本文選題：miR-19a + miR-19b��； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2012年碩士論文

【摘要】：第一部分miR-19a、miR-19b在兒童急性淋巴細胞白血病中的表達及臨床意義 目的研究miR-19a、miR-19b在兒童急性淋巴細胞白血�。ˋLL,簡稱急淋）中的表達及其與急淋臨床特征的關系。 方法采用實時定量PCR的方法檢測67例兒童急淋（初診38例、完全緩解20例、難治復發(fā)9例）骨髓單個核細胞中miR-19a、miR-19b的表達，分析其表達量與臨床特征的關系。動態(tài)觀察同時收到初診和完全緩解標本的6例急淋患兒初診及完全緩解后骨髓中miR-19a、miR-19b的表達變化。15例原發(fā)性免疫性血小板減少癥（ITP）患兒作為對照。 結果 1. miR-19a在急淋初診組、完全緩解組、難治復發(fā)組和對照組的表達量分別為2.69±0.39，0.69±0.12，5.17±1.79和0.36±0.08。miR-19a在急淋各組中的表達量顯著高于對照組（P0.05）。急淋各組中，初診及復發(fā)難治組的表達量顯著高于完全緩解組（P0.05）。 miR-19b在初診組、完全緩解組、難治復發(fā)組和對照組的表達量分別為3.29±0.51，0.81±0.14，6.24±0.79和0.49±0.07。初診組和難治復發(fā)組的表達量顯著高于完全緩解組和對照組（P0.01），而完全緩解組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 2.動態(tài)觀察同時收到初診和完全緩解標本的6例急淋患兒初診及完全緩解后骨髓中miR-19a、miR-19b的表達變化。初診時miR-19a、miR-19b表達量分別為1.66±0.24、2.24±0.21，完全緩解后表達量分別為0.65±0.02、0.77±0.06，完全緩解后miR-19a、miR-19b表達量較初診時顯著降低（P0.05）。 3. miR-19a、miR-19b高表達與外周血高白細胞計數(shù)（≥50×109/L）、危險度分型（中高危）、脾腫大有相關性（P0.05）；與發(fā)病年齡、性別、免疫分型、形態(tài)學分型、肝及淋巴結腫大、早期潑尼松反應等因素無相關性（P0.05）。 4. miR-19a表達量與BCR-ABL、MLL-AF4融合基因陽性無相關性（P0.05）；miR-19b與BCR-ABL融合基因陽性有相關性（P0.05），與MLL-AF4融合基因陽性無相關性。 5. miR-19a與miR-19b在兒童急淋各組及對照組中的表達趨勢相近，二者表達量具有正相關性（r=0.582，，P0.05）。 結論 1. miR-19a、miR-19b在兒童急淋初診和難治復發(fā)組中存在高表達，完全緩解后表達量顯著降低，miR-19a、miR-19b高表達可能促進了兒童急淋的發(fā)生發(fā)展。 2. miR-19a、miR-19b高表達與外周血高白細胞計數(shù)（≥50×109/L）、危險度分型（中高危）、脾腫大有相關性；與發(fā)病年齡、性別、免疫分型、形態(tài)學分型、MLL-AF4融合基因陽性、肝及淋巴結腫大、早期潑尼松反應等因素無相關性，miR-19b高表達與BCR-ABL陽性有相關性。 miR-19a及miR-19b可能成為判斷急淋預后危險因素的又一參考指標。 3. miR-19a與miR-19b在兒童急淋各組及對照組中的表達趨勢相近，二者表達量具有正相關性，二者可能功能相近并協(xié)同作用參與兒 童急淋發(fā)生發(fā)展。 第二部分miR-19b對Jurkat細胞增殖及PTEN表達的影響研究 目的抑制miR-19b在Jurkat細胞中的表達，探討miR-19b對Jurkat細胞增殖及對PTEN表達的影響。 方法1.采用實時熒光定量PCR的方法檢測Jurkat、HL-60、K562、HEK293細胞株中miR-19a及miR-19b的表達，篩選高表達miR-19a及miR-19b的細胞株。2.采用經(jīng)過特殊化學修飾的miR-19b特異性拮抗劑antagomir轉染Jurkat細胞。實驗分為三組：實驗組（miR-19b特異性antagomir轉染組）、陰性對照轉染組（antagomir陰性對照轉染組）、空白對照組（未加轉染試劑的Jurkat組）。3.采用實時定量PCR的方法檢測各組miR-19b及PTEN mRNA的表達量。4.采用MTT法檢測Jurkat細胞的增殖。 結果 1. miR-19a在Jurkat、K562、HL-60、HEK293細胞中的表達量分別為15.2±0.37，3.32±0.22，1.27±0.20和1.53±0.26；miR-19b在四組細胞中的表達量分別為6.91±0.08，3.41±0.42，1.31±0.13和0.96±0.13；PTEN在四組細胞中的表達量分別為0.39±0.01，0.67±0.007，3.62±0.41和0.94±0.20。