本文選題：2型糖尿病 + 炎癥��； 參考：《武漢大學》2015年博士論文

【摘要】：目的：探討孤兒核受體NR2E1在新診斷2型糖尿病患者的外周血單個核細胞中的表達。研究NR2E1對胰島β細胞增殖凋亡的影響及高糖條件下NR2E1對胰島p細胞損傷的調控機制。方法：研究對象分為糖尿病組(54名新診斷2型糖尿病患者)和對照組(88名健康志愿者)。測定研究對象身高、體重,抽取空腹靜脈血測定血漿游離脂肪酸(FFAs)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)、空腹血漿胰島素(FIN)、空腹血糖(FBG)等臨床指標,采用穩(wěn)態(tài)模型評估胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR),分離外周血單個核細胞(PBMCs)實時熒光定量RT-PCR檢測NR2E1mRNA 水平,V Western blotting檢測NR2E1蛋白水平,ELISA檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)表達水平；健康志愿者外周血PBMCs分別給與0、16.7mmol/L葡萄糖、250μmol/L棕櫚酸刺激后培養(yǎng)24h, Western blot檢測NR2E1蛋白水平,ELISA檢測上清中TNF-α、IL-6表達水平。分析糖尿病患者NR2E1表達水平和其他變量的相關性。建立慢病毒包裝的過表達NR2E1載體,轉染小鼠胰島系MIN6細胞,利用MTT法、RT-PCR、Western-blot、流式細胞儀等檢測NR2E1對胰島β細胞增殖活力、細胞周期、細胞凋亡等的調控機制。在高糖(25mmol/L葡萄糖)條件下,通過慢病毒包裝的過表達載體和RNAi (RNA interference)方法來調節(jié)NR2E1的表達,并利用MTT、Western-blot、流式細胞儀、實時定量PCR等方法來檢測改變NR2E1表達水平對細胞增殖活力、細胞周期、凋亡、胰島素分泌相關基因的影響。結果：54例糖尿病組與88例對照組間年齡、性別、身高、體重、TC、LDL-c、ALT無統(tǒng)計學差異(均P0.05),糖尿病組HDL-c較對照組明顯降低(P0.01),FIN、FBG、TG、HOMA-IR、FFAs、TNF-α、IL-6表達較對照組明顯升高(均P0.01)；糖尿病組NR2E1表達較對照組明顯增加(P0.01),且糖尿病組NR2E1mRNA與FIN、FBG以及TNF-α、IL-6呈明顯正相關(P0.01)。體外培養(yǎng)PBMCs經(jīng)16.7mmol/L葡萄糖、250μmol/L棕櫚酸刺激后NR2E1、TNF-α、IL-6表達較空白對照組明顯升高(P0.01)。通過在MIN6細胞中過表達NR2E1,發(fā)現(xiàn)NR2E1能夠通過增加細胞周期S期的比例及增加PCNA(Proliferating cell nuclear antigen)基因表達來提高MIN6細胞增殖活力,同時過表達NR2E1可以增加凋亡相關Bcl-2蛋白的表達以及減少ERK的磷酸化水平,但是過表達NR2E1的MIN6細胞的凋亡率無明顯改變,與胰島素分泌相關基因PDX-1表達無明顯改變。在高糖條件下,過表達NR2E1能夠減少高糖誘導的胰島p細胞凋亡率,提高胰島p細胞的增殖活力,同時減少細胞增殖凋亡相關的信號通路JNK(c-Jun N-terminal kinases)以及ERK磷酸化水平,增加Bcl-2表達,抑制Bax表達；過表達NR2E1能夠增加胰島素分泌相關基因PDX-1表達。相反當利用RNAi下調NR2E1表達時可增加高糖對胰島p細胞MIN6損傷。結論：在新診斷2型糖尿病中,NR2E1的升高可能與糖脂毒性及2型糖尿病患者體內炎癥狀態(tài)有關。NR2E1參與了胰島β細胞增殖凋亡。NR2E1參與了胰島p細胞糖毒性損傷的調控,過表達NR2E1能夠改善胰島p細胞糖毒性損傷。
[Abstract]:Objective: To investigate the expression of orphan nuclear receptor NR2E1 in peripheral blood mononuclear cells of newly diagnosed type 2 diabetic patients. The effect of NR2E1 on the proliferation and apoptosis of islet beta cells and the regulation mechanism of NR2E1 on islet P cell damage under high glucose conditions. Methods: the subjects were divided into diabetes group (54 newly diagnosed type 2 diabetes patients) and control. Group (88 healthy volunteers). Determine the height and body weight of the subjects, determine the plasma free fatty acid (FFAs), triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high density lipoprotein (HDL-c), low density lipoprotein (LDL-c), fasting plasma islet (FIN) and fasting blood glucose (FBG), and evaluate insulin resistance by steady state model. Index (HOMA-IR), separate peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) real-time fluorescence quantitative RT-PCR detection NR2E1mRNA level, V Western blotting detection NR2E1 protein level, ELISA detection of tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha), interleukins 6 (IL-6) expression level; healthy volunteers peripheral blood PBMCs, respectively, glucose, 250 Mu palmitate acid thorn After stimulated 24h, Western blot detection of NR2E1 protein level, ELISA detection of TNF- alpha and IL-6 expression level in the