【摘要】：研究背景 在我國,隨著傳染性疾病的發(fā)病與死亡率顯著降低,出生缺陷和遺傳病已成為顯著問題。神經(jīng)管畸形(neural tube defects, NTDs)是一種嚴重的出生缺陷疾病,指在胚胎早期發(fā)育過程中神經(jīng)管閉合不全而導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)畸形。目前,全世界NTDs的發(fā)病率約為1-2%o。我國是NTDs高發(fā)地區(qū),最新統(tǒng)計,NTDs在我國山西省部分地區(qū)發(fā)病率高達19.94%o,因此,NTDs仍然是影響我國人口素質(zhì)、危害生命和生活質(zhì)量的重要公共衛(wèi)生問題。NTDs是多因素導(dǎo)致的復(fù)雜疾病,目前的研究認為NTDs是遺傳和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。葉酸等環(huán)境因素在NTDs發(fā)生中的作用已引起廣泛重視。但是,其遺傳機制仍不明確。大量的研究表明,細胞極性的建立過程與NTDs的發(fā)生密切相關(guān),其中頂-基底極性蛋白復(fù)合體PARD3-PAR6-aPKC具有重要作用,尤其是其核心組分PARD3的作用不容忽視。近期的研究表明PARD3在斑馬魚初級神經(jīng)胚形成中具有關(guān)鍵作用,它的極性分布對于發(fā)育過程中的非對稱性分裂,神經(jīng)細胞軸突的形成和上皮細胞緊密連接的建立是必需的。PARD3缺失導(dǎo)致分裂的神經(jīng)管上皮細胞不能穿過中線,鏡像對稱分布失敗,異常神經(jīng)管形成。另外有研究表明PARD3減少導(dǎo)致出現(xiàn)腦水腫,腦脊髓液流動異常等人類NTDs的伴隨癥狀。隨著對極性蛋白PARD3在斑馬魚等脊椎動物神經(jīng)胚形成過程中的作用研究不斷深入,PARD3在人類神經(jīng)胚形成中的作用引起越來越多研究者的重視。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)和拷貝數(shù)變異(copy number variation, CNV)是基因組多態(tài)性的兩種重要形式,它們在人類表型多樣性以及人類對疾病的易感性方面具有重要作用。大量的研究顯示人類基因組中的SNP和CNV與一些出生缺陷疾病相關(guān)。而目前PARD3基因SNP和CNV的研究僅局限于腫瘤和炎癥。因此,探討PARD3基因SNP和CNV與NTDs發(fā)生的相關(guān)性有可能為NTDs的發(fā)病機制研究提供新的線索。 目的 1.探討PARD3基因SNP與中國山西省出生缺陷高發(fā)區(qū)NTDs發(fā)生的相關(guān)性。 2.檢測PARD3基因全部外顯子區(qū)CNV情況,探討PARD3基因外顯子區(qū)CNV在中國山西省出生缺陷高發(fā)區(qū)NTDs發(fā)生中的作用。 方法 1.采用病例對照研究,收集我國山西省出生缺陷高發(fā)區(qū)NTDs標本224例,對照組為非病理性終止妊娠的正常標本253例。提取脊髓組織DNA,利用MassARRAY分子量陣列分析平臺中的iPLEX Gold SNP Genotyping系統(tǒng),檢測PARD3基因上53個SNP位點的基因分型,用SPSS軟件和SHEsis軟件分析這53個SNP位點及相應(yīng)單體型與中國山西省出生缺陷高發(fā)區(qū)NTDs發(fā)生的相關(guān)性。 2.采用病例對照研究,收集我國山西省NTDs標本168例,對照組為非病理性終止妊娠的正常標本231例。提取脊髓組織DNA,改進MassARRAY分子量陣列分析平臺中的iPLEX Gold SNP Genotyping系統(tǒng),分析PARD3基因上25個外顯子的拷貝數(shù),用real-time PCR和普通PCR后常規(guī)測序的方法對部分結(jié)果進行驗證。對有缺失的標本進行組織特異性檢測,并初步分析其對PARD3蛋白功能的影響。 結(jié)果 1.共挑選了PARD3基因上53個SNP進行檢測,去掉分型成功率低于90%的2個位點,不符合Hardy-Weinberg平衡的2個位點和微效等位基因頻率小于5%的2個位點,共對47個SNP進行了病例-對照關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果顯示,有6個SNP位點(rs2496720, rs2252655, rs3851068, rs118153230, rs10827337and rs12218196)的MAF在病例和對照組有明顯差別(P0.05),這種差別在無腦兒中尤其明顯。我們對以上有關(guān)聯(lián)的位點進行了單體型分析,它們共構(gòu)成了4種常見的單體型,這4種單體型在病例和對照組均有明顯差別(P0.01)。根據(jù)表型進行分層分析后顯示,有3種單體型(TGTGGT, TACGAC和TACGGT)在無腦兒組和對照組仍然有明顯差別(P0.05)。只有一種單體型(TACGAC)在脊柱裂組和對照組有明顯差別(P0.05),此外,研究還發(fā)現(xiàn)"CGTGGT"這種單體型是無腦兒獨有的,提示其和無腦兒強烈的相關(guān)性。 2.我們對MassARRAY分子量陣列分析平臺中的iPLEX Gold SNP Genotyping系統(tǒng)中檢測CNV的方法進行了改進,結(jié)果表明改進后的方法準確性高,操作簡便,適用范圍更廣。 3.對PARD3基因25個外顯子的CNV檢測表明,第21和25號外顯子病例和對照組均有拷貝數(shù)增加,兩組無明顯差異。第14號外顯子病例組有一雜合性缺失,在人類基因組拷貝數(shù)數(shù)據(jù)庫(database of genomic variants, DGV)中未發(fā)現(xiàn)此微缺失的報道。其余外顯子未檢測到拷貝數(shù)變異。對6種組織(脊髓,肝,心,肺,腎,皮膚)的檢測結(jié)果表明,第14號外顯子的雜合性缺失無組織特異性。用PCR后測序的方法,我們明確了這一雜合性缺失的確切位置。用Western blotting方法,檢測了心和腎組織中蛋白的表達,結(jié)果顯示,這一雜合性缺失顯著降低了100kDa異構(gòu)體蛋白的表達。 結(jié)論 PARD3基因上6個SNP與中國山西出生缺陷高發(fā)區(qū)NTDs的發(fā)生相關(guān),這種相關(guān)性受NTDs表型的影響。PARD3基因外顯子區(qū)CNV在中國山西出生缺陷高發(fā)區(qū)人群較少見,本研究發(fā)現(xiàn)并鑒定了第14號外顯子微缺失及確切位置,這種缺失導(dǎo)致PARD3蛋白功能改變,可能是無腦兒的致病原因之一。本研究結(jié)果初步揭示了極性蛋白基因PARD與NTDs發(fā)生的相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R748

