本文選題：熊去氧膽酸 + 膽汁淤積�。� 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：膽汁淤積是嬰兒期肝病最常見的臨床表現(xiàn),其病因多種多樣。肝細(xì)胞功能缺陷或膽管阻塞、膽汁流減少均可導(dǎo)致嬰兒膽汁淤積癥的發(fā)生。如治療不及時(shí),可導(dǎo)致膽汁淤積性肝纖維化甚至肝硬化,是嬰兒期致死或致殘的重要原因之一。已成為我國小兒肝病住院的首要原因。早期明確診斷,治療及時(shí)是遏制其進(jìn)展的關(guān)鍵。由于嬰兒生長發(fā)育的特殊性,尋找療效可靠、副作用小、適合小兒應(yīng)用的藥物是我們亟待解決的問題。目前發(fā)現(xiàn),熊去氧膽酸(Ursodeoxycholic Acid,UDCA)可以通過利膽、保護(hù)肝細(xì)胞、改善肝細(xì)胞的排泄功能來抑制肝纖維化的病理過程。本課題建立了α-萘異硫氰酸酯(α-Naphthylisothiocyanate,ANIT)誘導(dǎo)的幼鼠膽汁淤積癥模型,并以UCDA治療,旨從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面模擬UCDA治療嬰兒膽汁淤積癥,通過檢測新生大鼠肝功能各項(xiàng)生化指標(biāo)、血清肝纖四項(xiàng)、肝組織Ⅳ型膠原(CollagenⅣ,cIV)、層粘連蛋白(Laminin,LN)及病理形態(tài)學(xué)變化,以探討UDCA對(duì)膽汁淤積性癥幼鼠的治療作用。以期找到有效的早期干預(yù)嬰兒膽汁淤積癥的治療方法。第一部分:熊去氧膽酸對(duì)膽汁淤積癥幼鼠肝功能指標(biāo)的影響目的:擬通過制造幼鼠膽汁淤積癥模型以探討UDCA對(duì)膽汁淤積癥幼鼠肝功能指標(biāo)的作用及影響。方法:健康的3周齡Spragne-Dawlay(SD)大鼠,飼養(yǎng)于河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,清潔級(jí),體質(zhì)量50-70g,雌雄各半,(合格證編號(hào):1307128,1308020,1308039)。置于室溫25℃左右、喂養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼料,飲水自由[1]。隨機(jī)分為3組,分別為造模組(ANIT Model)18只、熊去氧膽酸治療組(UDCA Treatment)17只、空白對(duì)照組(Blank Control)8只。采用ANIT灌胃誘發(fā)幼鼠膽汁淤積癥模型。ANIT Model組于實(shí)驗(yàn)第4天給予1%ANIT 75mg/kg灌胃;UDCA Treatment組:于實(shí)驗(yàn)第2天開始每天給予UDCA溶液灌胃(100mg/kg),同時(shí)于實(shí)驗(yàn)第4天也給予ANIT灌胃;Blank Control組:空白對(duì)照,同步喂養(yǎng)。于ANIT灌胃48小時(shí)后斷頭采血,動(dòng)物灌胃前后12 h均禁食,不禁水。檢測經(jīng)UDCA治療后對(duì)大鼠肝功能各項(xiàng)生化指標(biāo)的影響。分別對(duì)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate Amino transferase,AST)、γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-Glutamyl Transpeptidase,γ-GT)、膽堿酯酶(Cholines terase,CHE)、膽汁酸(Total Bile Acids,TBA)采用生化檢驗(yàn)速率方法檢測,分別對(duì)總膽紅素(Total Bilirubin,TBIL)、直接膽紅素(Direct Bilirubin,DBIL)、間接膽紅素(Indirect Bilirubin,IBIL)采用生化檢驗(yàn)比色方法進(jìn)行檢測[1]。結(jié)果:肝功能各項(xiàng)指標(biāo)(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)于Blank Control組統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:47.1±15.8(U/L),386.4±138.8(U/L),3.0±0.9(umol/L),2.5±1.1(umol/L),0.5±0.3(umol/L),0.4±3.4(U/L),0.26±0.04(KU/L),194.3±130.9(umol/L);ANIT Model組肝功能各項(xiàng)指標(biāo)(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:782.6±251.2(U/L),2265±524.8(U/L),142.3±25.3(umol/L),129.1±23.0(umol/L),12.8±5.3(umol/L),15.7±6.1(U/L),0.25±0.05(KU/L),657.5±95.1(umol/L);UDCA Treatment組肝功能各項(xiàng)指標(biāo)(ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、γ-GT、CHE、TBA)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:618.1±195.7(U/L),1990.7±850.6(U/L),138.9±14.4(umol/L),127.1±11.1(umol/L),11.9±4.7(umol/L),11.1±3.3(U/L),0.25±0.04(KU/L),608.2±63.0(umol/L)。