本文選題：cTnI + 心臟舒張功能障礙��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分小鼠心臟cTnI基因時(shí)序表達(dá)規(guī)律及衰老小鼠心臟形態(tài)及功能目的:心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是調(diào)控心臟舒縮功能的重要心肌纖維蛋白,其正常表達(dá)對心臟功能特別是舒張功能的維持至關(guān)重要。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)心臟舒張功能障礙在老年人群中較為常見,可能與老年人心臟中cTnI含量下降有關(guān)。因此本部分研究將闡明小鼠出生至衰老期cTnI基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的時(shí)序性規(guī)律,并對衰老期小鼠心臟形態(tài)及功能進(jìn)行評測,為研究心臟舒張功能障礙奠定模型基礎(chǔ)。方法:1、以近交系健康清潔級c57小鼠為研究對象,時(shí)間點(diǎn)分別選取NB,2w,3m,10m及18m。獲取各組小鼠心臟組織進(jìn)行如下檢測:western blot檢測cTnI與c Tn T蛋白表達(dá)水平;Q-PCR檢測cTnI m RNA表達(dá)水平;2、以3m和18m小鼠為研究對象,利用高頻超聲檢測其心臟功能:左室短軸切面測量小鼠心臟收縮功能,分別檢測IVS、LVID及LVPW,計(jì)算左室EF及FS值;四腔心切面測量二尖瓣血流速度,評價(jià)E/A比值,IVRT及IVCT值;3、取3m及18m小鼠心肌組織,利用透射電鏡及HE染色分別對心肌超微結(jié)構(gòu)及大體心臟形態(tài)進(jìn)行觀察。結(jié)果:1、3m小鼠心臟中cTnI蛋白及m RNA水平顯著高于新NB、2w及18m;與10m間對比無顯著差異(NB,2w,18m vs.3m p0.05;10m vs.3m p0.05)。c Tn T蛋白在各組間表達(dá)水平無顯著差異(p0.05);2、IVS、LVID、LVPW、EF及FS值在3m及18m之間小鼠之間無顯著性差異(p0.05)。而18m組小鼠IVRT較3m組小鼠顯著延長,E/A比值顯著降低,p0.05;IVCT則在兩組間無顯著差異,p0.05;3、3m小鼠心臟超微結(jié)構(gòu)無明顯異常,18m小鼠心肌細(xì)胞Z線增粗、肌絲發(fā)生溶解及水樣變性、肌漿網(wǎng)擴(kuò)大。兩組小鼠心臟大體形態(tài)未見顯著異常。結(jié)論:1、小鼠心臟中cTnI蛋白及m RNA從新生表達(dá)開始升高,3m達(dá)高峰,18m表達(dá)回落;2、衰老期小鼠存在心臟舒張功能障礙,而收縮功能無明顯改變;3、衰老期小鼠心肌超微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯破壞。第二部分衰老期小鼠心臟舒張功能障礙中cTnI基因低表達(dá)的表觀遺傳機(jī)理目的:第一部分研究發(fā)現(xiàn)衰老期小鼠心臟cTnI蛋白及m RNA水平均顯著降低,提示cTnI下降可能發(fā)生在其自身轉(zhuǎn)錄水平。DNA甲基化通過對基因Cp G島及啟動(dòng)子CG位點(diǎn)的修飾調(diào)控基因表達(dá),而組蛋白乙酰化通過對基因染色質(zhì)的動(dòng)態(tài)調(diào)控而影響基因轉(zhuǎn)錄。因此本部分研究從DNA甲基化及組蛋白乙�；癁榍腥朦c(diǎn),探討衰老期小鼠心臟cTnI降低的表觀遺傳學(xué)機(jī)理。方法:研究對象同前。獲取小鼠心臟組織進(jìn)行如下檢測:1、利用MSP及BSP檢測cTnI啟動(dòng)子-1500bp左右Cp G島及cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵順式作用元件GATA及Mef2元件散在CG位點(diǎn)DNA甲基化水平;2、利用Ch IP-PCR技術(shù)檢測cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵順式作用元件區(qū)域組蛋白H3、H3K9、H3K27乙酰化水平;3、采用Ch IP-PCR方法檢測與cTnI關(guān)鍵順式作用元件對應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子GATA4和Mef2c的結(jié)合水平。1、各組小鼠cTnI啟動(dòng)子上游Cp G島和GATAMef2元件散在CG位點(diǎn)均存在DNA甲基化;但各組間cTnI基因Cp G島及啟動(dòng)子關(guān)鍵元件散在CG位點(diǎn)DNA甲基化水平無顯著差異,p0.05;2、3m組小鼠cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3及H3K9水平顯著高于NB、2w及18m組;與10m組間對比無顯著差異(NB,2w,18m vs.3m p0.05;10m vs.3m p0.05);3m組小鼠cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K27乙酰化水平顯著高于NB及2w,與10m及18m間對比無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(NB,2w vs.3m p0.05;10m,18m vs.3m p0.05);3、3m組小鼠心臟中GATA4和Mef2c與cTnI啟動(dòng)子GATAMef2元件結(jié)合水平顯著高于NB、2w及18m組;與10m組間對比無顯著差異(NB,2w,18m vs.3m p0.05;10m vs.3m p0.05)。結(jié)論:1、DNA甲基化可能并未參與cTnI基因時(shí)序性表達(dá);2、衰老期小鼠心臟cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K9乙�；斤@著降低,轉(zhuǎn)錄因子GATA4及Mef2c與之結(jié)合水平亦降低,提示cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3乙�；赡軈⑴c調(diào)控cTnI時(shí)序性表達(dá)。