supernatant, the correlation between the level of NR2E1 expression and other variables in diabetic patients was analyzed. The overexpressed NR2E1 carrier in the lentivirus package was established, and the mouse islet MIN6 cells were transfected, and the MTT method, RT-PCR, flow cytometry and so on were detected. The regulatory mechanism of 2E1 on the proliferation activity, cell cycle and apoptosis of islet beta cells. Under the condition of high glucose (25mmol/L glucose), the expression of NR2E1 was regulated by the overexpressed vector packed with lentivirus and RNAi (RNA interference) method, and the MTT, Western-blot, flow cytometry and real-time quantitative PCR were used to detect the change of the NR2E1 table. Results: there was no significant difference in age, sex, height, weight, TC, LDL-c, ALT (all P0.05) between 54 diabetic and 88 control groups, and HDL-c in diabetic group was significantly lower than that of the control group (P0.01), FIN, FBG, TG, HOMA-IR, FFAs, TNF- a The NR2E1 expression in the diabetic group was significantly higher than that in the control group (P0.01), and the NR2E1mRNA in the diabetic group was significantly positively correlated with FIN, FBG and TNF- alpha (P0.01). In vitro culture, PBMCs was stimulated by 16.7mmol/L glucose and 250 micron mol/L palmitic acid was stimulated, and the expression was significantly higher than that in the blank control group. Over expression of NR2E1 in MIN6 cells, it is found that NR2E1 can increase the proliferation activity of MIN6 cells by increasing the proportion of cell cycle S and increasing the expression of PCNA (Proliferating cell nuclear antigen) gene, while overexpression NR2E1 can increase the expression of apoptotic related Bcl-2 proteins and reduce the phosphorylation level of the MIN6, but overexpressed There was no obvious change in the apoptosis rate of MIN6 cells and the expression of PDX-1 expression related to insulin secretion. Under high glucose conditions, overexpression of NR2E1 could reduce the apoptosis rate of high glucose induced islet P cells, increase the proliferation activity of islet P cells, and reduce the signal pathway JNK (c-Jun N-terminal kinases) of cell proliferation and apoptosis phase (c-Jun N-terminal kinases). ERK phosphorylation level, increase the expression of Bcl-2, inhibit Bax expression, overexpression of NR2E1 can increase the expression of insulin secreting related gene PDX-1. Conversely, RNAi can increase the MIN6 damage to islet P cells when RNAi downregulation NR2E1 expression. Conclusion: in the newly diagnosed type 2 diabetes, the increase of NR2E1 may be associated with the toxicity of glycolipid and the body of type 2 diabetic patients. .NR2E1 participates in the proliferation and apoptosis of islet beta cells involved in the regulation of pancreatic islet P cell glucose toxicity, and the overexpression of NR2E1 can improve the glucose toxicity of pancreatic islet P cells.

【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1

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