ANIT Model組與Blank Control組肝功能各項(xiàng)比較,P值分別為:P=0.0000.01,P=0.0020.01,P=0.0000.01,P=0.0000.01,P=0.0000.01,P=0.0000.01,P=0.0750.05,P=0.0010.01;UDCATreatment組與ANIT Model組肝功能各項(xiàng)比較,P值分別為:P=0.4400.05,P=0.0790.05,P=0.0910.05,P=0.0570.05,P=0.1010.05,P=0.0470.05,P=0.7240.05,P=0.0020.05。ANIT Model組除CHE外,各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果均明顯高于Blank Control組,有顯著性差異。γ-GT、TBA在UDCA Treatment組明顯較ANIT Model組降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。余數(shù)值均無顯著性差異。結(jié)論:1經(jīng)1%ANIT 75mg/kg灌胃48小時(shí)后,ANIT Model組肝功能各項(xiàng)指標(biāo)除CHE外,余ALT、AST、γ-GT、TBA、TBIL、DBIL、IBIL均明顯高于Blank Control組(P0.01),表明造模成功。2動(dòng)2動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示:γ-GT、TBA在UDCA Treatment組中數(shù)值,明顯較ANIT Model組降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);表明UDCA有可能通過降低血清γ-GT、TBA改善肝功能。3 UDCA Treatment組ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、CHE相比ANIT Model組,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;考慮與本實(shí)驗(yàn)樣本量較小,UDCA作用時(shí)間較短有關(guān),以后可通過加大樣本量,增加藥物作用時(shí)間等來進(jìn)一步證實(shí)其作用。第二部分:熊去氧膽酸對(duì)膽汁淤積癥幼鼠血清肝纖四項(xiàng)指標(biāo)的影響目的:擬通過制造幼鼠膽汁淤積癥模型以探討UDCA對(duì)膽汁淤積癥幼鼠血清肝纖四項(xiàng)指標(biāo)的作用及影響。方法:造模方法同第一部分。檢測經(jīng)UDCA治療后,大鼠血清透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid,HA)、Ⅲ型前膠原(Procollagen III,PCⅢ)、LN、cIV的變化。采用上海海研醫(yī)學(xué)生物公司生產(chǎn)的肝纖四項(xiàng)放射免疫測定試劑盒檢測HA、PCⅢ、LN、cIV肝纖四項(xiàng)指標(biāo)。結(jié)果:Blank Control組肝纖四項(xiàng)(HA、PCⅢ、LN、cIV)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:1489.75±215.30(ng/ml),40.37±1.55(ng/ml),39.65±5.40(ng/ml),24.92±4.08(ng/ml);ANIT Model組肝纖四項(xiàng)(HA、PCⅢ、LN、cIV)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:1772.68±316.90(ng/ml),41.20±11.04(ng/ml),48.47±8.75(ng/ml),30.79±7.43(ng/ml);UDCA Treatment組肝纖四項(xiàng)(HA、PCⅢ、LN、cIV)統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:1608.50±409.94(ng/ml),41.63±4.63(ng/ml),41.71±5.58(ng/ml),23.95±7.85(ng/ml)。ANIT Model組與Blank Control組肝纖四項(xiàng)比較:P值分別為:P=0.1060.05,P=0.1070.05,P=0.0020.05,P=0.0450.05;UDCA Treatment組與ANIT Model組肝纖四項(xiàng)比較,P值分別為:P=0.1190.05,P=0.1170.05,P=0.0020.01,P=0.0000.01;ANIT Model組血清中LN、cIV明顯高于Blank Control組(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而HA、PCⅢ與Blank Control組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;UDCA Treatment組LN、cIV明顯低于ANIT Model組(P0.01),有顯著性差異。