本文選題：IgA腎病 + 濾泡輔助性T細(xì)胞　； 參考：《華中科技大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：第一部分 IgAN患兒外周血Tfh檢測及mlgA, IL-21,TGF β1的表達(dá) 目的探討濾泡T輔細(xì)胞(Tfh)及其細(xì)胞因子IL-21,TGF β1和mIgA,在IgAN患兒(含原發(fā)和繼發(fā)性IgA腎病即紫癜性腎炎,IgAN)外周血中的表達(dá)情況。方法IgA腎病患兒根據(jù)用藥情況分為初治未用藥組、免疫抑制治療組,20例初治未用藥IgAN患兒,34例免疫抑制劑治療IgAN患兒納入研究,22例正常兒童作對照。用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中Tfh(CXCR5+CD4+)在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比例,淋巴細(xì)胞膜表面mIgA在CD19+細(xì)胞中的表達(dá)水平,采用RT-PCR檢測淋巴細(xì)胞IgA基因CHα1和CHα2表達(dá)水平,elisa檢測血清Tfh細(xì)胞分泌因子IL-21和TGF β1的表達(dá)。結(jié)果(1)未用藥組患兒外周血Tfh為(19.87%±1.00%),免疫抑制治療組為(13.87%±0.83%),正常對照組為(10.28%±0.68%)。統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)表明,三者間均數(shù)差異均有顯著意義(P0.001)。(2)IgA腎病患兒CD19陽性淋巴細(xì)胞中mIgA表達(dá)(13.21±0.85)顯著高于正常對照組(8.75±0.32), P0.0001。 IgA腎病患兒外周血淋巴細(xì)胞IgA基因CHα1和CHα2表達(dá)高于對照患兒.(3)IgA腎病患兒血清細(xì)胞因子IL-21為102.2±9.5(pg/ml),明顯高于正常兒童74.38±2.6(pg/ml), P＜0.05. TGFβ1為80392±2274(pg/ml),顯著高于正常兒童29384±1828(pg/ml), P＜0.05。結(jié)論初步發(fā)現(xiàn)在IgAN患兒外周血中Tfh和細(xì)胞分泌因子以及mIgA的表達(dá)顯著增多,提示Tfh可能在該疾病IgA產(chǎn)生中起作用,免疫抑制治療可以明顯降低Tfh在CD4+T淋巴細(xì)胞中的比例。 第二部分 IgAN患兒Tfh促進(jìn)B細(xì)胞IgA抗體類別轉(zhuǎn)換 目的體外探討IgAN患兒Tfh誘導(dǎo)B細(xì)胞IgA抗體類別轉(zhuǎn)換的作用。方法磁珠分選初治未用藥IgAN患兒及正常兒童外周血中的Tfh和初始B細(xì)胞(Naive B cells, NB)共培養(yǎng),通過real-time RT-PCR檢測共培養(yǎng)體系基因TGF-β1、IL-21、Bcl-6、Blimp-1、 AID、IαlCαl、Iα2Cα2和Ir3Cr3以及普通RT-PCR檢測IgM(CHμ), IgA(CHal,CHa2)和IgG(CHr)基因動(dòng)態(tài)表達(dá)情況。ELISA檢測共培養(yǎng)上清液IL-21, TGF-β1和IgA在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量,流式細(xì)胞術(shù)檢測共培養(yǎng)淋巴細(xì)胞mIgA, mIgM在CD19+淋巴細(xì)胞中的表達(dá)變化。激光共聚焦顯微鏡觀察共培養(yǎng)細(xì)胞及單純NB分別添加Tfh細(xì)胞因子TGF-β1、IL-21、IL-4后mIgA的表達(dá)。結(jié)果IgAN患兒組TGF-β1, IL-21, Bcl-6, Blimp-1, AID, Ia2Ca2, IalCal基因表達(dá)均在第6小時(shí)最強(qiáng),并隨時(shí)間減弱；抗體類別轉(zhuǎn)換產(chǎn)物CHμ、CHa1、CHa2、 CHγ在第6小時(shí)表達(dá)最強(qiáng),并隨時(shí)間表達(dá)逐漸減少,對照組基因無時(shí)序表達(dá)差異。患者組和對照組共培養(yǎng)的細(xì)胞mIgA、IL-21, TGF-β1及IgA表達(dá)隨時(shí)間而增多,在第9天以后與對照組相比分別為8.16±0.07vs.5.1±0.77(%),15.17±1.6vs.5.5±1.3(pg/ml),1059±64.86vs.528±36.05(pg/ml),4.2±1.1vs.1.8±0.9(pg/ml)(P均0.05)。共聚焦結(jié)果顯示Tfh細(xì)胞因子TGF-β1、IL-21、IL-4促進(jìn)NB細(xì)胞IgA表達(dá)；Tfh與NB共培養(yǎng)顯著促使IgA表達(dá)。結(jié)論體外實(shí)驗(yàn)顯示IgAN患兒Tfh細(xì)胞有促進(jìn)NB細(xì)胞發(fā)生IgA抗體類別轉(zhuǎn)換,促其向分化為IgA分泌細(xì)胞分化的作用,Tfh細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-21, TGF-β1, IL-4等可能參與這一誘生過程,因此,Tfh在IgAN發(fā)病中起重要作用。 第三部分 IgAN患兒Tfh及其細(xì)胞因子誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌半乳糖缺乏的IgA1 目的觀察IgA腎病患兒體內(nèi)外半乳糖缺乏的IgAl的表達(dá)情況,探討Tfh細(xì)胞及其細(xì)胞因子致IgA缺陷的可能機(jī)制。方法收集IgAN患兒和正常兒童外周血,磁珠分選IgA腎病患兒外周血NB和Tfh細(xì)胞,elisa測定NB和Tfh共培養(yǎng)組,單獨(dú)NB細(xì)胞加IL-21或TGF-β1或IL-4等Tfh細(xì)胞因子培養(yǎng)組12天培養(yǎng)上清液及IgAN腎病患兒和正常兒童外周血血清IgA和半乳糖缺乏的IgAl(galactose-deficient IgAl, Gd-IgAl)水平。結(jié)果IgAN患兒外周血血清Gd-IgAl水平為2573±540.2(U/ml),顯著高于正常兒童1021±132.5(U/ml), P=0.03。IgAN患兒血清IgA為2881±611(ug/ml),稍高于正常兒童2337±428(ug/m1),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.47)。IgAN患兒NB和Tfh共培養(yǎng)細(xì)胞上清液IgA水平4.82±0.39(ug/ml),顯著高于NB與IL-21培養(yǎng)組2.28±0.26(ug/ml),NB與TGF-β1培養(yǎng)組2.4±0.27(ug/ml), NB與工L-4培養(yǎng)組2.02±0.32(ug/ml),P值均0.001。IgA腎病患兒NB和Tfh共培養(yǎng)組Gd-IgAl與IgA比值為4.04±0.32(U/ug),顯著低于NB與IL-21培養(yǎng)組7.73±1.31(U/ug),NB與TGF-B1培養(yǎng)組7.56±1.13(U/ug), NB與IL-4培養(yǎng)組8.64±1.23(U/ug),P值均0.05.結(jié)論IgA腎病患兒存在明顯的IgAl分子半乳糖缺陷,Tfh細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在誘生B細(xì)胞產(chǎn)生半乳糖缺陷IgAl過程中起關(guān)健的調(diào)節(jié)作用,可能參與IgAN發(fā)病。
[Abstract]:the first portion

