本文選題：先天性心臟病 + 法洛四聯(lián)癥　； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：先天性心臟病(簡稱先心病)是兒童最常見的先天性畸形之一,嚴(yán)重影響患兒生存率以及生存質(zhì)量,是新生兒早期死亡的主要原因之一。圓錐動脈干畸形是一類復(fù)雜型先心病,可以導(dǎo)致新生兒時期出現(xiàn)低氧血癥和難以糾正的酸中毒,引起患兒早期死亡。因此對于圓錐動脈干畸形發(fā)病機(jī)制的研究已成為熱點(diǎn)。研究證實(shí),圓錐動脈干畸形是22q11微缺失綜合征最常見的心臟表現(xiàn),而部分圓錐動脈干畸形患者存在22q11微缺失。位于22q11微缺失關(guān)鍵片段的HIRA基因在動物模型中的研究發(fā)現(xiàn)與圓錐動脈干畸形有關(guān)。然而,盡管22q11微缺失綜合征患者普遍表現(xiàn)有圓錐動脈干畸形,但是對于單純圓錐動脈干畸形與22q11微缺失的研究結(jié)果并不一致,此外,在人類圓錐動脈干畸形與22q11微缺失片段上的相關(guān)基因的研究還非常有限。本課題擬研究法洛四聯(lián)癥患兒HIRA基因啟動子區(qū)的基因序列、HIRA基因在右室流出道心肌組織中的mRNA和蛋白水平表達(dá)以及啟動子區(qū)甲基化狀態(tài),探討HIRA基因與法洛四聯(lián)癥的關(guān)系,為深入研究以法洛四聯(lián)癥為代表的圓錐動脈干畸形的發(fā)生機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和立論基礎(chǔ)。 第一部分法洛四聯(lián)癥患兒HIRA基因啟動子區(qū)序列分析 目的： 觀察法洛四聯(lián)癥患兒HIRA基因啟動子區(qū)的序列變化。 方法： 應(yīng)用PCR技術(shù)以及測序方法,選取100例法洛四聯(lián)癥患兒、200例心臟結(jié)構(gòu)正常的健康兒童的外周血,對HIRA基因第一外顯子上游1000bp左右的堿基序列進(jìn)行測序,分析HIRA基因啟動子區(qū)堿基序列改變與法洛四聯(lián)癥的關(guān)系。 結(jié)果： 檢測HIRA基因啟動子區(qū),在病例組中發(fā)現(xiàn)有4個雜合突變位點(diǎn),分別為-574GGA、-552GGC、-305AAG和-137CCT,這4個雜合突變各出現(xiàn)在1例法洛四聯(lián)癥患兒中,200例正常對照組中并未發(fā)現(xiàn),其中-137位點(diǎn)上結(jié)合有轉(zhuǎn)錄因子CP2。 在啟動子區(qū)還存在5種SNP,其中-630CCA在UCSC數(shù)據(jù)庫中未查到,可能為中國人群特有的多態(tài)位點(diǎn),其等位基因和基因型分布在病例組和對照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。另外4個SNP分別是-890AAG(rs1128399)、-736CCA(rs4585115)、-632TTG(rs2277837)和-458TTC(rs111802956),其等位基因和基因型分布在病例組與正常對照組間亦均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中-458位點(diǎn)結(jié)合有轉(zhuǎn)錄因子GATA-1、GATA-2和GATA-3。 小結(jié)： 1.法洛四聯(lián)癥患兒HIRA基因啟動子區(qū)存在的可能的突變位點(diǎn)包括：-574GGA、-552GGC、-305AAG和-137CCT; SNP位點(diǎn)包括：-890AAG-736CCA、-632TTG、-630CCA和-458TTC。 2.法洛四聯(lián)癥患兒HIRA基因啟動子區(qū)-137位點(diǎn)雜合突變(CCT)及-458位點(diǎn)SNP(TTC)可能會影響其相應(yīng)位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄因子：CP2(-137位點(diǎn))和GATA-1、 GATA-2、GATA-3(-458位點(diǎn)),在轉(zhuǎn)錄水平影響HIRA基因的表達(dá)。 第二部分法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中1HIRA基因表達(dá)水平的初步研究 目的： 觀察HIRA基因在法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中表達(dá)水平。 方法： 選取39例法洛四聯(lián)癥患兒右室流出道部位心肌組織,應(yīng)用real-time PCR方法檢測HIRA基因在mRNA水平的表達(dá)；其中12例樣本,應(yīng)用免疫組化的方法檢測HIRA基因在蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)果： 1.HIRA基因mRNA在法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中表達(dá)明顯低于對照組。 2. HIRA基因蛋白水平在法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中表達(dá)明顯低于對照組。 小結(jié)： 1.法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中HIRA基因的異常低表達(dá),提示其可能參與了法洛四聯(lián)癥的發(fā)病機(jī)制。 2.法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中HIRA基因在mRNA和蛋白水平的低表達(dá)提示存在轉(zhuǎn)錄水平的異常調(diào)控。 第三部分法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中HIRA基因甲基化水平的初步研究 目的： 觀察HIRA基因在法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中的甲基化水平,探討其與該基因低表達(dá)的關(guān)系。 方法： 選取12例法洛四聯(lián)癥患兒右室流出道部位心肌組織作為研究對象,通過亞硫酸氫鹽測序方法(bisulfite-PCR, BSP)觀察HIRA基因啟動子區(qū)在法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中甲基化水平變化。 結(jié)果： 本研究中HIRA基因啟動子區(qū)甲基化程度在TOF組與正常對照組中均呈現(xiàn)整體低甲基化狀態(tài)(整體甲基化百分率5%),組間整體及各CpG位點(diǎn)甲基化程度均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且各樣本甲基化程度與其相對應(yīng)的mRNA、蛋白水平的表達(dá)無明顯相關(guān)性。 小結(jié)： 法洛四聯(lián)癥患兒心肌組織中HIRA基因的低表達(dá)可能與該基因啟動子區(qū)甲基化水平無關(guān),可能受到其它調(diào)控因素的影響。
[Abstract]:Congenital heart disease (CHD) is one of the most common congenital malformations in children, seriously affected the survival rate and life quality of children, is one of the main causes of early neonatal death. Conotruncal defect is a kind of complicated congenital heart disease can cause neonatal period of hypoxemia and irreversible acidosis. Cause of early death in children. Therefore research on the pathogenesis of conotruncal malformations has become a hot topic. The research shows that, conotruncal defects are cardiac manifestations of 22q11 microdeletion syndrome is the most common, and the conic section artery stem malformation patients had 22q11 microdeletion of HIRA gene in 22q11. Deletion of key fragment in animal models the discovery and conotruncal defects. However, although the 22q11 microdeletion syndrome patients generally have conotruncal defects, but for simple conical artery Is not the same, the study of stem malformation with 22q11 deletion results in the study of related genes in human conotruncal defects and 22q11 micro deletion on is also very limited. This paper intends to study in children with tetralogy of Fallot HIRA gene promoter sequence of promoter region, HIRA gene expression in myocardium of the outflow tract and mRNA protein the level of methylation status in the promoter region of the right ventricle, and explore the relationship between HIRA gene and tetralogy of Fallot, for further study in conus artery of tetralogy of Fallot as the representative of the stem malformation occurrence mechanism and provide experimental basis and theoretical basis.
The first part is the analysis of the sequence of the promoter region of HIRA gene in children with tetralogy of Fallot
Objective:
Observation of tetralogy of Fallot in children with HIRA gene promoter sequence changes of the sub region.
Method錛，

本文編號：1762708