結(jié)果:第三部分EGCG上調(diào)cTnI基因表達(dá)改善衰老期小鼠心臟舒張功能目的:第二部分研究發(fā)現(xiàn)cTnI啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白低乙酰化可能是引起衰老期小鼠cTnI低表達(dá)的機(jī)理之一,近期研究發(fā)現(xiàn)EGCG(兒茶素)能上調(diào)組蛋白H3K9乙�；�,因此本部分實(shí)驗(yàn)選擇EGCG作為干預(yù)劑,明確體內(nèi)水平EGCG干預(yù)對老年小鼠心臟cTnI表達(dá)及心臟舒張功能的影響,并探討其內(nèi)在機(jī)理。方法:以16m老年期小鼠為研究對象,將其隨機(jī)分為空白對照組(16m)、16m+DMSO組、16m+EGCG組,給予16m小鼠EGCG處理,50mg/kg/d,腹腔注射,連續(xù)處理8周,待小鼠18m時(shí)停止干預(yù),以3m小鼠為對照進(jìn)行如下檢測:1、采用高頻超聲評價(jià)18m+EGCG小鼠心臟功能,與3m及18m組小鼠進(jìn)行比對;2、利用Western blot及Q-PCR檢測各組小鼠心臟中cTnI蛋白及m RNA表達(dá)水平;檢測各組心肌組織中HDAC1、HDAC2及HDAC3m RNA表達(dá)水平;3、利用Ch IP技術(shù)檢測cTnI啟動(dòng)子GATAMef2元件區(qū)域組蛋白H3K9乙�；�,HDAC1、HDAC2、HDAC3與關(guān)鍵元件結(jié)合水平,轉(zhuǎn)錄因子GATA4、Mef2c與cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件結(jié)合水平。結(jié)果:1、18m+EGCG組小鼠心臟IVTR較18m組顯著降低,E/A比值則顯著升高(p0.05),但與3m組無顯著性差異(p0.05);2、18m+EGCG組小鼠心臟cTnI m RNA和蛋白表達(dá)量較18m及18m+DMSO組顯著增加(p0.05),與3m組間無顯著差異(p0.05);3、18m及18m+DMSO組HDAC1及HDAC3 m RNA水平顯著低于18m+EGCG及3m組(p0.05),而HDCA2 m RNA水平在各組間無顯著差異(p0.05);4、18m+EGCG組小鼠cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K9乙酰化水平高于18m及18m+DMSO組(p0.05),與3m組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);5、18m+EGCG組及3m組HDAC1與cTnI啟動(dòng)子結(jié)合關(guān)鍵元件結(jié)合水平顯著低于18m及18m+DMSO組(p0.05),而HDAC2及HDAC3與cTnI啟動(dòng)子結(jié)合水平在各組間無顯著差異(p0.05);6、GATA4和Mef2c與cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件結(jié)合水平在18m+EGCG組及3m組高于18m及18m+DMSO組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1、EGCG干預(yù)可以顯著改善衰老小鼠心臟舒張功能;2、EGCG干預(yù)可能通過抑制心臟中HDAC1表達(dá),進(jìn)而降低其與cTnI啟動(dòng)子結(jié)合水平,引起衰老期小鼠心臟cTnI啟動(dòng)子關(guān)鍵元件區(qū)域組蛋白H3K9乙�；缴�,促進(jìn)對應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子與之結(jié)合,提升cTnI表達(dá)。
[Abstract]:The first part of the mouse heart cTnI gene sequential expression of cardiac morphology and function of aging mice and objective: cardiac troponin I (cTnI) is an important regulatory protein of myocardial fibers of cardiac diastolic and systolic function, the normal expression of cardiac function is critical to maintain diastolic function. Epidemiological studies have found that diastolic dysfunction is common in the elderly, may the content of cTnI in the elderly and heart decreased. This part of the study will elucidate the mice to regular sequential expression during senescence of cTnI gene transcription, and to evaluate the morphology and function of aging mice during the dirty heart, lay the foundation for the study of the model of cardiac diastolic dysfunction. Methods: 1 inbred healthy C57 mice as the research object, time points were selected NB, 2W, 3M, 10m and 18m. to obtain the heart tissue of mice were as follows: Western blot detection cT detection nI涓巆 Tn T铔嬬櫧琛ㄨ揪姘村鉤;Q-PCR媯，

本文編號：1771735