【摘要】：【背景】 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)是頭頸部常見(jiàn)惡性腫瘤，臨床上以放療和化療為主要治療手段，雖然隨著調(diào)強(qiáng)放療技術(shù)發(fā)展，鼻咽患者治愈率提高及副反應(yīng)減少，但是晚期患者五年生存率仍不理想，且放療后仍有不可忽視的毒性反應(yīng)。而且容易產(chǎn)生多藥耐藥（multidrug resistance, MDR）現(xiàn)象。目前，尋找出高效、不良反應(yīng)小的新一代抗腫瘤藥物已是當(dāng)務(wù)之急。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）是綠茶多酚的主要成份，從綠茶中提練出來(lái)的一種高效低毒的天然化合物，同時(shí)兼有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)雙重作用，因此研究EGCG抗鼻咽癌的藥理作用機(jī)制，具有重大的理論及實(shí)踐意義，具有廣闊的市場(chǎng)前景。 隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)EGCG研究的深入，其抑制腫瘤細(xì)胞增殖及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡已達(dá)到共識(shí)[1-3]。但其具體機(jī)制不是明確。端粒酶是一種具有逆轉(zhuǎn)錄活性的DNA聚合酶，它與細(xì)胞生長(zhǎng)密切相關(guān)。大部分人類體細(xì)胞無(wú)或低端粒酶活性，故其分裂次數(shù)有限，最終細(xì)胞走向衰老與凋亡。相反，，少部分增殖活躍人類體細(xì)胞、生殖細(xì)胞與大部分腫瘤細(xì)胞（約占90%）其端粒酶活化，端粒不因復(fù)制而縮短，細(xì)胞走向永生化。端粒酶包含具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的逆轉(zhuǎn)錄蛋白（human telomerase reverse transcriptaseprotein，hTERT）和端粒酶RNA（TERC/TR）。hTERT是端粒酶的催化亞基，也是端粒酶激活的關(guān)鍵限速因子。本文將從細(xì)胞分子水平探討EGCG對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株CNE2的端粒酶hTERT及其基因表達(dá)的影響，為探討廣譜天然綠茶多酚EGCG在體內(nèi)、外的抗鼻咽癌機(jī)制，為EGCG的新藥開(kāi)發(fā)提供理論和科研依據(jù)。 【目的】 通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，探討廣譜天然綠茶多酚EGCG在體外鼻咽癌CNE2細(xì)胞的抗鼻咽癌機(jī)制，為EGCG的新藥開(kāi)發(fā)提供理論和科研依據(jù)。 【方法】 1.通CCK-8試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株的增殖抑制作用。 2.通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株周期及凋亡的影響。 3.利用RT-PCR實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株hTERT mRNA表達(dá)的影響。 4.利用Western blot實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株hTERT蛋白及c-Myc蛋白表達(dá)的影響。 【結(jié)果】 1. EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株的增殖具有明顯抑制作用，且呈現(xiàn)時(shí)間及藥物濃度依賴性。 2. EGCG具有阻滯鼻咽癌CNE2細(xì)胞周期進(jìn)展作用，使G0/G1期比例升高（P0.001），S期比例下降（P0.002）。低濃度組（100ug/mL）細(xì)胞周期阻滯呈時(shí)間依賴性，隨著濃度增大及作用時(shí)間廷長(zhǎng)細(xì)胞周期阻滯時(shí)間依賴性不明顯，但細(xì)胞凋亡率升高。 3. EGCG具有促鼻咽癌CNE2細(xì)胞凋亡作用，隨著作用時(shí)間廷長(zhǎng)其凋亡率升高（P0.001），呈時(shí)間依賴性。 4. EGCG具有下調(diào)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株hTERT mRNA（P0.001）及其蛋白的表達(dá)，且兩者成正相關(guān)性。 5. EGCG具有下調(diào)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株c-Myc蛋白的表達(dá)，且與hTERT mRNA及其蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)性。 【結(jié)論】 EGCG對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株具有抑制增殖，促進(jìn)凋亡作用，其可能原因是通過(guò)下調(diào)鼻咽癌CNE2細(xì)胞株C-Myc蛋白的表達(dá)從而抑制了hTERT mRNA的轉(zhuǎn)錄及hTERT蛋白翻譯，造成端粒酶的活性下降。
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【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 吳文華,吳文俊;茶多酚的抑癌作用機(jī)理[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè));2002年05期

2 沈永忠;王燕;陳始明;肖伯奎;蘇俊;陶澤璋;;短發(fā)夾RNA抑制hTERT基因?qū)Ρ茄拾┘?xì)胞端粒酶活性及PCNA和Caspase-3蛋白表達(dá)的影響[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2008年09期

3 張為新;茶多酚在預(yù)防口腔黏膜癌變中的應(yīng)用[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年05期

本文編號(hào)：2368906