發(fā)布時(shí)間：2018-04-28 00:02

  本文選題：手足口病 + 沙窩鎮(zhèn)��； 參考：《暨南大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：1.2012年沙窩鎮(zhèn)手足口病疫情中腸道病毒71型的檢測(cè)與分型腸道病毒71型(EV71)感染人后通常會(huì)伴隨手足口病的發(fā)生。在中國(guó),每年有成千上萬(wàn)的兒童感染腸道病毒71型,該病毒嚴(yán)重影響公眾的健康。研究腸道病毒71型的病毒學(xué)特性對(duì)預(yù)防與控制手足口病的爆發(fā)是十分關(guān)鍵的。本實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道了2012年9月至10月期間湖北沙窩鎮(zhèn)感染手足口病的105個(gè)患兒的情況。實(shí)驗(yàn)通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù),熒光定量PCR技術(shù),分離及培養(yǎng)病毒技術(shù)來(lái)檢測(cè)病毒。對(duì)腸道病毒71型的VP1基因進(jìn)行測(cè)序分析,同時(shí)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)對(duì)腸道病毒71型進(jìn)行基因分型。病例表明,多于90%的患兒小于9周歲,3-6周歲大的患兒比例占50%左右�；純浩毡楦腥灸c道病毒71型,表明在沙窩鎮(zhèn)爆發(fā)的手中口病大多數(shù)是腸道病毒71型的感染并引起相關(guān)的并發(fā)癥。這些手足口病的病例中,有66位確診是腸道病毒感染引起的,48位患兒被腸道病毒71型感染,另外,柯薩奇病毒A16型感染患兒數(shù)目達(dá)到16位。測(cè)序與進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果表明,沙窩鎮(zhèn)出現(xiàn)的腸道病毒71型病毒株屬于C4基因亞型。值得注意的是,沙窩與南昌的地理距離較遠(yuǎn),而與武漢的地理距離較近,但是,系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示沙窩出現(xiàn)的腸道病毒71型病毒株,與曾經(jīng)爆發(fā)過(guò)手足口病的南昌的腸道病毒71型病毒株的遺傳距離較為接近,但與同樣曾經(jīng)爆發(fā)過(guò)手足口病的武漢的腸道病毒71型病毒株的遺傳距離較遠(yuǎn)。沙窩鎮(zhèn)感染手足口病的患兒中,女患兒感染腸道病毒71型的比例較高。然而,曾經(jīng)出現(xiàn)腸道病毒感染的武漢和南昌,男患兒感染腸道病毒71型的比例較高。通過(guò)該實(shí)驗(yàn)研究,加深了對(duì)腸道病毒的認(rèn)識(shí),特別是在中國(guó)引起流行性手足口病的腸道病毒。本實(shí)驗(yàn)對(duì)預(yù)防與控制腸道病毒的的爆發(fā)有很大的研究意義。2.人類(lèi)巨細(xì)胞病毒包膜蛋白UL115原核表達(dá)與分離純化人巨細(xì)胞病毒(HCMV),是感染人類(lèi)的一種皰疹病毒。對(duì)于免疫系統(tǒng)發(fā)育不全和免疫抑制患者可引起相關(guān)病癥,甚至致死。HCMV擁有20個(gè)以上的包膜蛋白,它們位于病毒的最外層,與病毒趨向性,吸附,融合,子代病毒包裝,成熟,傳播過(guò)程密切相關(guān)。了解清楚HCMV包膜蛋白的結(jié)構(gòu),生物學(xué)功能,可為病毒的生物學(xué)機(jī)制提供新的認(rèn)識(shí),加深病毒與宿主間關(guān)系的理解。同時(shí)提供新的思路去設(shè)計(jì),研發(fā)抗人巨細(xì)胞病毒的相關(guān)藥物,并且對(duì)病毒疫苗的研制,具有重要的研究基礎(chǔ)和臨床意義。UL115(g L)蛋白是包膜蛋白的其中一員,UL115包膜蛋白作為外來(lái)抗原,除了具有良好的免疫反應(yīng)性外,還有免疫原性,可為制備相應(yīng)的抗原診斷單克隆抗體和開(kāi)發(fā)HCMV快速診斷試劑盒提供可選原料。因此,研究HCMV-UL115生物學(xué)功能對(duì)闡明HCMV致病機(jī)制及疫苗的研制是有重要價(jià)值的。本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)常規(guī)PCR技術(shù)克隆UL115基因,接著構(gòu)建UL115克隆重組菌株以及重組表達(dá)菌株,成功表達(dá)帶有組氨酸標(biāo)簽的UL115重組蛋白。經(jīng)實(shí)驗(yàn)鑒定,該重組蛋白在原核細(xì)胞內(nèi),以包涵體形式表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,淺層摸索優(yōu)化了表達(dá)菌株的表達(dá)條件。本實(shí)驗(yàn)的摸索的較好誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白的條件為:31℃,0.03 m M/L IPTG,誘導(dǎo)時(shí)間9 h。經(jīng)過(guò)鎳柱分離純化,獲得該重組蛋白。使用BCA法對(duì)初步純化的UL115重組蛋白進(jìn)行定量,該重組蛋白濃度可達(dá)到0.105μg/μl。本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建UL115重組蛋白原核表達(dá)體系,并且探索了表達(dá)體系表達(dá)條件,分離純化后獲得該重組蛋白。這為研究UL115蛋白單克隆抗體相關(guān)生物學(xué)功能打下基礎(chǔ),對(duì)診斷檢測(cè)試劑盒和疫苗的研制有重要意義,同時(shí)也為其他包膜蛋白的原核表達(dá)提供了相關(guān)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。
[Abstract]:In 1.2012 years, the detection of enterovirus 71 in the epidemic situation of hand foot and mouth disease in Sha Wo town and the type of enterovirus 71 (EV71) infected people usually accompanied by hand foot and mouth disease. In China, thousands of children infected with enterovirus 71 each year. The virus seriously affects the public health. The virological characteristics of enterovirus 71 are studied to prevent the disease. The outbreak of hand foot and mouth disease (HFMD) is critical. This study reported 105 children infected with hand foot and mouth disease in Sha Wo Town, Hubei, from September 2012 to October. The experiment was carried out by reverse transcriptional PCR, fluorescence quantitative PCR technology, isolation and culture of virus technology to detect the virus. The VP1 gene of enterovirus 71 was sequenced. At the same time, the phylogenetic tree was constructed to genotyping of enterovirus 71. Cases showed that more than 90% of the children were less than 9 years old, and the proportion of children aged 3-6 years old accounted for about 50%. The children were generally infected with enterovirus 71, which showed that most of the hand mouth diseases in Sha Wo town were infected by enterovirus 71 and caused related complications. Of the cases of hand foot and foot disease, 66 were diagnosed with enterovirus infection, 48 were infected with enterovirus 