本文選題：維甲酸 + 神經(jīng)管畸形　； 參考：《中南大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的： 通過孕期一次性投入大劑量維生素A類物——全反式維甲酸,建立SD大鼠胎鼠的神經(jīng)管畸形模型,觀察E20天實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組胎鼠發(fā)生先天畸形的種類,幾率,記錄其身長(zhǎng)、體重進(jìn)行比較,并進(jìn)行病理組織切片,比較觀察其組織結(jié)構(gòu)的改變和缺損,說明全反式維甲酸對(duì)胚胎發(fā)育的限制性和毒性作用以及其致畸性；取實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組E12, E13, E14, E15, E16天胚胎的神經(jīng)管,檢測(cè)RARamRNA及Hoxd4mRNA的表達(dá),了解神經(jīng)管畸形形成過程中RARa及Hoxd4的異常表達(dá),探討神經(jīng)管畸形發(fā)生的可能機(jī)制,為神經(jīng)管畸形的預(yù)防提供一定的理論依據(jù)。 方法： 1.胎鼠神經(jīng)管畸形模型的建立：正常懷孕的SD大鼠隨機(jī)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組于大鼠孕10天時(shí),一次性給予濃度為20mg/ml,劑量為120mg/kg的atRA,所用溶劑為食用橄欖油；對(duì)照組于大鼠孕10天時(shí)給予同樣體積的橄欖油。于孕20天剖宮取胎,觀察胚胎的先天畸形情況,記錄其身長(zhǎng)、體重及數(shù)量。 2.病理切片：取實(shí)驗(yàn)組有明顯脊柱裂的胎鼠的腰骶部及其以下組織及對(duì)照組正常胎鼠的腰骶部及其以下組織,常規(guī)石蠟包埋、HE染色。觀察其病理形態(tài)的變化。 3. RARα及Hoxd4mRNA的檢測(cè)：取實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組12,13,14,15,16天胚胎的神經(jīng)管組織,利用RT-PCR測(cè)定RARamRNA及Hoxd4mRNA的表達(dá),了解其在胚胎發(fā)育過程中的表達(dá)。 結(jié)果： 1.神經(jīng)管畸形動(dòng)物模型及其伴發(fā)畸形：E20天實(shí)驗(yàn)組10只孕鼠胎鼠接受統(tǒng)計(jì),胚胎總數(shù)109只,其中死胎5只(4.59%),吸收胎6只(5.50%),神經(jīng)管畸形胎鼠65只(66.33%),類型均為脊柱裂,未發(fā)現(xiàn)腦膨出、無腦兒等其他類型的神經(jīng)管畸形,有神經(jīng)管畸形的胎鼠均伴有無尾無肛門畸形。對(duì)照組10只孕鼠,共獲得胎鼠125只,無死胎及吸收胎,胎鼠外觀均未出現(xiàn)上訴畸形。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在妊娠第20天時(shí)身長(zhǎng)及體重各數(shù)據(jù)經(jīng)t檢驗(yàn)分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。實(shí)驗(yàn)組均較對(duì)照組發(fā)育差,身長(zhǎng)、體重均低于對(duì)照組。切片形態(tài)學(xué)觀察：對(duì)照組骶、尾椎發(fā)育良好,脊髓形態(tài)正常,灰白質(zhì)分布清楚,灰質(zhì)呈蝶形分布,被覆皮膚連續(xù)；實(shí)驗(yàn)組胚胎中則可見腰骶部脊柱裂,脊髓脊膜膨出、脊髓形態(tài)改變,灰白質(zhì)分布紊亂,灰質(zhì)蝶形區(qū)消失,多見炎癥細(xì)胞侵潤(rùn),被覆皮膚不連續(xù)。 2.維甲酸誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)管畸形胚胎中RARamNR及Hoxd4mNRA表達(dá)的研究：對(duì)照組RARamRNA在E12天開始測(cè)得表達(dá),到E14天時(shí)處于表達(dá)高峰,E15天開始下降,E16天時(shí)降至E13天水平；實(shí)驗(yàn)組中RARamRNA在E12天時(shí)就處于表達(dá)高峰,之后表達(dá)量逐漸下降,E12,E13,E14天表達(dá)量均高于對(duì)照組同一時(shí)段表達(dá)量(P=0.0000.05),E15天表達(dá)量稍低于對(duì)照組同一時(shí)段表達(dá)水平(P=0.0010.05),至E16天時(shí)表達(dá)量降至對(duì)照組E16天水平(P=0.3110.05)。對(duì)照組Hoxd4mRNA在E12天開始測(cè)得表達(dá),之后表達(dá)量逐漸增高,到E15天時(shí)處于表達(dá)高峰,之后表達(dá)下降,E16天時(shí)降至E13天水平；實(shí)驗(yàn)組Hoxd4mRNA在E12天就處于表達(dá)高峰,E12,E13,E14天表達(dá)量均高于對(duì)照組同一時(shí)段的表達(dá)量(P=0.0000.05),到E15、E16天時(shí),表達(dá)量稍低于對(duì)照組同一時(shí)段水平(P=0.0000.05)。 結(jié)論： 1.孕期特定時(shí)間一次性投入大劑量的全反式維甲酸可限制胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育,并造成神經(jīng)管畸形在內(nèi)的多種畸形。 2. RARa及Hoxd4基因的異常高表達(dá)可能是導(dǎo)致SD大鼠胎鼠神經(jīng)管畸形發(fā)生的原因之一。
[Abstract]:Objective:
A model of neural tube malformation in SD rats was established through a one-time infusion of a large dose of vitamin A, all trans retinoic acid. The types of congenital malformation of fetal rats in E20 days and control groups were observed, the chances were recorded, the body weight was recorded and the body weight was compared, and the changes of the tissue structure were observed and compared. The limitation and toxicity of all trans retinoic acid on embryonic development and its teratogenicity; the neural tube of E12, E13, E14, E15, E16 days embryos of experimental and control groups was taken to detect the expression of RARamRNA and Hoxd4mRNA, to understand the abnormal expression of RARa and Hoxd4 during the formation of neural tube malformation, and to explore the possibility of the occurrence of neural tube malformation. The mechanism provides a theoretical basis for the prevention of neural tube defects.
Method錛，

本文編號(hào)：1932856