本文選題：原發(fā)性腎病綜合征 + 腎康靈　； 參考：《福建中醫(yī)藥大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：目的： 體外實(shí)驗(yàn)以氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)誘導(dǎo)系膜細(xì)胞(mesangial cells,MCs)增殖,觀察其分泌CXCL16、CD36、解聚素與金屬蛋白酶10(a disintegrin and metalloprotease10, ADAM10)、ADAM17的水平以及絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信號通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以阿霉素腎病(adriamycin nephropathy,AN)大鼠為研究對象,觀察其腎組織的CXCL16、CD36、 ADAM10、ADAM17水平及MAPK信號通路相關(guān)蛋白的活性,闡明脂質(zhì)對腎損傷的作用機(jī)制。同時(shí)應(yīng)用益腎活血中藥腎康靈進(jìn)行干預(yù),觀察治療前后CXCL16、CD36、ADAM10、 ADAM17及MAPK信號通路相關(guān)蛋白的變化,從分子生物學(xué)及基因?qū)W水平進(jìn)一步闡明益腎活血中藥腎康靈干預(yù)PNS的作用機(jī)制,為提高小兒PNS的臨床療效和益腎活血法的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法： (1)基礎(chǔ)研究：體外實(shí)驗(yàn)將MCs按隨機(jī)數(shù)表法分為7組：①正常對照組；②ox-LDL組：③ox-LDL+CXCR6組：④ox-LDL+腎康靈低濃度組；⑤ox-LDL+1腎康靈高濃度組；⑥ox-LDL+阿托伐他汀低濃度組；⑦ox-LDL+阿托伐他汀高濃度組。采用MTT比色法測定MCs的增殖比率；分別采用ELISA法檢測MCs的CXCL16、CD36、IFN-γ、IL-6、TNF-α含量,Real Time-PCR、Western blot法檢測MCs的CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17的基因水平及其蛋白含量。采用Western Blot方法檢測MAPK通路相關(guān)蛋白(p38、JNK、 ERK)及核因子-κB (nuclear factor kappa B,NF-κB)的磷酸化水平。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)將大鼠按體質(zhì)量分層隨機(jī)法分為5組：①正常組；②AN病模組；③腎康靈(低濃度)+西藥組15只；④腎康靈(高濃度)+西藥組；⑤西藥組。各組連續(xù)灌胃22d。灌胃結(jié)束后,分別采用Real Time-PCR、Western blot法檢測大鼠腎組織的CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17的基因水平及其蛋白含量,并檢測尿蛋白定量及血白蛋白(albumin,ALB)、膽固醇(cholesterol,CH)水平,通過HE染色,電鏡觀察并分析腎組織病理形態(tài)學(xué)。 (2)臨床研究：PNS患兒采用隨機(jī)數(shù)表法分為腎康靈+西藥組和西藥組,同時(shí)在體檢中心抽取健康體檢兒童為健康對照組。采用ELISA法檢測PNS患兒治療前后血清CXCL16、 ADAM10、ADAM17的分泌變化,同時(shí)檢測血ALB、CH、24小時(shí)尿蛋白定量等以進(jìn)行療效評價(jià)。 結(jié)果： (1)基礎(chǔ)研究：體外實(shí)驗(yàn)表明利用ox-LDL誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞增殖后,其表面CXCL16、 CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的表達(dá)顯著升高(P0.01),加入CXCR6受體后,其表達(dá)水平進(jìn)一步升高(P0.01),腎康靈含藥血清組呈濃度依賴性降低上述指標(biāo)(P0.01); ox-LDL誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞增殖后,CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17的基因水平和蛋白含量顯著升高(P0.01),加入CXCR6受體后,其基因水平和蛋白含量進(jìn)一步升高(P0.01),腎康靈含藥血清組呈濃度依賴性降低上述指標(biāo)(P0.01或P0.05); ox-LDL誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞增殖后,MCs表面的p38、ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ Bp65的磷酸化水平顯著升高(P0.01),加入CXCR6受體后,其磷酸化水平進(jìn)一步升高(P0.01),腎康靈含藥血清組呈濃度依賴性降低ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ B p65的磷酸化水平(P0.01)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明AN大鼠的尿蛋白定量升高、血清ALB降低、CH升高、腎組織的CXCL16、CD36、 ADAM10、ADAM17的基因水平和蛋白含量升高,p38、ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ B p65的磷酸化水平升高(P0.01),腎康靈+西藥松組呈濃度依賴性降低CXCL16、CD36、 ADAM10、ADAM17的表達(dá),降低p38、ERK1/2、SAPK/JNK、NF-κ Bp65的磷酸化水平(P0.01)；腎康靈(高、低濃度)+西藥組的CH水平與西藥組相比顯著降低(P0.01或P0.05)。 (2)臨床研究表明,PNS患兒的尿蛋白定量升高、血清ALB降低、CH升高、CXCL16、 ADAM10、ADAM17的含量升高(P0.01),腎康靈+西藥治療組在降低尿蛋白定量、CH及血清CXCL16、ADAM10、ADAM17的含量方面明顯優(yōu)于西藥組(P0.01或P0.05)。 結(jié)論： (1)ox-LDL可促使系膜細(xì)胞釋放CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17等炎癥介質(zhì),CXCR6可介導(dǎo)這一途徑。ox-LDL激活了MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,使p38、ERK1/2、 SAPK/JNK的磷酸化水平升高,激活了NF-κ Bp65的活性,CXCR6-CXCL16介導(dǎo)MAPK信號途徑。 (2)益腎活血中藥腎康靈通過降低CXCL16、CD36、ADAM10、ADAM17等炎癥介質(zhì)的釋放及抑制MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活,從而抑制系膜細(xì)胞的增殖,降低尿蛋白、CH水平,有效地改善AN大鼠的病理損傷和PNS患兒的臨床癥狀。
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【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R272;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2083791