【摘要】：第一部分 Prader-Willi綜合征的臨床表型分析及中外比較目的Prader-Willi綜合征(PWS)的臨床表型復雜多樣,并隨年齡增長而變化。1993年由Holm等人提出了PWS的臨床診斷標準,并一直沿用至今。PWS的分子遺傳學診斷方法也日益成熟,尤以甲基化分析方法中的甲基化特異性聚合酶鏈反應(MS-PCR)及甲基化特異性多重連接依賴的探針擴增(MS-MLPA)技術應用最為廣泛。國內對PWS的研究資料較少,對我國PWS的發(fā)病情況、分子遺傳機制、臨床表型特點和分子診斷學策略知之甚少。本研究旨在分析我國PWS患兒的臨床表型特征,并與國內外的相關研究進行比較,同時對我國PWS患兒的不同分子遺傳機制進行鑒別,探討基因型與臨床表型間的關系,為臨床早期篩選及進一步行分子遺傳學診斷提供幫助。方法以2007年1月至2012年6月間臨床懷疑或診斷為PWS的70例患兒為研究對象,采用MS-PCR方法進行快速的分子篩查和診斷。根據(jù)Holm等提出的臨床診斷標準中的主要、次要標準,總結PWS確診病例的臨床表型特征并與國內外相關文獻進行比較,進而歸納出我國PWS患兒的典型臨床特征。對經(jīng)MS-PCR分析確診的患者,采用MS-MLPA和短串聯(lián)重復序列(STR)技術進行不同分子遺傳機制的鑒別。結果70例臨床疑診患兒中,男性42例,女性28例,年齡分布在1月-14歲。經(jīng)MS-PCR分析,31(44%)名患兒確診為PWS,其中男性18例,女性13例。對31例患兒進一步行MS-MLPA分析,明確26例為父源缺失型(83.9%),另5例為甲基化異常,后經(jīng)STR遺傳連鎖分析,明確均為母源同源二倍體型(mUPD,16.1%),父源缺失型所占比例高于歐美高加索人群而與亞洲人群相似。共有25名患兒的臨床診斷評分滿足PWS的臨床診斷要求,另6名9月齡以下的嬰兒,分值均低于5分。所有患兒均存在母孕期胎動減少、新生兒期肌張力低下、喂養(yǎng)困難。過度攝食、肥胖、性腺發(fā)育不良的發(fā)生占77.42%(24/31)以上,特殊面容的發(fā)生占54.8%(17/31),35.5%(11/31)的患兒存在皮膚摳/抓后的活動性皮損,僅有12.9%(4/31)的患兒診斷為身材矮小。與mUPD型相比,缺失型患兒更易出現(xiàn)肥胖、過度攝食、構音障礙和手/足小。與中外研究相比,中國PWS患兒發(fā)育遲緩、身材矮小、唾液粘稠和色素減低的發(fā)生率較低,特殊面容、皮損、行為問題、睡眠障礙、手足/小及眼睛問題所占比例與臺灣人群的研究結果無差異,但顯著低于歐美人群,而母孕期胎動減少、嬰兒期喂養(yǎng)困難及性腺發(fā)育不良的發(fā)生率則高于歐美人群。結論PWS分子遺傳學診斷的具體策略,推薦以MS-PCR方法作為快速篩查手段,在此基礎上結合MS-MLPA和STR遺傳連鎖分析進行不同分子遺傳機制的鑒別。母孕期胎動減少、中樞性肌張力低下、喂養(yǎng)困難是中國PWS患兒臨床診斷的重要指征,性腺發(fā)育不良、過度攝食和肥胖也是重要的臨床線索,對于皮膚色素減低同時伴有肌張力低下及喂養(yǎng)困難者也應提高警惕,而身材矮小的發(fā)生并不多見。第二部分 Prader-Willi綜合征患兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性研究目的生長激素受體(Growth hormone receptor, GHR)基因外顯子3多態(tài)性,是目前臨床應用生長激素(Growth hormone, GH)治療疾病的研究熱點。本研究目的在于了解中國PWS患兒GHR基因外顯子3多態(tài)性,并與其他人群的多態(tài)性分布進行比較,為探討重組人生長激素(rhGH)在中國PWS患兒的臨床應用前景及療效與遺傳多態(tài)性間的相關性提供線索。方法回顧性分析57例經(jīng)分子遺傳學確診的PWS患兒。采用多重聚合酶鏈反應(PCR)的方法對GHR基因外顯子3進行多態(tài)性分析。與中外正常人群、不同病因的矮小人群和肥胖人群進行比較,總結中國PWS患兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性特點。結果57例分子遺傳學確診的PWS患兒中,GHR外顯子3三種基因型fl/fl、fl/d3、d3/d3的分布頻率分別為70%、23%和7%,與中國不同地區(qū)正常兒童的分布頻率無差異,但d3/d3和f1/d3基因型的頻率低于正常歐洲兒童。