【摘要】：目的通過研究不同劑量重組人促紅細(xì)胞生成素(RhEPO)對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)后腦組織中水通道蛋白4(AQP-4)的影響,以探討EPO的神經(jīng)保護(hù)作用。 方法選取7日齡SD大鼠100例,隨機(jī)分為假手術(shù)組(20例)、對照組(20例)、RhEPO治療組[低劑量組(20例)、中劑量組(20例)、高劑量組(20例)]。假手術(shù)組僅分離右頸總動脈,不予結(jié)扎,不缺氧缺血不給予藥物。RhEPO治療組和對照組分離右頸總動脈結(jié)扎,后置8%氧氣2h制備新生大鼠HIBD模型。于模型建立后立即對低劑量組、中劑量組、高劑量組腹腔注射不同劑量的RhEPO1000IU/kg、2500IU/kg、5000IU/kg,隔日1次,連續(xù)4次,對照組和假手術(shù)組腹腔注射等體積的0.9%鹽水。每組隨機(jī)取10例于模型建立后3d、7d兩個時間點(diǎn)處死。HE染色觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)變化并應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和計算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測腦組織中AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)變化。 結(jié)果1.與對照組相比,3d時RhEPO治療組AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少(26.6±4.67、36.6±3.97、20.8±7.9、23.0±9.6,P0.05),中劑量和高劑量組較低劑量組AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05)。對照組較假手術(shù)組AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.05)。2.與對照組相比,7d時中劑量組、高劑量組AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)仍明顯減少(33.2±4.38、25.6±7.63,P0.05),高劑量組較中劑量組、中劑量組較低劑量組AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05),各組AQP-4陽性細(xì)胞數(shù)均較假手術(shù)組明顯增高(P0.05)。3.HE染色顯示模型建立后3d時對照組和RhEPO治療組右側(cè)腦組織出現(xiàn)神經(jīng)元腫脹、變性、凋亡和壞死,至7d時病理變化減輕,但相同時間RhEPO治療組右側(cè)腦組織細(xì)胞水腫、變性、凋亡和壞死均較對照組減輕。與低劑量組大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)病理改變相比較,中劑量組和高劑量組錐體細(xì)胞層次較多,細(xì)胞邊界較清楚,出現(xiàn)壞死及凋亡的數(shù)量明顯減少。假手術(shù)組兩側(cè)和對照組左側(cè)腦組織結(jié)構(gòu)無異常病理改變。 結(jié)論新生大鼠在HIBD后腦組織中AQP-4表達(dá)明顯增加,與HIBD后腦水腫嚴(yán)重程度密切相關(guān)。RhEPO可下調(diào)HIBD新生大鼠AQP-4蛋白的表達(dá),從而有效的減輕腦水腫,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。RhEPO神經(jīng)保護(hù)作用存在劑量依賴效應(yīng),2500IU/kg和5000IU/kg較1000IU/kgRhEPO減輕腦水腫的作用更明顯。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of recombinant human erythropoietin (RhEPO) at different doses on the expression of aquaporin-4 (AQP-4) in brain tissue after hypoxic-ischemic brain injury (HIBD) in neonatal rats and to explore the neuroprotective effect of EPO. Methods 100 7-day-old SD rats were randomly divided into sham operation group (n = 20) and control group (n = 20) [low dose group (n = 20), middle dose group (n = 20), high dose group (n = 20)]. In the sham-operated group, the right common carotid artery was isolated, without ligation, no hypoxia and ischemia, and the right common carotid artery was ligated in the RhEPO treatment group and the control group. The neonatal rat HIBD model was induced by 8% oxygen for 2 h after the ligation of the right common carotid artery. Immediately after the establishment of the model, intraperitoneal injection of different doses of RhEPO1000IU/kg,2500IU/kg,5000IU/kg, was given once every other day to low dose group, middle dose group and high dose group, and 0.9% saline was injected intraperitoneally in control group and sham operation group. Ten patients in each group were killed at two time points 3 days after the establishment of the model. The pathological changes of brain tissue were observed by HE staining and the changes of AQP-4 positive cells in brain tissue were detected by immunohistochemical method and computer image analysis technique. Result 1. Compared with the control group, the number of AQP-4 positive cells in the RhEPO treatment group was significantly lower than that in the control group (26.6 鹵4.67) (26.6 鹵4.67 鹵36.6 鹵3.97,20.8 鹵7.9 鹵23.0 鹵9.6 (P0.05). The number of AQP-4 positive cells in middle and high dose groups was significantly lower than that in low dose groups (P0.05). The number of AQP-4 positive cells in the control group was significantly higher than that in the sham operation group (P0.05). Compared with the control group, the number of AQP-4 positive cells in the high dose group was significantly lower than that in the control group at 7 days (33.2 鹵4.38 鹵25.6 鹵7.63 P 0.05), and the number of AQP-4 positive cells in the high dose group was significantly lower than that in the middle dose group. The number of AQP-4 positive cells in middle dose group was significantly lower than that in low dose group (P0.05). The number of AQP-4 positive cells in each group was significantly higher than that in sham-operated group (P0.05). 3.HE staining showed that neurons swelling, degeneration, apoptosis and necrosis appeared in the right brain tissue of the control group and RhEPO treatment group 3 days after the establishment of the model. At the 7th day, the pathological changes were alleviated, but the edema, degeneration, apoptosis and necrosis of the right brain tissue in the RhEPO treatment group were less than those in the control group at the same time. Compared with the pathological changes of cerebral cortex and hippocampus in the low dose group, the pyramidal cells in the middle dose group and the high dose group were more stratified, the cell boundary was clear, the number of necrosis and apoptosis was significantly decreased. There were no abnormal pathological changes in both sides of the sham operation group and the control group. Conclusion the expression of AQP-4 in the brain tissue of neonatal rats after HIBD is significantly increased, which is closely related to the severity of cerebral edema after HIBD. RhEPO can down-regulate the expression of AQP-4 protein in HIBD neonatal rats, thereby effectively attenuating brain edema. The neuroprotective effects of RhEPO were dose-dependent and 2500IU/kg and 5000IU/kg were more effective than 1000IU/kgRhEPO in alleviating brain edema.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R722.19

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本文編號：2354360