而HA、PCⅢ與ANIT Model組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1 ANIT Model組血清中LN、cIV明顯高于Blank Control組,表明造模成功。2 UDCA可通過降低血清中LN、cIV而起到抗肝纖維化的作用。第三部分:熊去氧膽酸對(duì)膽汁淤積癥幼鼠肝組織病理學(xué)的影響目的:擬通過制造幼鼠膽汁淤積癥模型以探討UDCA對(duì)膽汁淤積癥幼鼠肝組織cⅣ及LN及病理學(xué)的作用及影響。方法:造模方法同第一部分。隨機(jī)分為3組,分別為造模組(ANIT Model)13只、熊去氧膽酸治療組(UDCA Treatment)13只、空白對(duì)照組(Blank Control)10只。采血后,3組大鼠分別打開腹腔,于肝臟切取組織1.0×0.3×0.8cm,在10%福爾馬林中進(jìn)行固定,之后脫水及包埋,切片后進(jìn)行cⅣ及LN免疫組化染色,觀察組織學(xué)變化,免疫組化結(jié)果應(yīng)用Image Pro Plus 6.0專業(yè)圖像分析軟件分析后,各指標(biāo)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1 Blank Control組LN、cIV統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:0.0405±0.0125,0.0167±0.0027;ANIT Model組LN、cIV統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:0.0576±0.0077,0.0215±0.00030;UDCA Treatment組LN、cIV統(tǒng)計(jì)結(jié)果分別為:0.0382±0.0081,0.0181±0.0028。ANIT Model組與Blank Control組LN、cIV比較,P值分別為:P=0.0020.01,P=0.0000.01;UDCA Treatment組與ANIT Model組LN、cIV比較,P值分別為:P=0.0010.01,P=0.0000.01;均有顯著性差異。ANIT Model組肝組織中LN、cIV明顯高于Blank Control組(P0.01);UDCA Treatment組肝組織中LN、cIV均明顯低于ANIT Model組(P0.01),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2肝組織病理學(xué)改變:常規(guī)HE染色制片后鏡檢觀察肝細(xì)胞變性、膠原纖維增生程度和組織形態(tài)學(xué)變化。Blank Control組肝細(xì)胞整齊排列,肝小葉清晰完整,條索樣放射到四周,未見炎性細(xì)胞浸潤,中央靜脈、匯管區(qū)未見結(jié)締組織異常增生;ANIT Model組,肝小葉結(jié)構(gòu)大多破壞或消失,出現(xiàn)了較明顯的肝纖維化,肝組織1/4-3/4均出現(xiàn)脂肪壞死,甚至氣球樣變,僅少量正常肝細(xì)胞存留,可見淤膽,壞死區(qū)域可見結(jié)締組織增生明顯,形成纖維間隔,將原有的肝小葉分割,形成假小葉。伴隨大量嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤[1]。3 cIV、LN行免疫組化染色:Blank Control組的肝組織中,可見微量的cIV、LN在肝竇壁及血管壁沉積,呈連續(xù)性線狀陽性反應(yīng);在ANIT Model組以及UDCA Treatment組中,LN的棕黃色顆粒較cⅣ而言粗大且色深。棕黃色顆粒沉積區(qū)域以肝竇、門脈區(qū)和肝細(xì)胞壞死區(qū)最為明顯,其間可見細(xì)胞碎屑樣壞死。ANIT Model組較強(qiáng)陽性反應(yīng),出現(xiàn)較粗線性纖維,并形成網(wǎng)隔伸入小葉,分隔肝細(xì)胞。在炎癥壞死區(qū)域,陽性反應(yīng)部分相互交織成網(wǎng)狀,其內(nèi)浸入有數(shù)量不等的炎性細(xì)胞。無論是cⅣ還是LN,UDCA Treatment組相較ANIT Model組而言棕黃色顆粒沉積的陽性區(qū)域面積均縮小明顯,可見其內(nèi)碎屑樣壞死,較弱線狀陽性反應(yīng)網(wǎng)狀交織于肝實(shí)質(zhì)及匯管區(qū)。結(jié)論:1 ANIT Model組肝組織中LN、cIV明顯高于Blank Control組;ANIT Model組幼鼠肝組織正常的肝小葉結(jié)構(gòu)已被破壞或消失,匯管區(qū)膽管結(jié)構(gòu)破壞并伴隨大量嗜中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤,表明造模成功。2 UDCA通過降低肝組織中LN、cIV而起到抗肝纖維化、防止肝硬化形成的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R725.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2073801