與不同病因身材矮小兒童進行比較,本研究PWS患兒GHR外顯子3基因型的分布頻率與特發(fā)性矮小(ISS)及Turner綜合征(TS)患兒的分布無差別,但不同于生長激素缺乏癥(GHD)的患兒。與我院以往的肥胖/超重兒童GHR基因外顯子3多態(tài)性的研究相比,中國PWS患兒GHR外顯子3基因型的分布特點與肥胖/超重兒童并無明顯差別。將文獻中報道的PWS患兒GHR外顯子3基因型與本研究中PWS患兒基因型的分布進行比較,發(fā)現(xiàn)不同人群PWS患兒GHR外顯子3基因型分布存在差異。結論中國PWS患兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性分布與正常人群并無差別,d3-GHR所占比例顯著低于GHD人群。中國PWS患兒GHR基因外顯子3的多態(tài)性分布與國外研究不完全一致,d3-GHR等位基因所占頻率較低,推測GHR基因外顯子3多態(tài)性可能存在種族差異。結合之前的研究結果,推測中國PWS患兒身材矮小發(fā)生率低可能與缺失型GHR基因外顯子3所占比例低有關。第三部分 Prader-Willi綜合征早期篩查和干預的多中心研究目的PWS的臨床診斷標準已于1993年由Holm等人提出并得到公認,但根據(jù)我院以往的研究發(fā)現(xiàn),嬰兒期患者的臨床表型多不能符合臨床診斷的要求。本研究旨在通過全國范圍內多個中心的參與,了解PWS在不明原因中樞性肌張力低下和喂養(yǎng)困難新生兒中所占的比例,探討中國PWS患兒新生兒期的臨床特點及早期篩查的臨床指征,觀察GH治療等早期干預的療效。方法對2012年5月至2013年8月各中心送檢的臨床疑似PWS患兒63例進行分析,采用MS-PCR方法進行快速篩查和診斷。采用MS-MLPA結合STR遺傳連鎖分析進行分子遺傳機制的鑒別。記錄并分析確診患者的身高、體重、頭圍、出生史及臨床表型特征,比較GH干預前后的體格和生化監(jiān)測指標的變化情況。結果63例各中心送檢的臨床疑似PWS患兒,男性34例,女性29例,年齡分布在5～28天。經(jīng)MS-PCR篩查,共確診PWS患兒16例(25%)。經(jīng)MS-MLPA結合STR遺傳連鎖分析,發(fā)現(xiàn)其中13例為父源缺失型(81.3%),3例為mUPD型(18.8%)。16例確診患兒中足月產(chǎn)13例、早產(chǎn)1例、過期產(chǎn)2例。順產(chǎn)4例,剖宮產(chǎn)12例。宮內窘迫10例,異常胎位5例。16例PWS患兒均存在母孕期胎動減少、中樞性肌張力低下和喂養(yǎng)困難(100%),特殊面容6例(37.5%),性腺發(fā)育不良13例(81.25%),其中男性隱睪9例(90%)、女性陰唇陰蒂偏小4例(66.7%),皮膚色素減退者8例,手/足小不明顯。4名患兒接受GH干預治療,持續(xù)時間1-6月不等,GH治療后身高和體重由生長曲線的P50逐漸升高至P90,甲狀腺功能、生長因子、空腹血糖、空腹胰島素、血脂等生化指標在治療前后均無異常發(fā)現(xiàn)和變化。結論在中國新生兒人群中,尤其在有不明原因中樞性肌張力低下、吸允無力、喂養(yǎng)困難的新生兒中,PWS約占四分之一,臨床醫(yī)生應加強對本病的早期識別。借助MS-PCR甲基化分析的方法,可實現(xiàn)PWS的早期篩查和快速診斷,其中母孕期胎動減少、中樞性肌張力低下和喂養(yǎng)困難是中國PWS患兒在新生兒期共有的重要臨床特征,而外生殖器發(fā)育不良和皮膚色素減低的存在有助于提高早期篩查的陽性率。嬰兒期即給予GH干預治療可改善患兒身高、體重等體格發(fā)育指標,對智能發(fā)育、內分泌代謝功能的影響尚待繼續(xù)深入地研究隨訪。
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【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.8

【參考文獻】

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1 崔敬茹;鄭榮秀;劉戈力;楊箐巖;梁東春;;生長激素受體外顯子3缺失多態(tài)性在矮小兒童與正常兒童中的分布比較[J];天津醫(yī)藥;2011年05期

2 李洪義;孟舒;陳爭;李海飛;杜敏聯(lián);馬華梅;魏海云;段紅蕾;鄭輝;聞人慶;宋新明;;普拉德-威利綜合征的分子遺傳診斷:一種連鎖分析方法的初步建立(英文)[J];遺傳學報;2007年10期

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本文編號：2367844