發(fā)布時間：2018-11-13 17:36

【摘要】：目的:觀察膽道閉鎖(biliary atresia,BA)患兒肝臟中是否存在血管增生的情況。研究血管生成相關(guān)因子包括血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)、血小板衍生生長因子BB(PDGFBB)、血小板衍生生長因子受體α(PDGFRα)、血小板衍生生長因子受體β(PDGFRβ)在BA患兒肝組織中的表達情況,探討其在BA血管改變中的作用,分析其與BA肝纖維化進程的關(guān)系。方法:1.選取天津市兒童醫(yī)院收治的膽道閉鎖患兒20例作為葛西組、膽汁淤積癥患兒8例和膽道擴張癥患兒12例共20例作為對照組、天津市第一中心醫(yī)院收治的由于BA肝硬化接受肝移植患兒20例作為移植組。2.HE染色觀察三組患兒肝臟組織的基本病理改變。CD34染色標(biāo)記血管,根據(jù)Weidner等方法計數(shù)肝臟中微血管密度。Masson染色標(biāo)記膠原纖維,根據(jù)Okamoto標(biāo)準(zhǔn)判定肝臟纖維化程度。3.免疫組織化學(xué)染色及實時熒光定量PCR方法檢測血管生成相關(guān)因子VEGF、HIF-1α、PDGFAA、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ在三組患兒肝組織中的蛋白及基因水平的表達情況。4.比較三組患兒血管改變的不同及各血管生成相關(guān)因子在三組患兒肝組織間的表達差異。分析各血管生成相關(guān)因子在膽道閉鎖患兒血管改變及肝臟纖維化進程中的作用。結(jié)果:1.三組患兒肝臟組織病理學(xué)改變及血管增生情況對照組肝臟小葉結(jié)構(gòu)接近正常,匯管區(qū)稍寬,可見少量炎癥細胞浸潤,無纖維化或纖維組織輕度增生。葛西組肝細胞濁腫淤膽,匯管區(qū)增寬,膽管增生,部分膽管內(nèi)見濃縮的膽栓,可見不同程度的炎細胞浸潤及纖維組織增生。移植組肝細胞片狀萎縮壞死,間質(zhì)內(nèi)見大量畸形增生膽管,廣泛纖維組織增生,假小葉形成。對照組CD34只在中央靜脈及匯管區(qū)內(nèi)小動脈和小靜脈中表達。葛西組可見匯管區(qū)及纖維間隔內(nèi)CD34表達明顯增多,且肝實質(zhì)間肝竇亦可見CD34表達。移植組肝臟見廣泛增生的纖維間隔內(nèi)CD34彌漫性表達。對照組,葛西組,移植組微血管密度分別為16.8±1.9、23.2±3.8、25.9±2.1(P0.05)。相比對照組,葛西組和移植組存在血管增生(均P0.017)。葛西組和移植組間微血管密度差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.017)。2.三組患兒各血管生成相關(guān)因子的蛋白及基因表達情況VEGF在對照組肝細胞,膽管細胞均呈中度陽性表達,而在葛西組和移植組上述細胞中均可見VEGF強陽性表達。HIF-1α在對照組為陰性,大部分肝細胞中未見表達,僅在個別肝細胞見細胞核染色;葛西組中,HIF-1α呈強陽性廣泛表達于肝細胞核及其胞質(zhì)中,移植組亦見肝細胞中HIF-1α強陽性表達。PDGFAA、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ在對照組中均只在匯管區(qū)部分細胞如纖維細胞,巨噬細胞中呈弱陽性表達,膽管細胞和肝細胞不表達。PDGFRα在葛西組中匯管區(qū)表達增多,并且開始表達在膽管細胞,肝細胞也出現(xiàn)少量表達,而在移植組中該兩種因子表達減少。PDGFBB和PDGFRβ在葛西組與移植組中均在匯管區(qū)和膽管細胞中表達增多。上述免疫組化染色結(jié)果經(jīng)IPP圖像分析軟件半定量后進行比較,結(jié)果顯示除PDGFAA外,VEGF、HIF-1α、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ三組間表達均存在差異,葛西組和移植組表達均高于對照組(P0.05)。葛西組和移植組比較顯示,VEGF,PDGFBB在移植組表達高于葛西組,PDGFRα在葛西組表達高于移植組(均P0.017)。PCR結(jié)果顯示,所有血管生成因子在三組間表達均存在差異,葛西組和移植組表達均高于對照組(P0.05)。葛西組和移植組比較顯示,VEGF、HIF-1α、PDGFBB在移植組表達高于葛西組,PDGFRα在葛西組表達高于移植組(均P0.017)。3.血管生成相關(guān)因子蛋白表達情況與血管增生和纖維化程度的相關(guān)性分析VEGF的表達水平與微血管密度呈正相關(guān)(P0.05)。HIF-1α、PDGFAA、PDGFBB、PDGFRα、PDGFRβ的表達水平和微血管密度無相關(guān)性。此外,HIF-1α和VEGF蛋白表達呈正相關(guān)(P0.05)。葛西組中HIF-1α,PDGFBB的蛋白表達與肝組織標(biāo)本纖維化程度呈正相關(guān)(均P0.05),VEGF,PDGFAA、PDGFRα、PDGFRβ與纖維化程度無相關(guān)性。微血管密度與纖維化程度呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:膽道閉鎖患兒肝臟存在血管增生的情況,缺氧誘導(dǎo)下的HIF-1α-VEGF信號通路上調(diào)可能是BA中調(diào)控血管增生的機制。PDGF家族成員在BA肝纖維化進展的早晚期發(fā)揮不同作用。BA中血管增生和纖維化進程相互作用,促進病變發(fā)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R725.7

【參考文獻】

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本文編號：2329885