發(fā)布時間：2019-01-07 12:58

【摘要】：目的：研究Omi/HtrA2特異性抑制劑（Ucf-101）對早產鼠高體積分數氧(高氧)肺損傷的保護作用。 方法：以剖宮術取出孕21d大鼠作為早產鼠，72只新生早產Wistar大鼠在生后12h隨機分為對照組、高氧組、高氧+Ucf-101組，每組24只，高氧+Ucf-101組在高氧暴露前10min，按1.5μmol.kg~(-1)腹腔注射Ucf-101，其余兩組在相同時點注射等量的9g.L~(-1)鹽水（N.S），高氧組和高氧+Ucf-101組持續(xù)暴露于950ml·L~(-1)氧氣中，對照組置于同一室內常壓空氣中。分別于暴露1d、3d、7d時，每組取動物8只，留取肺組織標本。左肺制作石蠟切片，采用HE染色觀察不同時間點其肺組織病理改變；采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(streptavidin-peroxidase,SP）法檢測Omi/HtrA2、X連鎖凋亡抑制蛋（X-linked inhibitor of apoptosisprotein, XIAP）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)在各組肺組織的表達；采用原位末端標記法(TUNEL)檢測肺細胞凋亡的情況；右肺制作冰凍切片，采用間接免疫熒光雙染色法，在激光共聚焦顯微鏡觀察Omi/HtrA2在細胞內的轉位。 結果：(1)肺組織病理學改變：各實驗組暴露1d肺組織病理學檢查均無差異。對照組暴露1d、3d、7d，肺組織未見病理改變，肺組織發(fā)育逐漸成熟，肺泡結構逐漸規(guī)整，大小均勻，肺泡間隔變薄。與對照組比較，高氧組肺組織可見肺泡炎性改變和肺發(fā)育滯后，而高氧+Ucf-101組病理改變較高氧組減輕。(2) Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9蛋白在肺組織的表達與分布：Omi/HtrA2、XIAP和Caspase-9普遍表達于早產鼠肺泡上皮細胞、支氣管上皮細胞及血管內皮細胞的胞質中。對照組Omi/HtrA2表達微弱，高氧組Omi/HtrA2隨著暴露時間的延長表達逐漸明顯，高氧+Ucf-101組在同一時間點較高氧組減輕，，與對照組相比有統(tǒng)計學差異（平均光密度值AOD：1d5.13±0.23vs8.12±1.16vs7.19±0.51、3d5.27±0.80vs9.64±0.8vs8.42±1.67、7d5.42±0.32vs11.95±1.05vs9.07±0.53,1d、3d、7d P＜0.01)；對照組XIAP表達明顯，高氧組XIAP隨著暴露時間的延長表達逐漸微弱，高氧+Ucf-101組在同一時間點較高氧組明顯增加,與對照組相比有統(tǒng)計學差異(AOD：1d6.91±0.69vs5.69±0.71vs5.98±0.86、3d7.25±2.34vs2.91±0.79vs4.57±1.04、7d6.84±1.0vs1.61±0.75vs3.90±0.98,3d、7d P＜0.01)；對照組Caspase-9表達微弱，高氧組Caspase-9隨著暴露時間的延長表達逐漸明顯，高氧+Ucf-101組在同一時間點較高氧組明顯減輕，與對照組相比有統(tǒng)計學差異(AOD：1d3.51±0.56vs6.33±1.10vs4.78±1.18、3d4.23±0.59vs12.17±1.71vs8.86±0.69、7d4.10±0.92vs16.28±1.38vs12.47±1.23，1d、3d、7d P＜0.01)。(3) TUNEL檢測凋亡結果：對照組有少量TUNEL陽性細胞，高氧組隨著暴露時間的延長TUNEL陽性細胞逐漸增加，高氧+Ucf-101組在同一時間點較高氧組明顯減少，與對照組相比有統(tǒng)計學差異(凋亡指數：1d14.13±1.70vs25.64±1.01vs20.94±1.70、3d14.05±2.07vs44.58±1.89vs31.38±1.35、7d14.25±1.36vs55.62±1.62vs40.65±1.83，1d、3d、7d P＜0.01)(4) Omi/HtrA2的胞內轉位：對照組有少量轉Omi/HtrA2位陽性細胞，高氧組隨著暴露時間的延長Omi/HtrA2轉位陽性細胞逐漸增加，高氧+Ucf-101組在同一時間點較高氧組明顯減少，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（轉位率：1d6.47±0.84vs23.58±2.12vs17.33±0.95、3d7.24±0.95vs39.12±2.23vs32.58±1.25、7d7.80±0.67vs54.12±1.94vs40.57±1.67，1d、3d、7d P 0.01）。 結論： Ucf-101可能減少Omi/HtrA2在肺細胞胞質中的表達和線粒體的轉位，抑制肺細胞凋亡，從而減輕早產鼠高氧肺損傷。
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【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R722.6

【參考文獻】

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本文編號：2403686