miR-19a、miR-19b在Jurkat細胞中的表達量顯著高于HL-60、K562和HEK293細胞（P0.05），PTEN在Jurkat細胞中的表達量顯著低于HL-60、K562、HEK293細胞（P0.05）。 2.miR-19b特異性拮抗劑antagomir轉染Jurkat細胞，miR-19b在實驗組、陰性對照轉染組、空白對照組的表達量依次為1.87±0.09，6.67±0.31和6.88±0.25。實驗組較陰性對照轉染組和空白對照組顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），而陰性對照轉染組和空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 3. PTEN mRNA在實驗組、陰性對照轉染組、空白對照組的表達量依次為2.72±0.26，0.39±0.02和0.39±0.01。實驗組較陰性對照轉染組和空白對照組顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01），而陰性對照轉染組和空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 4. miR-19b特異性拮抗劑antagomir轉染后Jurkat細胞的增殖能力顯著降低（P0.01）。 結論 1．不同的細胞株miR-19a、miR-19b的表達存在差異，miR-19a、miR-19b在Jurkat細胞中的表達量顯著大于K562、HEK293HL-60中的表達量。PTEN在Jurkat細胞中的表達量顯著低于其它三種細胞。 2．經(jīng)過特殊化學修飾的miR-19b特異性拮抗劑antagomir可以成功轉染Jurkat細胞株，并顯著下調(diào)miR-19b的表達。 3．隨著miR-19b表達的下降，Jurkat細胞中PTEN mRNA的表達量顯著上調(diào)，證明miR-19b的表達同PTEN mRNA的表達密切相關。 4．隨著miR-19b表達的下降Jurkat細胞的生長受到明顯的抑制，miR-19b可能通過促進細胞惡性增殖導致白血病發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:Expression and clinical significance of miR - 19a and miR - 19b in children with acute lymphoblastic leukemia

Objective To study the expression of miR - 19a and miR - 19b in acute lymphoblastic leukemia ( ALL ) and its relationship with clinical features of acute lymphoblastic leukemia ( ALL ) .

Methods The expression of miR - 19a and miR - 19b in bone marrow mononuclear cells was detected by real - time quantitative PCR . The expression of miR - 19a and miR - 19b in bone marrow mononuclear cells was analyzed .

Results

1 . The expression of miR - 19a was 2.69 鹵 0.39 , 0.69 鹵 0.12 , 5.17 鹵 1.79 and 0.36 鹵 0.08 . The expression of miR - 19a was significantly higher than that in control group ( P0.05 ) .

2 . The expression of miR - 19a and miR - 19b in the bone marrow was observed at the same time and the expression of miR - 19a and miR - 19b in the bone marrow was detected at the same time . The expression levels of miR - 19a and miR - 19b in the first diagnosis were 0.66 鹵 0.24 and 2.24 鹵 0.21 , respectively . The expression of miR - 19a and miR - 19b was significantly lower after complete remission ( P0.05 ) .

3 . The high expression of miR - 19a and miR - 19b was associated with high white blood cell count ( 鈮

本文編號：1957420