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王志國 ,褚存超 ,郭偉;比較基因組雜交技術(shù)在頭頸部鱗癌診斷中的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;2004年05期

2 王琪;活動中的動態(tài)突變[J];國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊;1994年04期

3 曾昭暄,馬國建;卵巢癌多重基因改變的臨床研究(附30例分析)[J];山東醫(yī)藥;2000年02期

4 宋軍,金春蓮,孫開來;東北地區(qū)正常人Huntington基因內(nèi)CAG拷貝數(shù)的變異范圍及其應(yīng)用研究[J];中華神經(jīng)科雜志;1996年06期

5 李影,何蘊韶,程剛,李虎;用熒光定量PCR方法檢測轉(zhuǎn)染細胞中外源基因的拷貝數(shù)[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年01期

6 楊曉蘇,丁華新,肖波,吳志國,張麗芳;兒童型脊髓性肌萎縮癥SMN-T和SMN-C拷貝數(shù)定量分析[J];中華兒科雜志;2004年02期

7 ;鼻咽癌的基因改變和EB病毒感染[J];新醫(yī)學(xué);1995年01期

8 Writzl K.;Zorn B.;Peterlin B.;李躍萍;;不育男性中DAZ基因的拷貝數(shù)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(婦產(chǎn)科學(xué)分冊);2006年03期

9 李玉華,徐友梅,阮麗榮,蘇堤;鼠傷沙門氏菌Ara~r正向突變試驗檢測化學(xué)誘變劑的初步報告[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);1987年03期

10 王日春;方孝美;袁春妹;周慶;;HBV DNA拷貝數(shù)與Pre-S_1、HBeAg、HBsAg定量檢測相關(guān)性分析[J];浙江預(yù)防醫(yī)學(xué);2006年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張建軍;施碧紅;施巧琴;吳松剛;;高產(chǎn)α-淀粉酶的米曲霉工程菌株的構(gòu)建[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2008年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

2 王平;呂玉民;劉玉龍;韓林;陳曉培;趙陽輝;;電離輻射致人外周血有核細胞mtDNA 4977bp缺失的實時定量PCR分析[A];中國毒理學(xué)會放射毒理專業(yè)委員會第七次、中國毒理學(xué)會免疫毒理專業(yè)委員會第五次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致突專業(yè)委員會第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致畸專業(yè)委員會第二次、中國環(huán)境誘變劑學(xué)會致癌專業(yè)委員會第二次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

3 鄭敏巧;劉池波;;血清乙肝病毒外膜大蛋白與HBV-M及HBV-DNA檢測的關(guān)系[A];2008年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

4 王棟;張元女;王明月;夏繼光;程立新;李朋飛;李賓;王晨光;郭政;;基于拷貝數(shù)數(shù)據(jù)揭示基因在癌基因組中廣泛擴增[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進步推動中國西部經(jīng)濟與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會大會論文摘要匯編[C];2011年

5 應(yīng)康;;cDNA芯片在急性白血病中研究基因表達譜和拷貝數(shù)變化的應(yīng)用[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

6 季濤云;吳曄;王靜敏;肖靜;冷雪榮;李潔;趙海娟;楊艷玲;秦炯;吳希如;姜玉武;;不明原因腦發(fā)育遲緩/智力障礙患兒染色體亞端粒區(qū)拷貝數(shù)異常的研究[A];遺傳學(xué)與社會可持續(xù)發(fā)展——2010中國青年遺傳學(xué)家論壇論文摘要匯編[C];2010年

