【摘要】：目的 建立腸道病毒(EV)、腺病毒(ADV)、EB病毒(EBV)、腮腺炎病毒(MuV)、人類皰疹病毒6型(HHV-6)、巨細胞病毒(CMV)、單純皰疹病毒2型(HSV-2)、麻疹病毒(MV)、雙�？刹《�(HPeV)、水痘帶狀皰疹病毒(VZV)、乙型腦炎病毒(JEV)、單純皰疹病毒1型(HSV-1)實時熒光定量PCR(FQ-PCR)檢測方法。 方法 根據(jù)文獻合成針對各病毒基因片段的特異性引物和TaqMan探針，構(gòu)建質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，評估該方法的特異性、靈敏度和重復(fù)性。 結(jié)果 1.獲得EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV、JEV、HSV-111種病毒的目的片段并成功構(gòu)建上述各病毒的質(zhì)粒。 2.所建立的EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV、VZV、JEV、HSV-1FQ-PCR檢測系統(tǒng)靈敏度分別為1.30×10~1拷貝數(shù)/μl、6.74×10~0拷貝數(shù)/μl、1.44×10~1拷貝數(shù)/μl、3.24×10~1拷貝數(shù)/μl、3.00×10~0拷貝數(shù)/μl、5.72×10~0拷貝數(shù)/μl、7.00×10~0拷貝數(shù)/μl、5.39×10~1拷貝數(shù)/μl、5.76×10~0拷貝數(shù)/μl、1.89×10~1拷貝數(shù)/μl、6.49×10~0拷貝數(shù)/μl、7.43×10~0拷貝數(shù)/μl，各標(biāo)準(zhǔn)品的濃度與Ct值間呈線性關(guān)系，R~2均大于0.99；擴增效率在0.9~1.1之間；同一樣本重復(fù)檢測3次，各組內(nèi)樣本Ct值的變異系數(shù)最大為1.46%，各組間樣本Ct值的變異系數(shù)最大為3.13%；特異性檢測中各自陽性標(biāo)本出現(xiàn)陽性擴增曲線，非陽性標(biāo)本未出現(xiàn)陽性擴增曲線。 結(jié)論 本實驗建立的EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV、VZV、JEV、HSV-1FQ-PCR檢測方法特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好，具有應(yīng)用于臨床檢驗的潛在價值。 目的 了解2010年7月~2011年10月年長沙地區(qū)急性病毒性腦炎和腦膜炎住院兒童常見病毒的流行特點，為本地區(qū)兒童急性病毒性腦炎和腦膜炎的防治提供科學(xué)依據(jù)。 方法 1.收集2010年7月~2011年10月在湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心診斷為急性病毒性腦炎及腦膜炎的住院患兒腦脊液(CSF)標(biāo)本。 2.采用FQ-PCR方法檢測腸道病毒(EV)、腺病毒(ADV)、EB病毒(EBV)、腮腺炎病毒(MuV)、人類皰疹病毒6型(HHV-6)、巨細胞病毒(CMV)、單純皰疹病毒2型(HSV-2)、麻疹病毒(MV)、雙�？刹《�(HPeV)、水痘帶狀皰疹病毒(VZV)、乙型腦炎病毒(JEV)、單純皰疹病毒1型(HSV-1)。 3.對各病毒檢出結(jié)果結(jié)合臨床資料進行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果 1.建立的FQ-PCR方法能檢測急性病毒性腦炎和腦膜炎兒童CSF中的常見病毒。 2.2010年7月~2011年10月共收集CSF標(biāo)本93份，其中臨床診斷為急性病毒性腦炎27例，急性病毒性腦膜腦炎22例，急性病毒性腦膜炎44例，共36份檢出病毒，總檢出率38.71%(36/93)，，其中EV最為常見，檢出率為24.73%(23/93)；ADV檢出率5.38%(5/93)；EBV檢出率4.30%(4/93)；MuV檢出率為3.23%(3/93)；HHV-6、CMV、HSV-2檢出率均為2.15%(2/93)；MV、HPeV檢出率均為1.08%(1/93)；未檢出VZV、JEV、HSV-1。 3.急性病毒性腦炎以5歲以上年齡段為主，急性病毒性腦膜炎以1~5歲年齡段常見，但陽性檢出率在季節(jié)、年齡段及性別之間無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.急性病毒性腦炎及腦膜炎病毒檢出陽性與陰性病例在臨床癥狀、體征、CSF留取時間及腦電圖結(jié)果之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；急性病毒性腦炎病例病毒檢出陽性與陰性之間CSF實驗室檢查中除白細胞計數(shù)有差異外，其余各項檢查結(jié)果之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義；急性病毒性腦膜炎病例中病毒檢出陽性與陰性之間CSF實驗室檢查比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 1.建立的FQ-PCR方法能檢測急性病毒性腦炎和腦膜炎兒童CSF中的常見病毒。 2.本研究期間內(nèi)，分別檢出EV、ADV、EBV、MuV、HHV-6、CMV、HSV-2、MV、HPeV9等種病毒，總檢出率38.71%，以EV最多見。 3.急性病毒性腦炎與腦膜炎的病毒陽性檢出率在季節(jié)、年齡段、性別之間均無差異。 4.病毒檢出陽性與陰性病例在臨床癥狀、體征、CSF留取時間及腦電圖結(jié)果之間無明顯不同。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.1

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本文編號：2357394