The expression of serum IgG , IL - 21 and TGF - 尾1 in peripheral blood of children with IgAN

Objective To investigate the expression of T - cells and their cytokines , IL - 21 , TGF - 尾1 and mIgA in peripheral blood of children with IgAN ( primary and secondary IgA nephropathy , i.e . purpura nephritis and IgAN ) . The levels of serum cytokine IL - 21 in children with IgA nephropathy were 102 . 2 鹵 9.5 ( pg / ml ) and 74.38 鹵 2.6 ( pg / ml ) respectively ( P < 0 . 05 ) . TGF 尾 1 was 80392 鹵 2274 ( pg / ml ) , which was significantly higher than that of normal children 29384 鹵 1828 ( pg / ml ) , P < 0.05 . It was found that the expression of TSF and cell secretion factor and mIgA in peripheral blood of children with IgAN may play a role in the production of IgA production in children with IgAN .

the second part

IgAN children ' s T cell IgA antibody class - specific conversion in children with IgAN

Objective To investigate the effects of serum IL - 21 , IL - 21 , Bcl - 6 , Blimp - 1 , AID , I偽lC 偽l , I偽2C 偽2 and Ir3Cr 3 and normal RT - PCR on the expression of IgM ( CH 渭 ) , IgA ( CH2 ) , and IgG ( CHr ) gene in children with IgAN in vitro . The expressions of TGF - 尾1 , IL - 21 , I偽2C 偽2 , and IgG ( CHr ) were detected by real - time RT - PCR .
The results showed that the expressions of mIgA , IL - 21 , TGF - 尾1 and IgA in the control group were 8.16 鹵 0.07 vs . 5.1 鹵 0.77 ( pg / ml ) , 15.17 鹵 64.86 vs . 528 鹵 36.05 ( pg / ml ) , 4.2 鹵 1.1 vs . 1.8 鹵 0.9 ( pg / ml ) , respectively ( P < 0.05 ) .
Conclusion In vitro experiments show that the cells of IgAN can promote the differentiation of IgA antibody in NB cells , promote the differentiation into IgA secretion cell differentiation , the cytokines IL - 21 , TGF - 尾1 , IL - 4 , etc . , which secrete cytokines , play an important role in the pathogenesis of IgAN .

PART III

IgAN ( IgAN ) and its cytokines induce the secretion of galactose - deficient IgA1 in B cells

Objective To investigate the expression of IgA1 in peripheral blood of children with IgA nephropathy , and to investigate the possible mechanism of IgA deficiency in peripheral blood of children with IgAN and normal children .

【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R726.9

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本文編號：1839947