71, and the number of coxsackievirus type A16 infected children reached 16. The results of sequencing and phylogenetic tree analysis showed that the enterovirus 71 disease of Sha Wo town belonged to the C4 gene subtype. The geographical distance of Nanchang is far away, and the geographical distance from Wuhan is close. However, the phylogenetic analysis shows that the enterovirus 71 virus strain of the sand nest is close to the genetic distance of the enterovirus 71 virus strain of Nanchang, which had once had hand foot and foot disease, but it was similar to the enterovirus 71 of Wuhan, which had also had hand foot and mouth disease. The genetic distance of the virus is far away. Among the children infected with hand foot and mouth disease in Shawo Town, the proportion of the female children infected with enterovirus 71 is higher. However, in Wuhan and Nanchang, which had been infected by enterovirus, the proportion of the male children infected with enterovirus 71 was higher. Enteroviruses that cause the epidemic of hand foot and mouth disease. This experiment has great significance for the prevention and control of the outbreak of enterovirus,.2. human cytomegalovirus envelope protein UL115 prokaryotic expression and isolation and purification of human cytomegalovirus (HCMV), is a human herpes virus. For the immune system development and immunosuppressive patients It can cause related diseases and even death.HCMV has more than 20 enveloped proteins. They are located in the outermost of the virus. They are closely related to viral tendencies, adsorption, fusion, packaging, maturation and transmission of the progeny virus. Understanding the structure of HCMV envelope protein and biological power can provide new understanding for the biological mechanism of the virus and deepen the disease. The understanding of the relationship between poison and host. Meanwhile, it provides new ideas to design and develop anti human cytomegalovirus related drugs, and the development of the virus vaccine has important research basis and clinical significance.UL115 (g L) protein is one of the envelope proteins, UL115 coated egg white as an external antigen, in addition to a good immune response There are also immunogenicity, which can provide alternative raw materials for the preparation of the corresponding antigen diagnostic monoclonal antibody and the development of HCMV rapid diagnostic kit. Therefore, it is of great value to study the biological function of HCMV-UL115 to elucidate the pathogenesis of HCMV and the development of the vaccine. This experiment first cloned the UL115 gene by conventional PCR technology and then constructed the UL1. 15 the recombinant strain was cloned and the recombinant expression strain was successfully expressed. The recombinant protein with histidine label was expressed successfully. The recombinant protein was expressed in the prokaryotic cell and expressed in the form of inclusion body. On this basis, the expression condition of the expression strain was optimized in the shallow layer. The condition of the test was better to induce the expression of the recombinant protein. The recombinant protein was obtained by separation and purification by nickel column at 31 C, 0.03 m M/L IPTG and 9 h.. The recombinant protein was quantified by BCA method. The concentration of the recombinant protein could reach 0.105 mu g/ Mu L., and the recombinant protein prokaryotic expression system was successfully constructed, and the expression condition of the expression system was explored, and the purification of the recombinant protein was isolated and purified. The recombinant protein is obtained, which lays the foundation for the study of the biological functions of the monoclonal antibody of UL115 protein, and is of great significance for the development of diagnostic kit and vaccine. It also provides relevant experimental experience for the prokaryotic expression of other enveloped proteins.

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R725.1

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本文編號(hào)：1812913