7 王貴;裘衛(wèi)東;;基因在疼痛與鎮(zhèn)痛中的影響[A];浙江省醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會成立大會暨首屆浙江省醫(yī)學(xué)會疼痛學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

8 徐強;張學(xué)軍;楊森;;拷貝數(shù)變異(CNVs)的研究進展[A];中華醫(yī)學(xué)會第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

9 蘇宗權(quán);陳萬金;林曉貞;吳志英;王檸;林珉婷;慕容慎行;;肌萎縮側(cè)索硬化癥SMN基因定量研究[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

10 關(guān)新元;;比較基因組雜交技及微陣列技術(shù)在腫瘤研究中的應(yīng)用[A];第三屆“分子核醫(yī)學(xué)在腫瘤診斷與治療中的應(yīng)用與研究進展”全國腫瘤分子標志的研究與方法學(xué)進展學(xué)術(shù)交流會資料匯編[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 鄭詩亮;薛人望談基因與生命[N];東方早報;2011年

2 記者 夏欣;首信欲在全國拷貝數(shù)字北京[N];中國經(jīng)營報;2002年

3 周道奇 編譯;全球變暖哺乳動物基因改變[N];大眾科技報;2003年

4 東方IC;基因改變 老鼠不怕貓[N];北京日報;2008年

5 高;基因改變的蚊子可幫助戰(zhàn)勝瘧疾[N];國際經(jīng)貿(mào)消息;2000年

6 田地;基因微妙變化預(yù)示疾病[N];大眾科技報;2005年

7 本報記者 丁一嵐;強勢國片前后堵截“哈利波特”[N];中國電影報;2007年

8 記者　陳丹;“沉默”基因播下癌癥“種子”[N];科技日報;2007年

9 本報記者 胡嶸;《好奇害死貓》拷貝增至180多個[N];中國電影報;2006年

10 本報記者 丁一嵐;進口影片規(guī)避國產(chǎn)大片[N];中國電影報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高永輝;PARD3基因單核苷酸多態(tài)性和拷貝數(shù)變異與神經(jīng)管畸形發(fā)生的相關(guān)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

2 張彤雯;APOBEC3B基因拷貝數(shù)變異與乙肝相關(guān)性肝細胞癌易感性[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

3 楊曉杰;轉(zhuǎn)基因棉花中T-DNA整合特征研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

4 黃燦;綜合征型先天性心臟病與拷貝數(shù)變異遺傳學(xué)研究[D];中南大學(xué);2012年

5 楊鐵林;利用人類全基因組拷貝數(shù)變異和SNP多態(tài)性揭示骨質(zhì)疏松和肥胖癥的遺傳致病機理[D];西安交通大學(xué);2009年

6 馬金芳;人肺癌變過程中的分子遺傳學(xué)改變[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

7 劉亞蘭;中國人群兒童孤獨癥的NRXN1基因關(guān)聯(lián)研究和兩種疾病相關(guān)拷貝數(shù)變異的鑒定[D];中南大學(xué);2012年

8 劉紅梅;馬鈴薯Y病毒CP基因介導(dǎo)抗性與轉(zhuǎn)基因整合方式的關(guān)系及抗性傳導(dǎo)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

9 羅勇軍;線粒體基因組與高原習(xí)服適應(yīng)相關(guān)性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

10 李健;黃色粘球菌DK1622雙拷貝groELs基因的功能分析及應(yīng)用[D];山東大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 沈鑒東;1.143例不明原因智力障礙/生長發(fā)育遲緩患者全基因組拷貝數(shù)變異分析 2.1例Pallister-Killian綜合征的遺傳學(xué)診斷和形成機制分析[D];中南大學(xué);2010年

2 周婧;GSTM1、GSTT1拷貝數(shù)變異與漢族人年齡相關(guān)性白內(nèi)障的關(guān)系[D];南通大學(xué);2009年

3 劉東吉;甘草HMGR、SQS、β-AS合酶基因CNVs與產(chǎn)地、形態(tài)的相關(guān)性研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 高香;皮肌炎患者腫瘤壞死因子α（TNF-α）基因多態(tài)性位點研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

5 葛建平;運動發(fā)酵單胞菌和大腸桿菌間穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建及大腸桿菌K-12 talB基因的表達[D];天津大學(xué);2005年

6 周云麗;乳腺癌線粒體DNA突變和拷貝數(shù)改變的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

7 蘇宗權(quán);散發(fā)性肌萎縮側(cè)索硬化癥SMN基因的缺失及定量研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

8 盧珍玲;應(yīng)用水痘—帶狀皰疹病毒報告細胞系定量帶細胞病毒的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

9 郭玉芳;棉花聚合不同轉(zhuǎn)Bt基因材料的表達特征及轉(zhuǎn)基因正常、突變株間的分子差異研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

10 王燕明;一個家系中一種新的突變Val（GTC）384Ala（GCC）導(dǎo)致遺傳性凝血因子X缺乏癥的研究[D];山東大學(xué);2008年

，

本文編號：2373509