāo)本,提取血漿,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附(Elisa)法檢測血漿AcSDKP濃度,同時檢測患兒血漿血管內(nèi)皮生長因子水平,以正常兒童血漿作對照,比較急性白血病兒童血漿AcSDKP及VEGF表達(dá)變化及兩者相關(guān)性,初步探討AcSDKP在兒童急性白血病發(fā)生中的作用。 實驗結(jié)果兒童急性淋巴細(xì)胞白血病和急性髓系白血病血漿AcSDKP和VEGF表達(dá)水平均高于正常對照。治療達(dá)完全緩解后血漿AcSDKP及VEGF水平接近正常。AcSDKP與VEGF表達(dá)水平具有一致性。結(jié)果提示VEGF和AcSDKP均與兒童急性白血病發(fā)病相關(guān)。 結(jié)論兒童急性白血病發(fā)病中VEGF及AcSDKP表達(dá)水平增加,進(jìn)一步證明血管新生在白血病發(fā)病中發(fā)揮重要作用。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R593.2;R544.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 張軍,張瑜,范榮,劉莉,沈茜;實驗性自身免疫性心肌炎小鼠的免疫功能變化[J];重慶醫(yī)學(xué);2005年08期

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本文編號：2417780