發(fā)布時(shí)間：2019-01-18 08:12

【摘要】：目的：1.建立OVA致敏和激發(fā)的昆明小鼠慢性哮喘氣道重塑模型；2.通過觀察哮喘組、干預(yù)組及對照組小鼠肺組織PPAR-γ陽性細(xì)胞數(shù)的變化，肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和VEGF、IL-13水平的變化及三組小鼠肺組織病理、氣道形態(tài)學(xué)變化，探討PPAR-γ在支氣管哮喘氣道重塑發(fā)病機(jī)制的作用及其早期干預(yù)對哮喘氣道重塑的影響。 方法：4～6周齡，18～22g SPF級(jí)雌性昆明小鼠30只（由大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供），隨機(jī)分為3組:哮喘模型組（哮喘組）、羅格列酮干預(yù)組（干預(yù)組）及對照組，每組10只。以雞卵清蛋白（OVA）致敏的方法建立哮喘模型：哮喘組及干預(yù)組小鼠于實(shí)驗(yàn)第0、7、14天給予20μg OVA+150μl AL(OH)3+50μl NS(100mg/L)混懸液腹腔注射致敏；第27、28、29天，給予50μl OVA-NS(2g/L)滴鼻激發(fā)；第30～60天將哮喘組小鼠置于自制霧化箱內(nèi)給予2%OVA生理鹽水霧化液超聲霧化吸入，每天1次，每次持續(xù)30分鐘；干預(yù)組小鼠霧化前1小時(shí)首先給予羅格列酮5mg/Kg灌胃，霧化吸入OVA溶液方法同哮喘組；對照組以生理鹽水代替致敏液、激發(fā)液及霧化液，方法同哮喘組。在末次霧化24小時(shí)后,三組小鼠頸椎脫位處死、取材，取肺泡灌洗液，離心，上清液采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法測定VEGF、IL-13水平，沉渣在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)；制備肺組織石蠟切片，，分別行HE染色及免疫組化，HE染色肺組織切片在顯微鏡觀察小鼠肺組織病理變化及氣道形態(tài)學(xué)改變：總管壁面積/支氣管基底膜周徑(WAt／Pbm)、平滑肌面積/支氣管基底膜周徑（WAm／Pbm）及氣道平滑�。ˋSM）厚度；免疫組化肺組織切片在顯微鏡下分別觀察三組小鼠4個(gè)視野內(nèi)肺泡區(qū)染色陽性細(xì)胞(棕黃色)的百分比，計(jì)算PPAR-γ陽性數(shù)；取出所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5軟件進(jìn)行分析。 結(jié)果： 1.激發(fā)后哮喘組小鼠出現(xiàn)不同程度的煩躁不安、呼吸急促、前肢搔鼻、俯伏不動(dòng)，二便失禁，皮毛失去光澤等癥狀；干預(yù)組小鼠干預(yù)前癥狀同哮喘組小鼠，干預(yù)后此類癥狀減輕；而正常組小鼠無此類癥狀。 2.肺組織病理學(xué)觀察：在高倍鏡下觀察，哮喘組小鼠氣管壁增厚，管腔變形、呼吸道可見上皮細(xì)胞脫落、粘液分泌增多、氣道平滑肌增厚、血管管壁增、粘膜下及管壁周圍炎性細(xì)胞浸潤明顯；干預(yù)組可見上皮細(xì)胞偶有脫落，粘膜相對光滑完整，管壁及血管壁及炎性細(xì)胞浸潤均明顯輕于哮喘組；對照組小鼠氣管及肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管粘膜上皮完整，未見明顯炎癥細(xì)胞。 3.氣道形態(tài)學(xué)分析：哮喘組、干預(yù)組及對照組小鼠總管壁面積/支氣管基底膜周徑（WAt/Pbm）分別為15.25±1.43μm~2/μm、11.94±1.26μm~2/μm、10.79±2.20μm~2/μm；平滑肌面積/支氣管基底膜周徑（WAm／Pbm）分別為4.17±0.70μm~2/μm、2.88±0.63μm~2/μm、4.02±0.77μm~2/μm；氣道平滑�。ˋSM）厚度分別為15.7±2.0μm、10.7±1.3μm、5.1±1.8μm。哮喘組小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、ASM厚度均較干預(yù)組及對照組明顯升高（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；干預(yù)組小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、ASM厚度均較對照組明顯升高（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.小鼠BALF中嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)：哮喘組小鼠為12.32±0.91×106/ml，干預(yù)組小鼠為7.13±0.41×106/ml，對照組小鼠為0.50±0.08×106/ml。哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)水平明顯高于干預(yù)組及對照組（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；干預(yù)組嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與對照組比較（P0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.肺泡灌洗液IL-13、VEGF水平：哮喘組、干預(yù)組及對照組BALF中IL-13水平分別為59.82±16.98pg/ml、40.25±3.87pg/ml、35.05±6.67pg/ml；VEGF水平分別為246.14±15.77pg/ml、32.75±2.45pg/ml、85.40±8.32pg/ml。哮喘組IL-13、VEGF水平明顯高于對照組及對照組（P0.01）；干預(yù)組BALF中IL-13、VEGF水平較哮喘組有所下降，與對照組比較仍有顯著性差異(PO．01)。 6.免疫組化觀察肺組織PPAR-γ陽性計(jì)數(shù)：哮喘組為13.05±0.83，干預(yù)組為18.14±0.83，對照組為7.63±0.74；干預(yù)組PPAR-γ陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于對照組、哮喘組(P0.01)；哮喘組PPAR-γ陽性細(xì)胞數(shù)高于對照組（P0.01）。 結(jié)論： 1.昆明小鼠經(jīng)卵蛋白致敏及反復(fù)激發(fā)可建立理想哮喘模型，同時(shí)具備氣道炎癥及氣道重塑兩大特征； 2.PPAR-γ在哮喘小鼠氣道上皮及炎性細(xì)胞高表達(dá)，參與了小鼠的氣道重塑過程； 3.活化的PPAR-γ可通過抑制Th2細(xì)胞分別在炎癥水平、氣道平滑肌的增生、氣道小血管增生的方面干預(yù)哮喘氣道重塑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R725.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2410492